Nuevas herramientas de diagnóstico para la enfermedad de Charcot-Marie-Tooth.

Un método in vitro para detectar la presencia o el riesgo de enfermedad de CMT en un mamífero,

o para ayudar en el diagnóstico de la enfermedad de CMT, comprendiendo el método determinar la cantidad (relativa) o nivel de colesterol libre en una muestra de sangre, plasma y/o suero del mamífero, en donde una cantidad o nivel menor es indicativo de la presencia, riesgo, progresión o gravedad de dicha enfermedad.

Nuevas herramientas de diagnóstico para la enfermedad de Charcot-Marie-Tooth

La presente invención se refiere en general al campo de la medicina. La presente invención se refiere en particular a métodos de detección de la predisposición o de diagnóstico y/o pronóstico de la enfermedad de Charcot-Marie-Tooth (CMT) y trastornos relacionados. Más específicamente, la invención se refiere al desarrollo, validación y aplicación de nuevos biomarcadores, que se pueden usar para detectar la presencia o el riesgo de la enfermedad de CMT y trastornos relacionados. En particular, la presente invención se refiere a biomarcadores metabolitos, lípidos, hidratos de carbono y proteínicos que se pueden medir en los fluidos corporales biológicos y extractos de biopsias fácilmente disponibles, que se pueden usar para ayudar a detectar, predecir el tratamiento con fármacos y seguir este tratamiento de trastornos neurodegenerativos, incluyendo la enfermedad de CMT. La presente invención también se refiere a métodos para la identificación de subtipos de enfermedad de CMT, evaluando la sensibilidad a los tratamientos y la eficacia de los tratamientos en sujetos que tienen la enfermedad de CMT o un trastorno relacionado.

La enfermedad de Charcot-Marie-Tooth (“CMT”) es una polineuropatía periférica genética rara. Afectando a aproximadamente 1 de 2.500 individuos, esta enfermedad es el trastorno hereditario más común del sistema nervioso periférico. Su inicio ocurre típicamente durante la primera o segunda década de vida, aunque se puede detectar en la infancia. La evolución de la enfermedad es crónica con degeneración neuromuscular gradual. La enfermedad es incapacitante con casos en los que va acompañada de dolor neurológico y discapacidad muscular extrema. La enfermedad de CMT es una de las patologías genéticas mejor estudiadas con aproximadamente 30.000 casos en Francia. Aunque la mayoría de los pacientes de la enfermedad de CMT albergan un fragmento duplicado del cromosoma 17 que contiene un gen de mielina: PMP22 (forma CMT1A) , se han implicado más de dos docenas de genes en diferentes formas de la enfermedad de CMT. Por consiguiente, aunque es de origen monogénico, esta patología manifiesta heterogeneidad clínica debido a posibles genes moduladores. Los genes mutados en pacientes de CMT se agrupan alrededor de rutas moleculares estrechamente conectadas, que afectan a la diferenciación de células de Schwann o neuronas o cambian la interacción de estas células en nervios periféricos.

Actualmente, el diagnóstico de la enfermedad de CMT se basa en criterios clínicos y datos de electrofisiología que distinguen solo algunos subtipos de esta enfermedad. La clasificación más precisa se basa en el análisis de mutaciones en genes relevantes si se conocen.

Las mutaciones múltiples que conducen a la enfermedad de CMT ocurren en más de 25 genes diferentes. No están identificadas para todos los casos de enfermedad de CMT y no se pueden clasificar exhaustivamente por tipificación genética (Suter y Scherer, 2003; Berger et al., 2006; Niemann et al, 2006; Nave et al., 2007) . Además, se encuentra heterogeneidad clínica y no solo es importante para la caracterización clínica sino que proporciona mayor implicación de la atención integral/tratamiento específico para formas funcionalmente diferentes (Sereda el al., 2003; Passage et al, 2004; Sahenk et al, 2005; Young et al., 2008) .

Por el momento, no existe tratamiento con fármacos para esta enfermedad pero se han descrito algunos procedimientos de atención integral clínica (Grandis y Shy, 2005; Kapur et al, 2007; Weiner et al, 2008) y se están realizando ensayos clínicos con ácido ascórbico para el tratamiento de la forma CMT1A de esta enfermedad (Burns et al., 2009) .

