Perfeccionamientos introducidos en el objeto de la solicitud de patente española nº P200100995 por "kit para el diagnóstico de hipersensibilidad frente a alérgenos del polen del olivo y su utilización".

Dichos perfeccionamientos se caracterizan porque el kit comprende un conjunto de extractos de polen de olivo individualizados, en donde cada uno de dichos extractos es un extracto de polen de olivo procedente de una variedad definida de olivo y está separado del resto de extractos. De aplicación en el sector médico-farmacéutico, especialmente, en el campo de los análisis clínicos y la inmunoterapia. Dicho kit mejorado puede ser utilizado en el diagnóstico de la alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo y en el diseño de vacunas hiposensibilizantes personalizadas para su administración a un sujeto para tratar la alergia al polen de una o varias variedades definidas de olivo

Perfeccionamientos introducidos en el objeto de la solicitud de patente española nº P 200100995 por: "Kit para el diagnóstico de hipersensibilidad frente a alérgenos del polen del olivo y su utilización".

Campo de la invención

La invención se encuadra dentro del sector médico-farmacéutico, especialmente, en el campo de los análisis clínicos y la inmunoterapia. En general, la invención se relaciona con un sistema para el diagnóstico de alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo basado en el análisis de la reactividad de un sujeto frente a un conjunto de extractos de polen de olivo individualizados procedentes de diferentes variedades definidas de olivo. A partir del diagnóstico obtenido pueden elaborarse vacunas hiposensibilizantes personalizadas para su administración a un sujeto con el fin de tratar dicha alergia al polen de una o varias variedades definidas de olivo.

Antecedentes de la invención

En la solicitud de patente española nº P200100995 puede encontrarse una amplia referencia a sistemas convencionales para el diagnóstico y tratamiento de la alergia al polen de olivo. Dicha solicitud de patente española describe y reivindica un kit para el diagnóstico de hipersensibilidad frente a alérgenos del polen del olivo caracterizado porque dicho kit incluye una mezcla de extractos de polen procedentes de diversas variedades del olivo (Olea europaea), de acebuche, y de otros miembros de la familia Oleaceae (Fraxinus, Ligustrum, Phillyrea, Forsytia, Jasminum, Syringa), escogidas específicamente entre las variedades de un área geográfica.

El olivo (Otea europaea L.) es uno de los cultivos de mayor importancia en el área Mediterránea, donde ha sido cultivado durante milenios. El cultivo extensivo de esta planta ha conducido a la aparición de un germoplasma extremadamente amplio y variado. A modo ilustrativo merece la pena citar que sólo en el Sur de España se han identificado más de 150 cultivares diferentes cuya distribución territorial ha sido caracterizada [Barranco D. Variedades y Patrones. In: Barranco D, Fernández-Escobar D, Rallo L, editors. El cultivo del olivo. Madrid: Junta de Andalucía/Ediciones Mundi-Prensa, 1997;61-79; Barranco D, Rallo L. Las variedades de olivo cultivadas en Andalucía. Madrid: Ministerio de Agricultura-Junta de Andalucía. 1984]. Hasta muy recientemente, la caracterización de los cultivares de olivo se ha realizado primariamente de acuerdo a parámetros morfológicos y agronómicos. Sin embargo, está emergiendo la utilización de técnicas moleculares con la finalidad de hacer esta caracterización varietal mucho más fiable, rápida y sencilla.

El polen del olivo es uno de los más importantes agentes causales de fenómenos de alergia (polinosis) estacional en humanos, más concretamente de las alergias de tipo I, en aquellos países en los que esta planta está ampliamente distribuida. De hecho, la alergia al polen de olivo representa actualmente un tópico de salud pública. Los síntomas asociados a esta alergia van desde un síndrome irritativo de vías altas, con estornudos, rinorrea, obstrucción de las vías nasales, faringitis con distintas manifestaciones clínicas en el caso de la rinitis alérgica frecuente y cuadros de conjuntivitis alérgica hasta los más graves correspondientes al asma. La expresión "alergia al polen de olivo", incluye, en general, hbox{no solo alergia al polen de olivo de las variedades de olivo cultivadas sino también a olivo silvestre (acebuche).}

Algunas de las proteínas del polen del olivo (Ole e 1, Ole e 2, Ole e 3, Ole e 4, Ole e 5, Ole e 6, Ole e 7, Ole e 8, Ole e 9 y Ole e 10) son capaces de unirse a anticuerpos IgE humanos, y, por tanto, pueden ser catalogadas como alérgenos. Las proteínas Ole e 1 y Ole e 2, en particular, la Ole e 1, son los alérgenos mayoritarios del polen de olivo y son las responsables de la gran mayoría de los casos de alergia al polen de olivo.

