Péptidos con permeabilidad celular inhibidores de la ruta de transducción de señales de la JNK.

Utilización de cualquiera de los péptidos que incluyen la SEQ ID NO:

22 o que es la SEQ ID NO: 24, o de péptidos que tienen al menos un 95% de identidad de secuencia con estos péptidos, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de un trastorno neuronal mediante la inhibición de la muerte celular neuronal en un sujeto, donde el sujeto sufre o está en riesgo de desarrollar un trastorno neuronal y donde el trastorno neuronal es un trastorno neurodegenerativo seleccionado de entre esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, epilepsia, esclerosis múltiple y enfermedad de Huntington.

Péptidos con permeabilidad celular inhibidores de la ruta de transducción de señales de la JNK

CAMPO DE LA INVENCIÓN

En general, esta invención se refiere a inhibidores de la proteína-quinasa y, de forma más específica, a inhibidores de la proteína-quinasa c-Jun amino terminal quinasa.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La quinasa c-Jun amino terminal (JNK) es un miembro del grupo activado por estrés de las proteínas quinasas mitogeno-activadas (MAP) . Estas quinasas están implicadas en el control del crecimiento y de la diferenciación celular, y, en general, en la respuesta de las células a los estímulos ambientales. La ruta de transducción de señales de la JNK es activada en respuesta al estrés ambiental y mediante varios tipos de receptores de la superficie celular. Estos receptores pueden incluir los receptores de citoquinas, receptores de serpentinas y receptor de la tirosina-quinasa. En las células de mamíferos, la JNK está involucrada en procesos biológicos tales como la transformación oncogénica y en la mediación de respuestas adaptivas al estrés ambiental. La JNK se ha asociado también a la modulación de las respuestas inmunes, incluidas la maduración y diferenciación de las células inmunes, así como a la muerte celular programada en células identificadas como para ser destruidas por el sistema inmune.

La WO 98/49188 describe péptidos inhibidores de la proteína JNK1 para el tratamiento de trastornos neuronales, por ejemplo la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer o daños debidos a isquemias/reperfusión.

La WO 01/27268 describe inhibidores de la proteína JNK1 para el tratamiento de la isquemia y reperfusión y para prevenir la muerte celular pancreática.

La WO 98/44106 describe el uso de polipéptidos IB1 para el tratamiento, entre otros, de la diabetes, la isquemia y o de enfermedades neurológicas como la enfermedad de Parkinson.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se base en parte en el descubrimiento de péptidos que son inhibidores eficaces de las proteínas JNK. Los péptidos mencionados aquí como inhibidores peptídicos de JNK disminuyen los efectos proliferativos en las células quot;aguas abajoquot; de la quinasa c-Jun amino terminal (JNK) .

En consecuencia, la invención incluye el uso de péptidos inhibidores de JNK (“péptidos JNKI”) , tal como se define en la reivindicación 1.

Los péptidos inhibidores de JNK pueden estar presentes como polímeros de L-aminoácidos. Alternativamente, los péptidos inhibidores pueden estar presentes como polímeros de D-aminoácidos También se incluyen en la descripción composiciones farmacéuticas que incluyen los péptidos de unión a JNK así como anticuerpos que reconocen específicamente los péptidos de unión a JNK.

La invención también proporciona un método para inhibir la expresión de una JNK-quinasa en una célula.

En otro aspecto, la descripción proporciona un método para tratar una patofisiología asociada a la activación de JNK en un o más células. Por ejemplo, las células diana pueden ser células animales cultivadas, células humanas o microorganismos. El suministro se puede llevar a cabo in vivo mediante la administración de un péptido quimérico a un individuo en el cual se va a usar con fines de diagnóstico, prevención o terapéuticos. Las células diana pueden ser células in vivo, esto es células que componen los órganos o tejidos de animales o humanos vivos, o microorganismos que se encuentran en animales o humanos vivos.

La descripción también proporciona un método para prevenir o tratar la pérdida de audición en un sujeto. El método incluye administrar al sujeto péptidos bioactivos con permeabilidad celular que previenen el daño a los estereocilios de las células ciliadas, la apoptosis de las células cicliadas o la apoptosis neuronal. Un péptido bioactivo con permeabilidad celular es, por ejemplo, un péptido inhibidor de JNK. Preferentemente, el péptido bioactivo con permeabilidad celular tiene las SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 6, 11, 12, 13, 14, 15 o 16.

La pérdida de audición puede ser causada por un trauma acústico. Así, en un aspecto, el péptido se administra antes de que el sujeto esté expuesto a un trauma acústico. En otro aspecto, el péptido es administrado después de que el sujeto ha sido expuesto a un trauma acústico. El trauma acústico puede ser,

por ejemplo, de al menos 90 dB SPL. Alternativamente, la pérdida de audición está provocada por un tratamiento con antibióticos. Así, en un aspecto, el péptido se administra antes de que el sujeto esté expuesto a un antibiótico. En otro aspecto, el péptido se administra después de que el sujeto ha estado expuesto a un antibiótico. El antibiótico es, por ejemplo, un aminoglicósido.

La pérdida de audición puede ser causada por un agente quimioterapéutico. Así, en un aspecto, el péptido se administra antes de que el sujeto esté expuesto a un agente quimioterapéutico. En otro aspecto, el péptido se administra después de que el sujeto ha estado expuesto a un agente quimioterapéutico.

