Péptidos antimicrobianos.

Un péptido que comprende o consiste en la SEC ID Nº 1, o un péptido que deriva de la SEC ID Nº 1,

que tiene dicho péptido una identidad al menos del 80% con los aminoácidos 1 a 22 de la SEC ID Nº 1, y que tiene una actividad antimicrobiana, antivírica o fungicida, con la condición de que el péptido mencionado anteriormente no consista en las SEC ID Nos 2 a 5.

Péptidos antimicrobianos

[0001] La presente invención se refiere a nuevos péptidos antimicrobianos, sus derivados, y composiciones que contienen los mismos.

[0002] Actualmente hay varios péptidos antimicrobianos en desarrollo clínico avanzado, esencialmente en forma de fármacos tópicos (Andrés, E., Dimarcq, J.-L. Cationic anti-microbial peptides: from innate immunity study to drug development. La revue de medicine interne (2004), 25, 629-635). Sin embargo se han sugerido muy pocas de estas moléculas para su pretendido uso en acuicultura, por ejemplo, las peneidinas aisladas de las gambas peneidos (Penaeus vanname/). Véase, el documento EP1000153.

[0003] Esto se puede explicar por el hecho de que varios de estos péptidos antimicrobianos (AMP) se inhiben en presencia de sales, lo que no es el caso de los péptidos de la presente invención, en tanto en cuanto se aíslan de un gusano del fondo marino: A/v/ne//a pompe/'ana o gusano pompeya.

[0004] Este gusano se considera también que es el único de la mayoría de organismos tolerantes al calor que se conoce en la ciencia. De hecho, resiste temperaturas desde 10 a 80 -C, lo que sugiere que las moléculas que se originan de este gusano tal como el péptldo de acuerdo con la presente invención, son termoestables y por lo tanto Interesantes en farmacología.

[0005] La Intensificación de las producciones en acuicultura se ha hecho posible por el uso importante de antibióticos. A pesar de las legislaciones estrictas, el uso intencionado preventivo de antibióticos está difundido, en particular durante las fases críticas (por ejemplo, en los estadios tempranos de vida, metamorfosis, transferencia de animales), pero también durante el crecimiento animal. Este uso masivo de antibióticos tiende a promover la evolución emergente de cepas resistentes a antibióticos, lo que podría diezmar la cría animal. Las cepas multlrreslstentes a antibióticos (MAR) aparecieron a mediados de los 80. Además de que no se ha descubierto casi ninguna nueva familia de antibióticos durante los últimos treinta años, ofreciendo demasiado pocos productos nuevos contra las cepas resistentes.

[0006] Una solución alternativa sería el uso de AMP. Estas moléculas, que se producen naturalmente en los animales y plantas, tienen un amplio espectro y rápida actividad antibiótica contra bacterias Gram-negativas y Gram- posltlvas, hongos, y virus encapsulados. Además, estos AMP no son inmunogénicos y su acción sobre la membrana bacteriana no debería favorecer la evolución emergente de cepas resistentes a los antibióticos. El primer AMP, desarrollado en los 90, es un derivado de la Magalnlna: el Pexlganan de Magainin Pharmaceuticals, Inc. En un estudio en fase III, el Pexlganan se Incluyó en una crema, y mostraba la misma eficacia que una terapia antibiótica vía oral con Ofloxaclna, para el tratamiento de las úlceras cutáneas sobreinfectadas en diabéticos. Entre los otros AMP en desarrollo, que pueden ser de Interés para el clínico en un futuro cercano, se deberían mencionar el Iseganan, desarrollado por Intrablotlcs Pharmaceuticals Inc., péptidos MBI desarrollados por Micrologix Biotech Inc., y péptidos derivados de la Hlstatlna desarrollado por Perlondotlx Inc. (Andrés et a), mencionado anteriormente). Pero también las peneidinas mencionadas anteriormente, que parece que tienen una masa molecular mayor en comparación con el péptldo aislado reivindicado de A/v/'ne//a pompe/'ana.

