Péptidos de la proteína humana de estrés térmico de 60 kDa que constituyen epitopes para células T,

así como péptidos derivados deellos, los cuales están modificados en los sitios de contacto con la molécula MHC, útiles para inducir mecanismos de tolerancia periférica, en particular mecanismos inductores de anergia o mediados por clones de células T regulatorias en pacientes con Artritis Reumatoide. La invención también refiere composiciones farmacéuticas que comprenden tales péptidos para tratamiento de la Artritis Reumatoide.

Péptidos y derivados tipo APL de Hsp60 y composiciones farmacéuticas

Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos de la proteína humana de choque térmico de 60 kDa (abreviada hHsp60) y Ligandos Peptídicos Alterados (abreviados APL) derivados de los mismos. Además, la invención se refiere a las composiciones farmacéuticas que comprenden dichos péptidos para el tratamiento de la Artritis Reumatoide (RA) .

Antecedentes de la técnica

La RA es una enfermedad autoinmune, de etiología desconocida que afecta aproximadamente al 1% de la población mundial. Se trata de un síndrome que se caracteriza por la inflamación crónica de las articulaciones, aunque también pueden observarse manifestaciones sistémicas. Esta enfermedad se inicia con la inflamación de la membrana sinovial y con frecuencia causa la destrucción erosiva del cartílago y el hueso adyacentes, que resulta en la incapacidad física moderada del 80% de los pacientes y una mortalidad temprana (Moctezuma, J.F. (2002) Manifestaciones articulares de la Artritis Reumatoide. Revista Mexicana de Reumatología 17: 211-219) . La RA puede presentarse a cualquier edad, sin distinción de razas o grupos étnicos, pero la incidencia máxima de su inicio ocurre entre los 25 y 55 años de edad. Entre las personas con RA, las mujeres superan a los hombres en una proporción de tres a uno (Emer y , P. (2002) Early referral recommendation for newly diagnosed rheumatoid arthritis: evidence based development of to clinical guide. Ann Rheum Dis. 61:290-297)

La causa de la RA es desconocida. Esta es una enfermedad que implica la presencia de factores genéticos, ambientales, inmunológicos y hormonales. Ciertos genes tienen un papel en el sistema inmune, asociados con una tendencia a desarrollar RA. Al mismo tiempo, algunas personas con RA no tienen estos genes y otras personas que los tienen nunca desarrollan la enfermedad. Por lo tanto, se ha sugerido que el antecedente genético es importante, pero no es decisivo.

En modelos de enfermedad autoinmune, antígenos microbianos con estructura similar a los antígenos propios pueden liberar una respuesta cruzada con autoantígenos, produciendo una alteración en los mecanismos de tolerancia y perpetuando una respuesta autoinmune. En general, el daño y la necrosis local en un tejido producidos por un agente infeccioso podrían descubrir el epitopo críptico del autoantígeno, siendo capaz de activar células T autorreactivas (Albert, L.J. (1999) Mechanisms of Disease: Molecular Mimicr y and autoimmunity. N Engl J Med 341:2068-2074) .

La fase de transición de los linfocitos T entre la tolerancia y la inmunidad/autoinmunidad es regulada a diferentes niveles. Dos parámetros importantes en esta transición son el estado de maduración de las Células Presentadoras de Antígeno (abreviadas APC) y los niveles de autoantígenos que son detectados por el sistema inmune (Ohashi,

P.S. (2002) Making and breaking tolerance. Current Opinion in Immmunology 14:744-759) .

Una de las hipótesis actuales que trata de explicar el desarrollo de enfermedades autoinmunes, plantea que las APC en ausencia de síntomas del sistema inmune innato o de signos de peligro, se mantienen relativamente inmaduras e inducen tolerancia en las células T autorreactivas, cuando se les presentan péptidos propios (Steiman, R.M. (2000) The induction of tolerance by dendritic cells that have captured apoptotic cells. J Exp Med. 191:411-416) . La inducción de tolerancia periférica también se correlaciona con la concentración de antígeno propio (Kurts, C. (1999) CD8 T cell ignorance or tolerance to islet antigens depends on antigen dose. PNAS 96:12703-12707) . Un incremento en la presentación de antígenos propios debido al incremento de sus niveles de expresión, permite su detección por las células T autorreactivas ignorantes. Si los niveles de antígenos propios se incrementan en ausencia de eventos que promueven la maduración de las APC, la tolerancia a estos antígenos se mantiene, de lo contrario, ocurre que en presencia de señales proinflamatorias u otros eventos que promueven la maduración de las APC la tolerancia es rota por la activación de las células T ignorantes y se desarrollan enfermedades autoinmunes (Janeway, C.A. (2002) Innate immune recognition. Annu Rev Immunol. 20:197-216) . Los agentes infecciosos que han sido objeto de estudio como la causa de la RA son: el virus de Epstein-Bar, los retrovirus, el virus de la hepatitis C, el Mycobacterium tuberculosis (abreviado Mt) y el Helicobacter pylori, entre otros.

La patogénesis de la RA se caracteriza por la acción concertada de los diferentes tipos de células que causan la destrucción progresiva del cartílago y el hueso.