La descripción además proporciona un método para prevenir o tratar la muerte neuronal o lesiones cerebrales e un sujeto. El método incluye administrar al sujeto un péptido bioactivo con permeabilidad celular que previene el daño a las neuronas o la apoptosis neuronal. Un péptido bioactivo con permeabilidad celular es, por ejemplo, un péptido inhibidor de JNK (JNKI) . Preferentemente, el péptido bioactivo con permeabilidad celular tiene las SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 11, 12, 13, 14, 15, 16 o 21-28.

La muerte neuronal o las lesiones cerebrales están provocadas por una isquemia cerebral. Así, en un aspecto, el péptido se administra antes de que el sujeto sufra un evento isquémico. En otro aspecto, el péptido se administra después de que el sujeto sufre un evento isquémico. El evento isquémico es, por ejemplo, agudo o crónico.

La muerte neuronal o las lesiones cerebrales están causadas por otros mecanismos excitotóxicos. Así, en un aspecto, el péptido se administra antes de que el sujeto experimente un mecanismo excitotóxico. En otro aspecto, el péptido se administra después de que el sujeto experimenta un mecanismo excitotóxico. El mecanismo excitotóxico puede ser, por ejemplo, un daño cerebral isquémico/hipóxico, daños cerebrales traumáticos, muerte neuronal derivada de ataques epilépticos y diversos trastornos neurodegenerativos, como la Enfermedad de Alzheimer.

La descripción también contempla un método para inhibir la muerte celular de los islotes pancreáticos, incluyendo el método poner en contacto una célula del islote pancreático con un péptido bioactivo con permeabilidad celular de forma que se inhiba tal muerte celular pancreática. Un péptido bioactivo con permeabilidad celular es, por ejemplo, un péptido inhibidor de JNK. Preferentemente, el péptido bioactivo con permeabilidad celular tiene las SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 11, 12, 13, 14, 15, 16 o 21-28. El método puede incluir además poner en contacto la célula con colagenasa.

Adicionalmebte, la descripción también contempla un método para inhibir la muerte celular de los islotes pancreáticos en un sujeto mediante la administración al sujeto de un péptido bioactivo con permeabilidad celular de forma que se inhiba tal muerte celular pancreática. Un péptido bioactivo con permeabilidad celular es, por ejemplo, un péptido inhibidor de JNK. Preferentemente, el péptido bioactivo con permeabilidad celular tiene las SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 11, 12, 13, 14, 15, 16 o 21-28. El método puede incluir además poner en contacto la célula con colagenasa. En una realización, el péptido bioactivo con permeabilidad celular se administra antes de que el sujeto esté expuesto a una citoquina pro-inflamatoria. En otra realización, el péptido bioactivo con permeabilidad celular se administra después de que el sujeto se haya expuesto a una citoquina pro-inflamatoria En algunos aspectos, la administración de los péptidos puede realizarse mediante cualquier vía de administración seleccionada de entre administración intraauricular, intraperitoneal, nasal, intravenosa, oral y en parche.

Entre las ventajas proporcionadas por la invención, una de ellas es que los péptidos inhibidores de JNK son pequeños y se pueden producir fácilmente en cantidades masivas y con gran pureza. Los péptidos inhibidores son también resistentes a la degradación intracelular y son escasamente inmunogénicos. En consecuencia, los péptidos se adaptan bien a aplicaciones in vitro e in vivo en las cuales se desea la inhibición de la expresión de JNK.

Salvo definido de otro modo, todos los términos... [Seguir leyendo]

1. Utilización de cualquiera de los péptidos que incluyen la SEQ ID NO: 22 o que es la SEQ ID NO: 24,

o de péptidos que tienen al menos un 95% de identidad de secuencia con estos péptidos, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de un trastorno neuronal

mediante la inhibición de la muerte celular neuronal en un sujeto, donde el sujeto sufre o está en riesgo de desarrollar un trastorno neuronal y donde el trastorno neuronal es un trastorno neurodegenerativo seleccionado de entre esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, epilepsia, esclerosis múltiple y enfermedad de Huntington.

2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque el péptido se administra mediante una vía de administración seleccionada de entre el grupo consistente en intraauricular, intraperitoneal, nasal, intravenosa, oral o mediante parches.

6HFXHQFLDV3HSW¯GLFDV+XPDQDVGH5DWμQ\GH5DWD

6HFXHQFLDV*HQ"ULFDV+XPDQDVGH5DWμQ\GH5DWD

Efectos del Constructo GFP-JBD23 sobre la Apoptosis de Células-1 Pancreáticas

CÉLULAS APOPTÓTICAS (%)

Efectos de los Péptidos TAT-IB sobre la Fosforilación Mediada por JNK

Efectos de los Péptidos TAT-IB sobre la Fosforilación Mediada por JNK

Inhibición de la Fosforilación de L-TAT-IB por JNKs Recombinantes

Inhibición In Vivo de la Fosforilación de c-Jun por los Péptidos TAT-IB

Supresión de la Fosforilación del Factor de Transcripción JNK por los Péptidos L-TAT-IB1

Radioprotección contra la Radiación Ionizante por los Péptidos TAT-IB1

Peso Edema + Eritema

LDH (unidades relativas)

Volumen de la lesión (mm3) LESIÓN (% del hemisferio)