El diagnóstico de la hipersensibilidad al polen de olivo incluye una serie de test específicos entre los que se incluyen los denominados SPTs (skin prick tests), pruebas intradérmicas, las pruebas de tipo RAST (radioallergosorbent test), pruebas para la determinación de IgE sérica específica, las pruebas de liberación de histamina, y las pruebas de provocación conjuntival, nasal o bronquial [The Merck Manual of Diagnosis and Therapy. 17th. Edition. Beers MH and Berkow R Eds. Internet Edition: Medical Services USMEDSA NSHH. www.merck.com/pubs/mmanual/].

El tratamiento de los pacientes con alergia al polen de olivo mediante inmunoterapia con alérgenos (también denominada vacunación con alérgenos, hiposensibilización o desensibilización) constituye un tratamiento de elección aun cuando la exposición al agente alergénico sea reducida (tal es el caso de numerosos pólenes), y el tratamiento terapéutico sea capaz de reducir suficientemente los síntomas. Este tipo de tratamientos se basa en la inyección repetida del alérgeno de forma subcutánea en dosis gradualmente crecientes consiguiéndose a largo plazo una prevención de la progresión de la hiperreactividad bronquial.

Tanto la diagnosis como el tratamiento de la alergia al polen del olivo se basan actualmente en la utilización de extractos proteicos obtenidos a partir de dicho polen mediante diversos procedimientos. Aunque la mayoría de los pacientes son alérgicos a un número limitado de alérgenos "mayoritarios" del polen de olivo, existen numerosos alérgenos distintos en una misma fuente. En realidad, puede asumirse que cualquier proteína del material alergénico puede actuar potencialmente como un alérgeno. Por tanto, un aspecto importante a considerar en la determinación de la calidad de las vacunas alergénicas radica en que posean la mayor complejidad posible en su composición. Otro aspecto a tener en cuenta, dada la complejidad de los extractos alergénicos y la variabilidad de los procedimientos de extracción y del material de partida, radica en la estandarización de los extractos que van a ser usados. Dicha estandarización se realiza a nivel internacional según recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud (OMS) a través de la Unión Internacional de Sociedades de Inmunología, Subcomité de Estandarización de Alérgenos [WHO Expert Committee on Biological Standardisation. Guidelines for the preparation and establishment of reference materials and reference reagents for biological substances. WHO Technical Report Series No. 626, 1978].

Diversos estudios han puesto de manifiesto la existencia de una elevada variabilidad en el contenido alergénico del polen del olivo (y en consecuencia en los extractos producidos a partir de dicho polen) procedente de diversas distribuciones geográficas, y, en concreto, de distintas variedades de olivo. En la gran mayoría de los estudios publicados, el material de trabajo utilizado corresponde a polen maduro de origen indeterminado. Existe, sin embargo, un número muy limitado de trabajos que han utilizado polen de olivo en los que se ha realizado, al menos, una discriminación en cuanto a la distribución geográfica de la fuente de material. En dichos estudios se han observado claras diferencias en cuanto a la reactividad del suero de pacientes alérgicos españoles frente a extractos de polen procedente de California [Boluda L, Alonso C and Fernández-Caldas E. Purification, characterization, and partial sequencing of two new allergens of Olea europaea. J. Allergy Clin. Immunol. 1998;101:210-216], así como diferencias cuantitativas en los niveles de ciertos alérgenos entre extractos de diversas procedencias en España e igualmente de California [Martínez, A, Asturias JA, Palacios R, Sanz ML, Sánchez G, Oehling A, Martínez J. Identification of a 36-kDa olive-pollen allergen by in vitro and in vivo studies. Allergy 1999;54:584-592]. En este sentido, pueden considerarse pioneros los estudios realizados en Israel [Waisel Y, Geller- Bernstein C, Keynan N, Arad G. Antigenicity of the pollen proteins of various cultivars of Olea europaea. Allergy 1996;51: 819-825; y Geller-Bernstein C, Arad G, Keynan N, Lahoz C, Cardaba B, Waisel Y. Hypersensitivity to pollen of Olea europaea in Israel. Allergy 1996;51:356-359] teniendo como referencia la utilización de polen de olivo de diferentes variedades autóctonas y extranjeras. Estos estudios han mostrado claras diferencias en cuanto a la composición cuantitativa/cualitativa de alérgenos en dichos extractos así como en cuanto a la reactividad de los sueros de pacientes.

