Péptidos bioactivos cortos para modulación celular e inmunológica.

Un péptido aislado, en el que la secuencia del péptido consiste en de cuatro a catorce restos de aminoácidoscontiguos de la SEC ID NO:

1, y en el que el péptido comprende las SEC ID NO:2, SEC ID NO:3, SEC ID NO:5, SECID NO:7, SEC ID NO:8, SEC ID NO:9, SEC ID NO:10, SEC ID NO:11, SEC ID NO:12 o SEC ID NO:15.

Péptidos bioactivos cortos para modulación celular e inmunológica La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad para la Solicitud Provisional de los Estados Unidos Nº 60/878.849, presentada el 5 de enero del 2007.

Campo de la Invención La invención se refiere a péptidos que tienen actividad biológica y terapéutica. De manera particular, la invención se refiere a péptidos cortos que tienen de cuatro a catorce restos de aminoácidos contiguos de la SEC ID NO:1 que presentan actividades proliferativa, migratoria y antiinflamatoria hacia células tales como queratinocitos. Adicionalmente la invención se refiere a procedimientos de uso de estos péptidos para tratar diversas agresiones que afectan a la piel y a otras superficies corporales relacionadas, tales como la cavidad oral.

Antecedentes de la Invención La epidermis de la piel consta de cuatro a cinco capas estratificadas, comprendiendo todas principalmente queratinocitos; otros tipos de células tales como fibroblastos también se encuentran en la epidermis. Los queratinocitos se originan a partir de la capa basal más inferior de la epidermis, y gradualmente migran a la parte más exterior de la piel, donde se transforman en corneocitos y eventualmente se desprenden. Durante esta migración, los queratinocitos se diferencian para expresar las enzimas y proteínas estructurales necesarias para la cornificación (Presland y Dale, 2000) . Dada su importante función en la formación de la epidermis, los queratinocitos representan un objetivo principal para tratar piel dañada.

Los queratinocitos también son el constituyente principal de los tejidos mucosos que se encuentran a continuación de la epidermis (Presland y Dale, 2000) . Dichos tejidos carecen de la capa de epidermis, impermeable, cornificada, y forman las superficies de revestimiento internas asociadas con la boca, nariz, garganta, oído, ano y genitales. Similar a la piel, las superficies mucosas son importantes para prevenir la entrada de agentes infecciosos en el organismo; por tanto, si se produce una lesión en cualquiera de estos tipos de tejidos puede comprometer la salud de un individuo.

Los daños en la piel y en el tejido mucoso se producen cuando la capa epidérmica se rompe, tal como cuando se produce una laceración, quemadura o ampolla. La lesión también puede implicar aplastamiento o hematoma, lo que implica daño del tejido sin fisura simultánea de la epidermis. Las infecciones en la piel, así como determinadas dolencias crónicas, tales como cáncer y enfermedades autoinmunes, también pueden tener un efecto negativo sobre las superficies epidérmicas. Las úlceras, tales como las que afectan a diabéticos o las asociadas con escaras, son otra forma de daño en la piel; frecuentemente estas heridas son bastante intratables, inflamándose, propensas a infecciones, y requiriendo un lento proceso de curación. Generalmente se ha postulado que la persistencia de una úlcera, o cualquier otra herida crónica, se debe a un fallo en los procesos celulares implicados en la curación, tales como la señalización celular (Enoch y Price, 2004; Sweitzer y col., 2006) . Un fallo es la incapacidad de epitelizar la lesión, aunque los queratinocitos que se encuentran en los bordes de la herida pueden proliferar, no se desplazan para tapar la llaga (Enoch y Price, 2004) . Con relación a úlceras diabéticas, otro fallo es la falta de determinadas moléculas de señalización; esta deficiencia puede imposibilitar los procesos de remodelación que son necesarios para orquestar el cierre de heridas (Sweitzer y col., 2006) .