En situaciones normales existe un equilibrio entre las citocinas inflamatorias como: TNFa, IL-1, IL-6, IL-15, IL-16, IL17, IL-18 y el IFNy, y las anti-inflamatorias como IL-4, IL-11, IL-13 y antagonista de IL-1 o TNa. En la RA este equilibrio se desplaza, sin embargo, en favor de las citocinas inflamatorias (Arend, W.P. (2001) Cytokine imbalance in the pathogenesis of rheumatoid arthritis: The role of interleukin-1 receiving antagonist. Semin Arthritis Rheum 30 (2) :1-6)

El reconocimiento de un antígeno exógeno o autoantígeno es probablemente la razón de una serie de eventos que causan la destrucción de las articulaciones en pacientes con RA. Este fenómeno causa la activación de linfocitos T CD4+ que, en cooperación con la estimulación de diferentes citocinas, induce su diferenciación a células Th1, con la consecuente liberación de citocinas proinflamatorias (IL-2 e INFy) (Simón, A.J. (2001) Biological therapy in Rheumatoid Arthritis. Magazine of Clinical Investigation 53 (5) :452-459) . Muchos investigadores coinciden en que la inflamación crónica de las articulaciones es inducida por estas células T activadas que infiltran la membrana sinovial. La acción de estas citocinas sobre los macrófagos causa la producción de una alta cantidad de TNFa e IL-1. Estos causan una serie de acciones locales y sistémicas como la regulación de la expresión de las moléculas de adhesión en las células endoteliales (LFA1, ICAM-1) , que reclutan otras células para los sitios de inflamación. También estimulan macrófagos, fibroblastos, condrocitos y osteoclastos para la liberación de otros mediadores de la inflamación, como IL-15 e IL-8. TNFa e IL-1 estimulan la proliferación de la membrana sinovial que causa la formación de pannus, también pueden inducir la diferenciación de los linfocitos B en células productoras de anticuerpos que potencialmente participan en la destrucción de la articulación. También inhiben la producción de citocinas anti-inflamatorias (IL-4 e IL-14) producidas por las células Th2 y estimulan a los hepatocitos para liberar IL

6. La IL-6 favorece la producción de las proteínas de la fase aguda, que participan el fortalecimiento de la respuesta inmune (Forre, O. (2000) New possibilities of treatment in AR. Scand J Rheumatol 29 (2) :73-84) .

Entre los autoantígenos involucrados en la patogénesis de la RA se encuentra Hsp60, una proteína que pertenece a la familia de las Hsp, que son proteínas inmunogénicas con conservación excepcional de la evolución. La respuesta inmune contra las Hsp extrañas es un importante mecanismo de defensa contra las infecciones bacterianas. Los anticuerpos contra estas proteínas pueden ser abundantes en personas sanas y en pacientes con enfermedades autoinmunes y pueden presentar reacción cruzada con los antígenos propios (Chen, W. (1999) Human 60-kDa Heat-Shock Protein: To Danger Signal to the Innate Immune System. J Immunol. 162:3212-3219) .

La Hsp65 de Mt es homóloga a la Hsp60 de los mamíferos. Esto sugiere que la Hsp60 puede ser reconocida como autoantígeno en pacientes con RA. Al comparar los pacientes con osteoartritis y los pacientes con RA, estos últimos tienen un aumento de la respuesta proliferativa de los linfocitos B en el líquido sinovial a la Hsp65 de Mycobacterium. La intensidad de la respuesta se correlaciona con la inflamación sinovial. Esta respuesta no es específica para la RA en comparación con otras enfermedades inflamatorias (Life, P. (1993) Responses to Gram negative enteric bacterial antigens by synovial T cells from patiens with juvenile chronic arthritis: recognition of heat shock protein hsp60. J Rheumatol. 20:1388-1396) .

La concentración de Hsp es una posible señal de peligro para el sistema inmunológico, estas son liberadas de las células muertas, y pueden inducir una respuesta... [Seguir leyendo]

1. Péptido de la proteína de choque térmico humana de 60 kDa que constituye epitopos para células T, para su uso en la inducción de mecanismos de tolerancia periférica, en particular inducción de anergia o mediada por clones de células T reguladoras en pacientes con Artritis Reumatoide en el que dicho péptido se caracteriza por la secuencia:

E18-3 SIDLKDKYKNIGAKLVQDVANNTNEEAG (SEQ. ID. NO: 2) .

2. Péptido, que se caracteriza por ser un péptido Ligando de Péptido Alterada (APL) derivado del péptido E18-3 (SEQ.ID. NO: 2) de la reivindicación 1, modificado en los sitios de contacto con las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano, en el que la secuencia de aminoácidos:

está sustituida en la posición 1 por L, I, V, M, Y, W, F, o A la posición 2 por A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, o Y la posición 3 por A, F, I, K, L, M, P, R, S, T, V, W, o Y

la posición 4 por L, I, V, M, Y, W, F, o A la posición 5 por A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, o Y la posición 6 por A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, o Y la posición 7 por A, F, I, K, L, M, P, R, S, T, V, W, o Y la posición 8 por A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, o Y

3 Péptido de acuerdo con la reivindicación 2, que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ. ID NO. 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20 y SEQ ID NO: 21.

4 Una composición farmacéutica que comprende uno o más péptidos de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de la Artritis Reumatoide.

6. Uso de una cantidad efectiva de péptidos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4 o 5 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un sujeto humano que sufre de Artritis Reumatoide.

Figura 1

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Figura 6 Figura 7

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Figura 14