El empleo de extractos proteicos de polen de olivo utilizados habitualmente tanto con fines de diagnóstico como de...

1. Perfeccionamientos introducidos en el objeto de la solicitud de patente española nº P200100995 por "Kit para el diagnóstico de hipersensibilidad frente a alérgenos del polen del olivo y su utilización", caracterizados porque dicho kit comprende, al menos, un extracto de polen de olivo individualizado, en donde cada uno de dichos extractos de polen de olivo procede de una variedad definida de olivo diferente y está separado del resto de extractos de polen de olivo.

2. Un kit que comprende, al menos, un extracto de polen de olivo individualizado, en donde cada uno de dichos extractos de polen de olivo procede de una variedad definida de olivo diferente y está separado del resto de extractos de polen de olivo.

3. Kit según la reivindicación 2, en el que dichos extractos de polen de olivo individualizados están estandarizados.

4. Kit según la reivindicación 2, en el que los extractos de polen de olivo individualizados proceden de diferentes variedades definidas de olivo presentes en una determinada área geográfica.

5. Kit según la reivindicación 2, en el que los extractos de polen de olivo individualizados proceden de variedades definidas de olivo dominantes de un área geográfica determinada y, si se desea, de variedades de olivo secundarias de dicha área geográfica.

6. Empleo de un kit según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en un método in vivo o in vitro para diagnosticar la alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo.

7. Empleo según la reivindicación 6, en el que dicho método in vivo para diagnosticar la alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo en un sujeto comprende el empleo de pruebas de tipo Skin Prick Test (SPT), pruebas intradérmicas, o pruebas de provocación nasal, oral, bronquial o conjuntival.

8. Un método in vitro para diagnosticar la alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo en un sujeto, que comprende determinar, en una muestra biológica de dicho sujeto, el título de IgE frente a alérgenos presentes en cada uno de los extractos de polen de olivo contenidos en un kit según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5.

9. Método según la reivindicación 8, que comprende la realización de pruebas in vitro seleccionadas entre inmunoblots, inmunodots, inmunoensayos quimioluminiscentes, RIST [radioimmunosorbent test (ensayo de radioinmunoabsorción)], PRIST [paper radioimmuno-sorbent test (ensayo de radioinmunoabsorción en papel)], RAST [radioallergosorbent test (ensayo de radioalergoabsorción)], ELISA (ensayo de inmunoabsorción con enzima ligada), RIA (radioinmunoensayo), FEIA [fluorescent enzyme immune assay (inmunoensayo enzimático fluorescente)], determinación de la activación de células T, activación de basófilos, liberación de histamina, y combinaciones de las mismas.

10. Un método in vitro para (i) determinar la evolución del curso de la alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo en un sujeto, o para (ii) evaluar la eficacia de un tratamiento contra la alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo en un sujeto, que comprende determinar, en una muestra biológica de dicho sujeto, el título de IgE y el título de IgG, frente a alérgenos presentes en cada uno de los extractos de polen de olivo contenidos en el kit de la invención.

11. Empleo de un kit según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en un método in vitro para (i) determinar la evolución del curso de la alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo en un sujeto, o para (ii) evaluar la eficacia de un tratamiento contra alergia al polen de olivo de una variedad definida de olivo en un sujeto.

12. Empleo de un kit según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en la elaboración de vacunas personalizadas, específicas, de hiposensibilización frente a alérgenos del polen de olivo de variedades definidas de olivo.

13. Empleo según la reivindicación 12, en el que dicha vacuna personalizada comprende, además de dicho conjunto de extractos de polen de olivo individualizados, uno o más extractos alergénicos de una o más fuentes distintas a polen de olivo.