Otras formas de daño epidérmico son sutiles y se producen durante un largo de periodo de tiempo, comprometiendo eventualmente la función de la piel en la cara de la lesión aguda; la curación de heridas se prolonga en el tiempo y puede no ser perfecta (por ejemplo, formación de cicatrices) . Problemas cosméticos tales como arrugas, sequedad, adelgazamiento, descolgamiento y mayor susceptibilidad a hematomas son síntomas externos habituales de dichas enfermedades. De manera no sorprendente, estos síntomas de desgaste están normalmente asociados con el envejecimiento, pero también pueden producirse prematuramente debido a una exposición prolongada a agentes dañinos tales como rayos ultravioleta (foto-envejecimiento) . Los procesos foto-reactivos, inducidos por la luz solar, pueden contribuir a reducir el espesor y la elasticidad de piel, así como a endurecer la piel (Pelicci, 2004; Fisher y col., 2002) .

La curación de heridas agudas en la piel y en las mucosas se orquesta, en parte, a través de la activación de queratinocitos basales que siguen una trayectoria de proliferación, migración y diferenciación para efectuar el cierre de las heridas. Este proceso viene acompañado por una serie de actividades de remodelación en el sitio de la lesión (Enoch y Price, 2004) . Los queratinocitos localizados en el perímetro de la herida proliferan y migran para formar una sola capa sobre la herida en un proceso denominado epitelialización. La proliferación y diferenciación adicional de los queratinocitos establece una capa epidérmica que comprende las capas estratificadas normales. Los procesos inflamatorios pueden facilitar la curación de las heridas; los monocitos infiltrantes combaten la infección y también liberan factores que estimulan la epitelialización de las heridas. Sin embargo, los procesos inflamatorios también pueden agravar la curación; por ejemplo, la deposición de fibrina por macrófagos contribuye a la cicatrización. Siempre y cuando se mantengan condiciones antisépticas, se ha demostrado que el cierre de heridas epidérmicas se produce de una manera mas rápida y con menos cicatrización cuando se reduce la implicación inmunológica (Martin y Leibovich, 2005) . Teniendo en cuenta estos conocimientos actualmente se contemplan

modos para modular negativamente la inflamación en lesiones epidérmicas.

Se ha demostrado que diversos factores estimulan la epitelialización por parte de los queratinocitos durante la curación de heridas en la piel y en tejidos mucosos asociados, que incluyen el factor de crecimiento epidérmico (EGF) , el factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) , el factor de crecimiento de queratinocitos (KGF) , y los factores de crecimiento derivados de plaquetas (PDGF) (Enoch y Price, 2004) . Curiosamente, también se sabe que, diversas proteínas antimicrobianas, que están presentes en las superficies de piel y mucosas, desempeñan una función estimulando la proliferación y migración celular necesarias para curar heridas epidérmicas (Shaykhiev y col., 2005; Braff y Gallo, 2006; Zhang y Falla, 2006) .

Sabiendo que determinados factores de crecimiento están naturalmente vinculados durante la curación de heridas, el trabajo se ha dirigido a desarrollar procedimientos basados en factores de crecimiento para tratar heridas, especialmente las que son generalmente crónicas. Por ejemplo, el tratamiento de úlceras diabéticas con PDGF-BB (Mustoe y col., 1994; Steed, 1995) ha obtenido la aprobación de la FDA. Sin embargo, la mayoría de los intentos que emplean dicha estrategia no han podido lograr resultados clínicamente significativos, debido en parte a dificultades asociadas con el uso de proteínas terapéuticas. Un problema se refiere a la administración ineficaz de factores de crecimiento en el lugar de la herida; la aplicación tópica de estas proteínas solo permite la exposición de tejido exterior, principalmente muerto, a la proteína terapéutica. Otros inconvenientes se refieren a la alta inestabilidad y escasa retención de las proteínas de factores de crecimiento después de la administración en el lugar de la herida.

Las dificultades con el uso de factores de crecimiento y otras proteínas para tratar heridas epidérmicas se relacionan con el gran tamaño de las proteínas implicadas. El amplio uso de terapias con factores de crecimiento también sufre la complejidad y los altos costes asociados con la preparación de proteínas grandes. Por lo tanto, en lo que respecta al uso de factores de proteína en regímenes de curación de heridas, actualmente se buscan preparaciones menos costosas y más eficaces. Los péptidos cortos que llevan la actividad de las proteínas más grandes de las cuales derivan (es decir, la proteína parental) cumplen esta necesidad. Se han descrito ejemplos previos de dichos péptidos cortos (Patentes de Estados Unidos 6.861, 406 y 6.693, 077; Lee y col., 2004) . Además de los beneficios inmediatos de producción, manejo y manipulación menos costosos y más sencillos, el tejido herido también absorbe y retiene mejor los péptidos bioactivos pequeños. Las características de absorción avanzadas de los péptidos bioactivos cortos también los convierte en una... [Seguir leyendo]