La progresión de esta enfermedad medida por la puntuación de la neuropatía CMT (CMTNS) es más bien lento y necesita ensayos clínicos largos con cientos de pacientes.

Se han propuesto recientemente los niveles de proteína y ARN de PMP22 como marcadores biológicos para el seguimiento farmacodinámico de dichos ensayos como un sustituto para el criterio de valoración de la CMTNS en un caso de CMT1A (Li et al, 2005; Meyer zu Horste et al, 2007) . Este análisis también es tedioso y requiere procedimiento invasivo. Además la expresión de PMP22 en dichas biopsias no está correlacionada con la gravedad de la enfermedad (Katona et al., 2009) .

Patrocolo et al., 2009 describen niveles de colesterol total y triglicéridos elevados en un paciente con neuropatía sensitivo-motora hereditaria autosómica dominante con implicación proximal dominante (HMSN-P) .

Yao et al., 1978, estudian la distribución de fracciones específicas de ésteres de colesterilo en pacientes que tienen neuropatías hereditarias. Este documento no proporciona información relacionada con los niveles de colesterol libre o colesterol LDL.

Swartz et al., 1988, se refiere a la inmunogenicidad del colesterol y producción de anticuerpos que fijan el complemento de IgM monoclonal al colesterol.

Niebroj-Dobosz et al., 1976, se refiere a patrones de diferentes fracciones lipídicas en pacientes neuropáticos (tales como lípidos totales, fosfolípidos totales, ácidos grasos libres o ésteres de colesterol) . Los autores concluyen que no hay correlación entre el tipo de cambios del patrón lipídico y el síndrome clínico.

La disponibilidad de los marcadores biológicos fácilmente detectables permitiría el diagnóstico rápido de formas funcionalmente relevantes de las enfermedades de CMT y relacionadas, el ensayo clínico de la eficacia de nuevos medicamentos y el control de la respuesta individual de pacientes al tratamiento con fármacos y atención integral de la enfermedad.

Patroclo et al. (2009, Arq. Neuropsiquiatr., Vol. 67, pág. 892-896) describe un paciente con HMSN en el que el colesterol total era elevado.

Dong et al. (5.10.2007, JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B: BIOMEDICAL SCIENCES & APPLICATIONS, vol. 858, páginas 239 -246) describe métodos de determinación del colesterol libre en muestras biológicas.

Resumen de la invención La invención en su forma más amplia se define por las reivindicaciones independientes 1, 2, 9, 13:

1. Un método in vitro de detección de la presencia o el riesgo de enfermedad de CMT en un mamífero, o para ayudar en el diagnóstico de la enfermedad de CMT, comprendiendo el método determinar la cantidad (relativa) o nivel de colesterol libre en una muestra de sangre, plasma y/o suero del mamífero, en donde una cantidad o nivel menor es indicativo de la presencia, riesgo, progresión o gravedad de dicha enfermedad.

2. Un método in vitro para evaluar la eficacia de un tratamiento contra la enfermedad de CMT en un mamífero, comprendiendo el método determinar en una muestra de sangre, plasma y/o suero del mamífero, durante el tratamiento, la cantidad (relativa) o nivel de colesterol libre, y comparar dicha cantidad o nivel con un nivel de colesterol libre determinado antes del tratamiento o en una etapa anterior del tratamiento en dicho mamífero, en donde un aumento es indicativo de la eficacia del tratamiento.

9. Uso del colesterol libre en un método in vitro de detección de la predisposición o de diagnóstico y/o pronóstico de la enfermedad de CMT y/o en un método de evaluación del tratamiento de la enfermedad de CMT en un sujeto mamífero.

13. Uso in vitro de un kit que comprende al menos un compuesto que se une o reacciona con el colesterol libre en el diagnóstico, pronóstico y/o para evaluar la eficacia de un tratamiento o seguir la evolución de la enfermedad de CMT1A.

Las realizaciones preferidas se definen en las reivindicaciones dependientes 3-8 y 10-12.

El biomarcador usado en la invención es o comprende al menos colesterol libre.

Descripción detallada de la invención La presente invención proporciona nuevos métodos de diagnóstico y herramientas para la CMT y otros trastornos relacionados.

