Un compuesto &946;-D nucleósido de fórmula general [I-a]: **(Ver fórmula)**o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en la que: D es hidrógeno; X1 es independientemente hidrógeno, NH2, NHR4, NHOR4, OH u OR4; Y1 es O; R1 es hidrógeno, alquilo inferior, F, I, NHR5, NR5R5' u OR5; y R1' es hidrógeno; R2 es hidrógeno, halógeno (F, Cl, Br o I), OH, u OCH3; R2' es hidrógeno o halógeno (F, Cl, Br o I); cada R3 y R3' es independientemente hidrógeno, halógeno (F, Cl, Br o I), OH u OCH3; cada R4, R5 y R5' es independientemente hidrógeno, alquilo inferior, arilo o arilalquilo tal como fenilo o bencilo sin sustituir o sustituido; de tal forma que para el nucleósido de fórmula general [I-a] al menos uno de R2 y R2' sea hidrógeno y al menos uno de R3 y R3' sea hidrógeno; en la que alquilo inferior se refiere a un grupo alquilo lineal, ramificado o cíclico, saturado, de C1 a C4, para su uso en el tratamiento o profilaxis de infección viral por Flaviviridae; con la condición de que cuando la infección viral por Flaviviridae es una infección por el virus de la hepatitis C, el compuesto de fórmula general [I-a] no sea 2'-desoxi-5fluorouridina, 1-(&946;-D-arabinofuranosil)-5-fluorouracilo, 1-(&946;-D-arabinofuranosil)uracilo, 1(&946;-D-arabinofuranosil)-5-metiluracilo, 1-(&946;-D-arabinofuranosil)-5-yodouracilo, 1-(&946;-Darabinofuranosil)-5-fluorocitosina, 2',3'-didesoxicitidina, 1-(&946;-D-arabinofuranosil)-5etiluracilo, 2'-cloro-2'-desoxiuridina, 2'-bromo-2'-desoxiuridina, 1-(2-desoxi-&946;-Dlixofuranosil)-5-metiluracilo, 2',3'-didesoxi-5-etil-3'-metoxiuridina, 2',3'-didesoxi-5-etil-3'yodouridina ni 4-oximino-1-(&946;-D-arabinofuranosil)pirimidin-2(1H)-ona

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención incluye compuestos para su uso en el tratamiento de infecciones por Flaviviridae.

La presente solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional de Estados Unidos Nº 60/241.488, presentada el 18 de octubre de 2000, y la solicitud de patente provisional de Estados Unidos Nº 60/282.156, presentada el 6 de abril de 2001. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Flaviviridae

Flaviviridae es un grupo de virus de ARN monocatenario positivo con un tamaño de genoma de 9-15 kb. Son virus con envuelta de aproximadamente 40-50 nm. En el Comité Internacional de Taxonomía de Virus está disponible una visión general de la taxonomía de los Flaviviridae. La familia Flaviviridae consiste en tres géneros.

1. Flavivirus. Este género incluye el grupo del virus del Dengue (virus del Dengue, virus del Dengue tipo 1, virus del Dengue tipo 2, virus del Dengue tipo 3, virus del Dengue tipo 4), el grupo del virus de la encefalitis japonesa (virus Alfuy, virus de la encefalitis japonesa, virus Kookaburra, virus Koutango, virus Kunjin, virus de la encefalitis de Murray Valley, virus de la encefalitis de San Louis, virus de Stratford, virus Usutu y Virus del Nilo Occidental), el grupo del virus Modoc, el grupo del virus Río Bravo (virus Apoi, virus Rio Bravo, virus Saboya), el grupo del virus Ntaya, el grupo de la encefalitis transmitida por garrapatas (virus de la encefalitis transmitida por garrapatas), el grupo del virus Tyuleniy, el grupo de virus Uganda S y el grupo de virus de la Fiebre Amarilla. Aparte de estos grupos principales, hay algunos Flavivirus adicionales que no están clasificados.

2. Hepacivirus. Este género contiene solo una especie, el virus de la Hepatitis C (VHC), que está compuesto por muchas clases, tipos y subtipos.

3. Pestivirus. Este género incluye el virus de la diarrea viral bovina-2 (VDVB-2), Pestivirus tipo 1 (incluyendo VDVB), Pestivirus tipo 2 (incluyendo Virus del Cólera del Cerdo) y Pestivirus tipo 3 (incluyendo el Virus de la Enfermedad de la Frontera). Una de las infecciones más importantes por Flaviviridae en seres humanos se produce

por el virus de la hepatitis C (VHC). Ésta es la segunda causa principal de hepatitis viral, con una estimación de 170 millones de portadores en todo el mundo (Organización Mundial de la Salud; Hepatitis C: prevalencia global, Registro Epidemiológico Semanal, 1997, 72, 341), de los que 3,9 millones residen en los Estados Unidos (Centros de Control de la Enfermedad; datos no publicados, http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/heptab3.htm).