[0007] Los péptidos de acuerdo con la Invención permitirían disminuir el uso de antibióticos en acuicultura, sustituyendo una parte de los últimos. Debido a la Inocuidad de los AMP, su uso beneficiaría la imagen de la marca, pero también la salud de los animales que se van a tratar, los consumidores y el medio ambiente, sin miedo a favorecer la evolución emergente de cepas resistentes a antibióticos.

[0008] Por lo tanto, uno de los objetivos de la Invención es proporcionar nuevos AMP que tienen una actividad antibiótica de amplio espectro.

[0009] La presente Invención se refiere a un nuevo péptldo que comprende o consiste en la SEC ID N- 1, con la condición de que dicho péptldo anterior no consista en las SEC ID N°^ 2 a 5.

[0010] Con la expresión "péptldo" quiere decirse una cadena de aminoácidos contigua. Esta cadena de aminoácidos contigua puede llamarse proteína si contiene al menos 50 aminoácidos. Esta cadena de aminoácidos contigua puede ser de origen natural o artificial (a partir de síntesis química).

[0011] Con la expresión "cadena de aminoácidos contigua" quiere decirse aminoácidos que están en contacto o se conectan a través de una secuencia sin ruptura.

[0012] Debido a que la SEC ID N- 1 se obtuvo de A/v;ne//a pompe/'ana, se ha llamado Alvinellacina. La Alvlnellaclna es la secuencia activa más pequeña contra un microorganismo. El péptido contiene 4 cisternas que están Implicadas en Puentes de Clsteína.

[0013] Con la palabra "microorganismos" quiere decirse organismos que son microscópicos tales como bacterias, hongos, y virus.

[0014] La presente Invención también se refiere a un péptldo que consiste en la SEC ID N- 6, o deriva de la SEC ID Ns 1:

- por modificación en su extremo C, y/o extremo N, y/o

- por sustitución, y/o supresión, y/o adición de uno o varios aminoácidos en su cadena peptídlca, y/o

- por modificación de al menos un enlace peptídlco -CO-NH- en su cadena peptídlca, particularmente por Introducción de un enlace tipo retro o retro-inverso, y/o

- por sustitución de al menos un aminoácido de su cadena peptídlca, con un aminoácido no proteinogénico,

en particular, péptldos o fragmentos de péptldos que tienen más de un 80%, preferentemente más de un 85%, preferentemente más de un 90% y más preferentemente más de un 95% de homología.

[0015] De acuerdo con la Invención, un péptldo que deriva de la SEC ID N- 1 comparte una identidad de al menos el 80% con los aminoácidos 1 a 22 de la SEC ID N-1 y tiene actividad antlmlcroblana, antivírica y/o fungicida.

[0016] La SEC ID N- 6 corresponde al pre-propéptldo de la Alvinellaclna.

[0017] Con la palabra "pre-propéptldo" quiere decirse un precursor de la proteína de la Alvinellacina, que incluye un péptldo de señal en el extremo N. Este pre-propéptldo se somete a una modificación post-traduccional en el gusano Pompeya, y así se convierte en el péptldo activo de la SEC ID N-1.

[0018] Con la expresión "proteína precursora" quiere decirse una proteína inactiva, sin actividad antimicrobiana.

[0019] Con la expresión "actividad antlmlcroblana" quiere decirse una acción contra bacterias, hongos y virus, que da lugar a un descenso de su población y/o da lugar a la Inhibición del crecimiento del microorganismo.

[0020] Con la expresión "péptldo de señal" quiere decirse un fragmento de la cadena de aminoácidos de la SEC ID N- 6, que es una secuencia corta que dirige el transporte de dicha proteína precursora en Alvinella pompejana. El péptldo de señal de la SEC ID N- 6 va desde el 1- al 19- resto de aminoácido.

