Polipéptidos novedosos implicados en respuesta inmunitaria.

Anticuerpo o fragmento del mismo, que se une al dominio extracelular de un polipeptido B7RP1,

en el que el polipeptido:

(a) esta codificado por una molecula de acido nucleico que comprende una secuencia de nucleotidos que codifica para el dominio extracelular del polipeptido expuesto en la figura 12A (SEQ ID NO: 17); o

(b) comprende el dominio extracelular de la secuencia de aminoacidos madura expuesta en la figura 12A (SEQ ID NO: 17)

en el que el dominio extracelular abarca desde cualquiera de los residuos 19, 20, 21, 22, 24 o 28 hasta el residuo 259 de la secuencia de aminoacidos mostrada en la figura 12A (SEQ ID NO: 17).

Polipéptidos novedosos implicados en respuesta inmunitaria Campo de la invención La presente invención se refiere a polipéptidos que están implicados en la activación de linfocitos T. Específicamente, la invención se refiere a polipéptidos coestimuladores de linfocitos T, a los ácidos nucleicos que codifican para los polipéptidos, a vectores de expresión y células huéspedes para la producción de los polipéptidos y a composiciones y usos en el tratamiento de enfermedades relacionadas con inmunosupresión y activación inmunitaria.

Antecedentes de la invención Para la generación de una respuesta inmunitaria de linfocitos T (células T) apropiada, deben proporcionarse dos señales a la célula T por células presentadoras de antígeno (CPA) . En primer lugar, debe presentarse un antígeno al receptor de células T (TCR) por medio de un complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) , en un acontecimiento que determina la especificidad. En segundo lugar, debe suministrarse una señal coestimuladora, independiente de antígeno mediante el acoplamiento de miembros de la familia 87 en la CPA con la proteína CD28 en células T. Una respuesta inmunitaria productiva conduce a proliferación, diferenciación, expansión clonal y efecto o función. En ausencia de la segunda señal coestimuladora, las células T experimentan un estado de falta de receptividad específica de antígeno de larga duración, denominado anergia.

Las células T inician la respuesta inmunitaria, median en funciones efectoras específicas de antígeno y regulan la actividad de otros leucocitos secretando citocinas. El receptor de células T (TCR) distingue la célula T de otros linfocitos y puede unirse al antígeno sólo cuando se presenta por la CPA dentro del contexto de un CMH. La actividad funcional de una célula T particular puede correlacionarse con la expresión de antígenos de membrana, tales como CD4 y CD8. Por ejemplo, células T CD4+ funcionan generalmente como células T auxiliares ("he/per') (TH) Y están restringidas por CMH de clase 11, mientras que las células CD8+ funcionan generalmente como células T citotóxicas (Te) y están restringidas por CMH de clase 1.

Los polipéptidos coestimuladores de células T potentes que se han identificado previamente incluyen los polipéptidos denominados 87.1 (Freeman et al. J. Immunology 143, 2714-2722 (1989) , Freeman et al. Jour. Expt. Med. 174, 625-31 (1991» y 87.2 (Freeman et al. Science 262, 909-911 (1993) Y Freeman et al. Jour. Expt. Med. 178, 2185-2192 (1993», (o CD80 y CD86, respectivamente) . Estos polipéptidos se expresan de manera o bien inducible o bien constitutiva en diversas CPA y son ligandos unidos a la membrana para CD28 y CTLA-4, respectivamente, en células T. CD28 (Aruffo y Seed Proc. Natl. Acad. Sci. 84, 8573-8577 (1987) Y Gross et al. J. Immun. 144. 3201-3210 (1990» se expresa en células T en reposo y media en una señal coestimuladora positiva. Se induce la expresión de CTLA-4 (8runet et al. Nature 328, 267-270 (1987) Y Dariavach et al. Eur. Jour. Immun. 18, 1901-1905 (1988» tras la activación de células T y regula de manera negativa la señal de CD28, debido a su afinidad de unión superior por 87.1 y 87.2. Ratones sin el gen de CTLA-4 presentan niveles drásticamente altos de células T, puesto que el mecanismo de desactivación de la señal de proliferación se ve alterado en ausencia de CTLA-4. Este fenotipo demuestra claramente el efecto inhibidor principal que tiene la proteína coestimuladora CTLA4 sobre la proliferación de células T. Ratones que carecen de CD28 o 87.1 o 87.2 tienen un fenotipo menos grave, lo que indica que pueden existir rutas alternativas para la coestimulación de células T.