La organización genómica de los Flaviviridae comparte muchas características comunes. El genoma del virus de la hepatitis C (VHC) con frecuencia se usa como modelo. El VHC es un virus pequeño, con envuelta, con un genoma de ARN monocatenario positivo de ~ 9,6 kb dentro de la nucleocápsida. El genoma contiene una sola fase de lectura abierta (ORF) que codifica una poliproteína de poco más de 3.000 aminoácidos, que se escinde para generar las proteínas virales estructurales y no estructurales maduras. La ORF está flanqueada por regiones 5' y 3' no traducidas (NTR) de unos pocos cientos de nucleótidos de longitud, que son importantes para la traducción y replicación del ARN. La poliproteína traducida contiene el núcleo estructural (C) y las proteínas de la envuelta (E1, E2, p7) en el extremo N, seguido de las proteínas no estructurales (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B). Las proteínas estructurales maduras se generan por escisión por la peptidasa señal del huésped (véase: Hijikata, M. y col. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1991, 88, 5547; Hussy, P. y col. Virology, 1996, 224, 93; Lin, C. y col. J. Virol., 1994, 68, 5063; Mizushima, H. y col. J. Virol., 1994, 68, 2731; Mizushima, H. y col. J. Virol., 1994, 68, 6215; Santolini, E. y col. J. Virol., 1994, 68, 3631; Selby

M. J. y col. Virology, 1994, 204, 114; y Grakoui, A. y col. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1993, 90, 10538). La unión entre NS2 y NS3 se escinde autocatalíticamente por la NS2/NS3 proteasa (véase: Hijikata, M. y col. J. Virol., 1993, 67, 4665 y Bartenschlager, R. y col. J. Virol., 1994, 68, 5045), mientras que las otras cuatro uniones se escinden por el dominio serina proteasa N-terminal de NS3 complejado con NS4A. (Véase: Failla, C. y col. J. Virol., 1994, 68, 3753; Lin, C. y col. J. Virol., 1994, 68, 8147; Tanji, Y. y col. J. Virol., 1995, 69, 1575 y Tai, C. L. y col. J. Virol., 1996, 70, 8477). La proteína NS3 también contiene la actividad helicasa dependiente de NTP que desenrolla el ARN dúplex durante la replicación. La proteína NS5B posee actividad ARN polimerasa dependiente de ARN (RDRP) (véase: Behrens, S. E. y col. EMBO J., 1996, 15, 12; Lohmann, V. y col. J. Virol., 1997, 71, 8416-8428 y Lohmann, V. y col., Virology, 1998, 249, 108), que es esencial para la replicación viral. (Ferrari, E. y col. J. Virol., 1999, 73, 1649). Se subraya que, a diferencia de VHB o VIH, en la replicación del VHC no está implicado ningún ADN. Recientemente en experimentos in vitro usando NS5B, se estudió la especificidad de sustrato por VHC-RDRP usando guanosina 5'-monofosfato (GMP), 5'-difosfato (GBP), 5'trifosfato (GTP) y el 5'-trifosfato de 2'-desoxi y 2',3'-didesoxi guanosina (dGTP y ddGTP, respectivamente). Los autores reivindicaron que VHC-RDRP tiene una especificidad estricta por ribonucleósido 5'-trifosfatos y requiere los grupos 2' y 3'-OH. (Lohmann; Virology, 108). Sus experimentos sugieren que la presencia de sustituyentes 2' y 3' sería el pre-requisito para que nucleósido 5'-trifosfatos interaccionaran con VHC-RDRP y actuaran como sustratos o inhibidores.

Es un objeto de la presente invención proporcionar un compuesto, y una composición para su uso en el tratamiento de un huésped, incluyendo animales y especialmente seres humanos, infectado con Flaviviridae.

Es otro objeto proporcionar una composición para su uso en el tratamiento de un huésped, incluyendo animales y especialmente seres humanos, infectado con encefalitis C o VDVB.

También se describe un procedimiento más eficaz para cuantificar la carga viral y, en particular, la carga de VDVB o VHC, en un huésped, incluyendo animales, especialmente seres humanos. SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona compuestos como se definen en las reivindicaciones para su uso en el tratamiento de un huésped infectado con un virus que pertenece a la familia Flaviviridae.

Específicamente, la invención también incluye compuestos para su uso en el tratamiento o prevención de una infección por Flaviviridae, incluyendo todos los miembros del género Hepacivirus (VHC), género Pestivirus (VDVB, VCFP (virus clásico de la fiebre porcina), VEB (virus de la enfermedad de Borna)) o género Flavivirus (virus del Dengue, grupo del virus de la encefalitis japonesa (incluyendo el Virus del Nilo Occidental) y virus de la fiebre amarilla).