Dentro del contexto de esta invención, la enfermedad de CMT incluye CMT1A, CMT1B, CMT1C, CMT1D, CMT1X, CMT2A, CMT2B, CMT2D, CMT2E CMT2F, CMT2I, CMT2J, CMT2-P0, CMT2K, CMT4A, CMT4B1, CMT4B2, CMT4C, CMT4D, CMT4F, CMT4, AR-CMT2A, CMT4J u otras formas de la enfermedad de Charcot-Marie-Tooth. En la realización más preferida, la enfermedad de CMT es CMT1A.

El propósito de la presente invención es proporcionar nuevos biomarcadores de fluidos biológicos para el diagnóstico o control de la CMT, y para evaluar la sensibilidad de los sujetos o la eficacia de tratamientos terapéuticos en sujetos que tienen la enfermedad de CMT o un trastorno relacionado. Por lo tanto, según una realización preferida, el método de la invención... [Seguir leyendo]

1. Un método in vitro para detectar la presencia o el riesgo de enfermedad de CMT en un mamífero, o para ayudar en el diagnóstico de la enfermedad de CMT, comprendiendo el método determinar la cantidad (relativa) o nivel de colesterol libre en una muestra de sangre, plasma y/o suero del mamífero, en donde una cantidad o nivel menor es indicativo de la presencia, riesgo, progresión o gravedad de dicha enfermedad.

2. Un método in vitro para evaluar la eficacia de un tratamiento contra la enfermedad de CMT en un mamífero, comprendiendo el método determinar en una muestra de sangre, plasma y/o suero del mamífero, durante el tratamiento, la cantidad (relativa) o nivel de colesterol libre, y comparar dicha cantidad o nivel con un nivel de colesterol libre determinado antes del tratamiento o en una etapa anterior del tratamiento en dicho mamífero, en donde un aumento es indicativo de la eficacia del tratamiento.

3. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha cantidad o nivel de colesterol libre se mide en relación con el colesterol total.

4. El método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende la determinación de uno cualquiera de las siguientes combinaciones de biomarcadores:

-colesterol libre y alanina;

-colesterol libre y T4 y triptófano e hidroxiprolina;

-colesterol libre e hidroxiprolina;

-colesterol libre y T4 y triptófano;

-colesterol libre y T4 y serotonina;

-colesterol libre y T4 e hidroxiprolina;

-colesterol libre y T4; o

-colesterol libre y serotonina.

5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde se usa al menos un ensayo de diagnóstico o marcador adicional para la enfermedad de CMT, seleccionado de ensayo o marcador de ácidos nucleicos, proteínico, fisiológico, neurofisiológico, genético, de comportamiento, electrofisiológico, clínico y fenotípico.

6. Un método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el nivel de dicho (s) biomarcador (es) se compara con un valor de referencia, en donde una desviación de dicho valor es indicativo de la presencia, riesgo, progresión o gravedad de la enfermedad de CMT.

7. Un método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para el pronóstico de la enfermedad de CMT, subclasificación de la enfermedad de CMT, o etapa de estratificación de pacientes en ensayos clínicos.

8. El método de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la enfermedad de CMT es CMT1A.

9. Uso del colesterol libre en un método in vitro de detección de la predisposición a o diagnóstico y/o pronóstico de la enfermedad de CMT y/o en un método de evaluación del tratamiento de la enfermedad de CMT en un sujeto mamífero.

10. El uso de la reivindicación 9, en donde el nivel del colesterol libre se usa en relación con el colesterol total.

11. El uso de la reivindicación 9 o 10, en donde el colesterol libre se usa junto con al menos un ensayo de diagnóstico o marcador adicional para la enfermedad de CMT, seleccionado preferiblemente de ensayo o marcador de ácidos nucleicos, proteínico, fisiológico, neurofisiológico, genético, de comportamiento, electrofisiológico, clínico y fenotípico.

12. El uso de la reivindicación 9 o 10, en donde el nivel de colesterol libre se compara con un valor de referencia en donde una desviación de dicho valor es indicativa de la presencia, riesgo, progresión o gravedad de la enfermedad de CMT.

13. Uso de un kit que comprende al menos un compuesto que se une o reacciona con el colesterol libre, en el diagnóstico, pronóstico y/o para la evaluación de la eficacia de un tratamiento o el seguimiento de la evolución de la enfermedad de CMT1A.