Ha habido un considerable interés en la ruta de CD28/CTLA-4 como medio para regular la proliferación y activación de células T. Una proteína quimérica que contiene la parte extracelular de CTLA-4 fusionada a Fc humano tiene fuertes efectos inmunosupresores y se ha estudiado en una variedad de entornos clínicos. También se han evaluado anticuerpos frente a proteínas 87.1 y 87.2 para indicaciones similares en el área de la inmunosupresión. Anticuerpos anti-CTLA-4 han mostrado utilidad en la promoción de la activación de células T. Además, la terapia génica de 87.1 y 87.2 ha mostrado ser muy prometedora en el área de la inmunoterapia contra el cáncer.

Hasta ahora, CD28, CT LA-4 , 87.1 Y 87.2 están implicadas en una ruta coestimuladora de células T individual. Dada la capacidad de modulación de una respuesta inmunitaria regulando la coestimulación de células T, sería deseable identificar otros miembros de la misma ruta coestimuladora de células T o separada que puedan tener propiedades ventajosas en la regulación de la respuesta inmunitaria y función de células T del huésped.

Por consiguiente, es un objeto de la invención proporcionar polipéptidos novedosos para la estimulación de la actividad y/o proliferación de células T. Es un objeto adicional de la invención usar los polipéptidos novedosos para la prevención y el tratamiento de trastornos inmunitarios mediados por células T.

Sumario de la invención Sorprendentemente, se han identificado dos polipéptidos novedosos de una ruta coestimuladora de células T. Los polipéptidos representan una pareja de ligando-receptor en una ruta coestimuladora única que parece ser distinta de la ruta que consiste en las proteínas previamente descritas CD28, CTLA-4, 87.1 Y 87.2. Los polipéptidos se denominan proteína 1 relacionada con CD28, o CRP1 , y proteína 1 relacionada con 87, o 87RP1.

El contenido de la invención se refiere a polipéptidos B7RP1 y polipéptidos relacionados.

La invención se define mediante las reivindicaciones.

Se abarcan por la invención vectores de expresión y células huésped para la producción de los anticuerpos que se unen a polipéptidos B7RP1 ya polipéptidos relacionados y ensayos para detectar la unión de B7RP1 y polipéptidos relacionados con B7RP1 a CRP1 y polipéptidos relacionados con CRP1. También se dan a conocer en el presente documento composiciones farmacéuticas que comprenden CRP1 o polipéptidos relacionados con CRP1 y B7RP1 o polipéptidos relacionados con B7RP1. También se dan a conocer métodos para identificar compuestos que interaccionan con CRP1 o B7RP1 así como ensayos para determinar si tales compuestos son agonistas o antagonistas de la actividad de CRP1 y B7RP1.

Los polipéptidos CRP1 Y B7RP1 están implicados en la coestimulación y proliferación de células T. Los polipéptidos CRP1 Y B7RP1, agentes de unión selectiva de los mismos y agonistas y antagonistas de los mismos, pueden ser útiles para el diagnóstico, la prevención y el tratamiento de enfermedades relacionadas con el control de respuestas de células T.

Los polipéptidos CRP1 Y B7RP1, agentes de unión selectiva de los mismos y agonistas y antagonistas de los mismos, pueden ser útiles para el diagnóstico, la prevención y el tratamiento de trastornos inmunitarios, para o bien estimular una respuesta inmunitaria insuficiente o bien reducir o inhibir una respuesta inmunitaria exagerada o inapropiada. El trastorno inmunitario puede estar mediado directa o indirectamente por células T.