En una realización, el nucleósido tiene un valor de CE50 (concentración eficaz para conseguir una inhibición viral del 50%), cuando se ensaya en un ensayo basado en células apropiado, menor de 15 micromolar y, más particularmente, menor de 10 ó 5 micromolar. En una realización preferida, el nucleósido está enriquecido enantioméricamente.

La actividad y toxicidad de los compuestos descritos en el presente documento pueden evaluarse de acuerdo con cualquier procedimiento conocido. A continuación se proporciona un procedimiento eficaz para cuantificar la carga viral en un huésped usando la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real ("RT-PCR"). El procedimiento implica el uso de una molécula de sonda fluorescente inactivada, que puede hibridarse con el ADN o ARN viral diana. Después de la degradación exonucleolítica, puede supervisarse una señal fluorescente detectable. Usando esta técnica, el ADN o ARN amplificado por RT-PCR puede detectarse en tiempo real supervisando la presencia de señales de fluorescencia.

Esta memoria descriptiva demuestra:

(a) un procedimiento para cuantificar la carga viral en tiempo real usando RT-PCR como se describe en el presente documento;

(b) un procedimiento para cuantificar la carga viral de un Flaviviridae, incluyendo VDVB y VHC, en un huésped en tiempo real usando la RT-PCR, como se describe en el presente documento;

(c) un procedimiento para cuantificar la carga viral de VDVB en una línea celular MDBK

o en una muestra de huésped en tiempo real usando la RT-PCR, como se describe en el presente documento;

(d) una molécula de sonda diseñada para emitir fluorescencia tras la degradación... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto β-D nucleósido de fórmula general [I-a]:

**(Ver fórmula)**

5 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: D es hidrógeno; X1 es independientemente hidrógeno, NH2, NHR4, NHOR4, OH u OR4; Y1 es O; R1 es hidrógeno, alquilo inferior, F, I, NHR5, NR5R5' u OR5; y R1' es hidrógeno; R2 es hidrógeno, halógeno (F, Cl, Br o I), OH, u OCH3; R2' es hidrógeno o halógeno (F, Cl, Br o I); cada R3 y R3' es independientemente hidrógeno, halógeno (F, Cl, Br o I), OH u OCH3; cada R4, R5 y R5' es independientemente hidrógeno, alquilo inferior, arilo o arilalquilo tal como fenilo o bencilo sin sustituir o sustituido; de tal forma que para el nucleósido de fórmula general [I-a] al menos uno de R2 y R2' sea hidrógeno y al menos uno de R3 y R3' sea hidrógeno; en la que "alquilo inferior" se refiere a un grupo alquilo lineal, ramificado o cíclico, saturado, de C1 a C4, para su uso en el tratamiento o profilaxis de infección viral por Flaviviridae; con la condición de que cuando la infección viral por Flaviviridae es una infección por el virus de la hepatitis C, el compuesto de fórmula general [I-a] no sea 2'-desoxi-5fluorouridina, 1-(β-D-arabinofuranosil)-5-fluorouracilo, 1-(β-D-arabinofuranosil)uracilo, 1(β-D-arabinofuranosil)-5-metiluracilo, 1-(β-D-arabinofuranosil)-5-yodouracilo, 1-(β-Darabinofuranosil)-5-fluorocitosina, 2',3'-didesoxicitidina, 1-(β-D-arabinofuranosil)-5etiluracilo, 2'-cloro-2'-desoxiuridina, 2'-bromo-2'-desoxiuridina, 1-(2-desoxi-β-Dlixofuranosil)-5-metiluracilo, 2',3'-didesoxi-5-etil-3'-metoxiuridina, 2',3'-didesoxi-5-etil-3'yodouridina ni 4-oximino-1-(β-D-arabinofuranosil)pirimidin-2(1H)-ona.

2. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en el que el β-D nucleósido de la fórmula (I-a) se selecciona entre uno de los siguientes:

**(Ver fórmula)**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3.

**(Ver fórmula)**

en la que D es hidrógeno; y el β-D nucleósido de la fórmula (I-a) se selecciona entre uno de los

**(Ver fórmula)**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o profilaxis de infección viral por Flaviviridae.

4.

**(Ver fórmula)**

10 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento o profilaxis de infección viral por Flaviviridae.

5. El compuesto para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la infección por Flaviviridae es infección por el virus de la hepatitis C.

6. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 5, en el que la infección por Flaviviridae es infección por el virus de la hepatitis C y en el que el compuesto está en un vehículo farmacéuticamente aceptable.