1. Un péptido aislado, en el que la secuencia del péptido consiste en de cuatro a catorce restos de aminoácidos contiguos de la SEC ID NO:1, y en el que el péptido comprende las SEC ID NO:2, SEC ID NO:3, SEC ID NO:5, SEC ID NO:7, SEC ID NO:8, SEC ID NO:9, SEC ID NO:10, SEC ID NO:11, SEC ID NO:12 o SEC ID NO:15.

2. El péptido de la reivindicación 1, en el que

(i) el péptido comprende cualquiera de los enantiómeros de aminoácidos L y D o ambos,

(ii) el péptido se conjuga con una molécula vehículoa, amidada o lipidada,

(iii) un resto de metionina, de valina, de lisina o de glutamato está en el extremo amino del péptido

(iv) un resto de lisina, de valina, de glicina o de asparagina está en el extremo carboxilo del péptido, o

(vi) cualquier combinación de (i) - (iv) .

3. El péptido de la reivindicación 1, en el que la secuencia del péptido comprende las SEC ID NO:3, SEC ID NO:12 o SEC ID NO:15.

4. El péptido de la reivindicación 1, en el que la secuencia del péptido comprende las SEC ID NO:2, SEC ID NO:5, SEC ID NO:7, SEC ID NO:8, SEC ID NO:9, SEC ID NO:10 o SEC ID NO:11.

5. El péptido de la reivindicación 1, en el que la secuencia del péptido es la SEC ID NO:3.

6. El péptido de la reivindicación 1, en el que la secuencia del péptido es la SEC ID NO:12.

7. El péptido de la reivindicación 1, en el que la secuencia del péptido es la SEC ID NO:15.

8. Una composición que comprende al menos un péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. La composición de la reivindicación 8, en la que el péptido está presente en una concentración que varía de aproximadamente 0, 1 μg/ml a aproximadamente 50 μg/ml, o de aproximadamente 0, 1 μg/ml a aproximadamente 20 μg/ml.

10. La composición de la reivindicación 8, en la que la composición está en forma de aerosol, emulsión, líquido, loción, crema, pasta, pomada, polvo o espuma,

11. La composición de la reivindicación 8, en la que la secuencia del péptido es la SEC ID NO:2, SEC ID NO:3, SEC ID NO:5, SEC ID NO:7, SEC ID NO:8, SEC ID NO:9, SEC ID NO:10, SEC ID NO:11, SEC ID NO:12 o SEC ID NO:15,

12. Un medicamento para su uso en la curación de una herida en un mamífero cuando se aplica en una cantidad terapéuticamente eficaz durante una cantidad de tiempo eficaz, en el que dicho medicamento comprende un vehículo terapéuticamente eficaz y un péptido en el que la secuencia del péptido consiste en de cuatro a catorce aminoácidos contiguos de la SEC ID NO:1 y en el que el péptido comprende las SEC ID NO:2, SEC ID NO 3, SEC ID NO:5, SEC ID NO:6, SEC ID NO:7, SEC ID NO:8, SEC ID NO:9, SEC ID NO:10, SEC ID NO:11, SEC ID NO:12 o SEC ID NO:15.

13. El medicamento de la reivindicación 12, en el que la herida afecta a la piel o al tejido mucoso asociado de dicho mamífero.

14. El medicamento de la reivindicación 12, en el que la herida se debe a una abrasión, ampolla, quemadura, laceración, úlcera, hematoma, erupción, cicatriz, o a los efectos del envejecimiento o a una exposición ambiental.

15. El medicamento de la reivindicación 12, en el que la secuencia del péptido es la SEC ID NO:2, SEC ID NO:3, SEC ID NO:5, SEC ID NO:6, SEC ID NO:7, SEC ID NO:8, SEC ID NO:9, SEC ID NO:10, SEC ID NO:11, SEC ID NO:12 o SEC ID NO:15.