La descripción proporciona el tratamiento, la prevención o la mejora de un trastorno mediado por células T que comprende administrar a un animal un polipéptido B7RP1. La descripción también proporciona un método de diagnóstico de un trastorno mediado por células T o una susceptibilidad a un trastorno mediado por células T en un animal que comprende determinar la presencia o cantidad de expresión de un polipéptido CRP1 o B7RP1; Y diagnosticar un trastorno mediado por células T o una susceptibilidad a un trastorno mediado por células T basándose en la presencia o cantidad de expresión del polipéptido. Normalmente, un trastorno mediado por células T es un trastorno inmunitario que puede estar mediado directa o indirectamente por células T. El animal es preferiblemente un mamífero y más preferiblemente un ser humano. La descripción también proporciona un método de identificación de una molécula de prueba que se une a un polipéptido CRP1 o B7RP1 que comprende poner en contacto el polipéptido con un compuesto de prueba y determinar el grado de unión del polipéptido al compuesto de prueba. El método puede usarse para identificar agonistas y antagonistas del polipéptido CRP1 y/o B7RP1.

Pueden usarse antagonistas de polipéptidos CRP1 y/o B7RP1 como agentes inmunosupresores para muchas indicaciones, incluyendo trastornos autoinmunitarios (tales como artritis reumatoide, psoriasis, esclerosis múltiple, diabetes y lupus eritematoso sistémico) , síndrome de choque tóxico, trasplante de médula ósea y órganos, enfermedad... [Seguir leyendo]

, . Anticuerpo o fragmento del mismo, que se une al dominio extracelular de un polipéplido 87RP1 , en el que

el polipéplido:

(a) está codificado por una molécula de ácidcl nucleico que comprende una secuencia de nucleótldos que

s codifica para el dominio extracelular del polipéptido expuesto en la figura i2A (SEO ID NO: 17) ; o

(b) comprende el dominio extracelular de la secuencia de aminoácidos madura expuesta en la figura i2A

(SEO ID NO: 17)

en el que el dominio exlracelular abarca desde cualquiera de los residuos 19, 20, 21, 22, 24628 hasta el

residuo 259 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura i2A (SEO ID NO: 17) .

10 2. Anticuerpo o fragmento del mismo según la reivindicación 1, que es un anticuerpo monoclonal, un

anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo injertado con CDR o un fragmento det mismo

que se une al dominio extracelular de un polipéptido B7RP1 .

3. Anticuerpo o fragmento del mismo segun la reivindicación 1, que inhibe la unión del polipeptido de la

reivindicación 1 (a) o la reivindicación l (b) al polipéplido maduro expuesto en la figura 13A.

lS 4. Anticuerpo o fragmento del mismo segun la reivindicación 1, que disminuye la actividad ccestimuladora de

de células T mediada por B7RP-l .

5. Uso de un antagonista para la preparación de un medicamento para suprimir una respuesta inmunitaria, en

el que el antagonista es el anticuerpo o fragme~nto del mismo según la reivindicación 1.

6. Antagonista para su uso en la supresión de una respuesta inmunitaria, en el que el antagonista es el

20 anticuerpo o fragmento del mismo según la reivindicación 1.

7. Uso segun la reivindicación 5 para el tratamiento de trastornos autoinmunitarios.

8. Antagonista segun la reivindicación 6 para su uso en el tratamiento de trastornos autoinmunitarios.

9. Uso según la reivindicación 7 o antagonista SEtgún la reivindicación 8, en el que el trastorno autoinmunitario

2S es uno cualquiera de artritis reumatoide, psoriasis, esclerosis múltiple, diabetes y lupus eritematoso sistémico.

10. Uso de un antagonista para la preparación ele un medicamento para tratar una enfennedad inflamatoria

crónica, en el que el antagonista es el anticuerpo o fragmento del mismo segun la reivindicación 1.