[0021] Con la expresión "modificación post-traduccional en el gusano pompeya" quiere decirse el proceso de eliminación que se produce en A/v/ne//a pompe/'ana, que corresponde a la escisión de 186 aminoácidos contiguos desde la parte del extremo N de la SEC ID N- 6, y que da lugar a la obtención de la SEC ID N-1.

[0022] Con la expresión "modificación de su extremo C, y/o extremo N" quiere decirse la sustitución de un grupo, por ejemplo -COOH o -NH2, localizado en el primer o último aminoácido del péptido de la SEC ID N- 1, cualquiera que sea el motivo de la sustitución, por ejemplo, revestir un soporte con el péptido.

[0023] Con la expresión "Introducción de un enlace tipo retro" quiere decirse la introducción de un enlace amida retro, que consiste en un enlace peptídlco -NH-CO- en la SEC ID N-1.

[0024] Con la expresión "Introducción de un enlace peptídlco tipo retro-inverso" quiere decirse la introducción de un enlace amida retro-inverso, que consiste en un enlace peptídlco -NH-CO- acoplado con una configuración inversa absoluta del aminoácido.

[0025] Con la expresión "aminoácidos no protelnogénlcos", se debe entender como aminoácidos que no se encuentran en proteínas (por ejemplo, carnltlna, L-canavanlna, o L-DOPA), o que no se codifican por el código genético de referencia (por ejemplo, hldroxlprollna y selenometlonlna).

[0026] En una realización ventajosa, el péptldo reivindicado tiene una Identidad al menos del 80% con el péptido de la SEC ID N- 1. Por lo tanto, el péptldo reivindicado puede tener sin limitación una secuencia de aminoácidos en la que se han sustituido... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que comprende o consiste en la SEC ID N- 1, o un péptido que deriva de la SEC ID N- 1, que tiene dicho péptido una identidad al menos del 80% con los aminoácidos 1 a 22 de la SEC ID N- 1, y que tiene una actividad antimicrobiana, antivírica o fungicida, con la condición de que el péptido mencionado anteriormente no consista en las SEC ID N°" 2 a 5.

2. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, que consiste en la SEC ID N- 6.

3. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que se caracteriza porque se aísla y purifica de A/v;ne//a pompe/'ana.

4. Una molécula aislada de ácido nucleico que codifica un péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en particular la molécula de ácido nucleico de la SEC ID N- 7, con la condición de que no consista en las SEC ID N°" 8 a 25.

5. Una construcción de ácido nucleico recombinante que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 4 unida operativamente a un vector de expresión.

6. Una célula huésped que comprende la construcción de ácido nucleico recombinante de la reivindicación 5.

7. Un péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso como fármacos, en particular como un agente antimicrobiano, antivírico y/o fungicida.

8. Una composición que comprende al menos un péptido de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 3.

9. La composición de acuerdo con la reivindicación 8, para su uso como un agente antibacteriano contra bacterias Gram-negativas y/o Gram-positivas.

10. La composición de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, para su uso en acuicultura.

11. Una composición farmacéutica que comprende al menos un péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en asociación con un vehículo farmacéutico aceptable.

12. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 11, que comprende además al menos otro agente antimicrobiano que se selecciona de entre los siguientes:

- tetraciclinas, tales como la oxitetraciclina o clortetraciclina;

- quinolonas, tales como ácido oxolínico, flumequina o sarafloxacina;

- sulfamidas, opcionalmente potenciadas con trimetoprim u ormetoprim;

- nitrofuranos, tales como la furazolidona;

- macrólidos, tales como la eritromicina;

- florfenicol;

- cloranfenicol.

13. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 12, para su uso en terapia antibiótica animal y/o humana.

14. Una composición dietética, en particular un suplemento alimentario que contiene además uno o más ingredientes nutritivos, que comprende una composición de acuerdo con la reivindicación 8 o 9.

15. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14, en la que dichos péptidos están encapsulados, en particular nanoencapsulados.

16. Un desinfectante que comprende una composición de acuerdo con la reivindicación 8.