Modulación antisentido de la expresión de apolipoproteína B.

Un oligonucleótido con la secuencia de bases nucleicas GCCTCAGTCTGCTTCGCACC (SEQ ID NO:

2) queinhibe la expresión de la apolipoproteína B, para uso en la reducción de los niveles de partículas pequeñas deLDL en un sujeto humano que muestra un nivel elevado de partículas pequeñas de LDL, en donde el nivel totalde colesterol LDL en dicho sujeto no es elevado.

Modulación antisentido de la expresión de apoliproteína B.

Antecedentes de la invención

Campo de la invención En esta memoria se describen composiciones y métodos para reducir el colesterol LDL y el tratamiento de estados asociados con niveles elevados de colesterol. Más específicamente, la invención se refiere a composiciones y a métodos para inhibir la expresión de la apolipoproteína B en el hígado.

Descripción de la técnica relacionada La cardiopatía coronaria (CHD, de las siglas en inglés de “coronar y heart disease”) ha sido la principal causa de muerte en los Estados Unidos durante más de un siglo, y complicaciones procedentes de la aterosclerosis son la causa más común de muerte en las sociedades occidentales (Knopp, New Engl. J. Medicine, 1999, 341, 498511; Davis y Hui, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2001, 21, 887-898; Bonow, Circulation, 2002, 106, 31403141) . Un colesterol LDL (lipoproteína de baja densidad) elevado está reconocido ampliamente como un factor de riesgo para la cardiopatía coronaria. Sin embargo, a pesar de la intervención farmacológica, muchas personas son incapaces de disminuir los niveles de colesterol LDL.

Las directrices para una terapia reductora de lípidos fueron establecidas por el Panel III de tratamiento de adultos del “National Cholesterol Education Program” (NCEP) en 2001. Modificaciones de estas directrices fueron recomendadas por el Comité de Coordinación del NCEP en 2004, e incluían unos objetivos con tratamientos más agresivos (Grundy et al., Circulation, 2004, 110, 227-239) . Estas directrices definen 3 categorías de riesgo de eventos coronarios principales y proporcionan unos niveles deseables de colesterol LDL como objetivo. Los que tienen un mayor riesgo son los pacientes con CHD o un riesgo equivalente a CHD y deben mantener el colesterol LDL por debajo de 100 mg/dL. Las directrices más recientes del NCEP recomiendan que los pacientes con un riesgo muy elevado de CHD empleen una terapia con fármacos para lograr niveles de colesterol LDL inferiores a 70 mg/dL. Un riesgo equivalente a CHD se define como sujetos con diabetes, enfermedad vascular periférica, aneurisma de la aorta abdominal, enfermedad sintomática de la arteria carótida, y aquellos con factores de riesgo múltiples que proporcionan un riesgo de CHD en 10 años superior al 20%. Para la segunda categoría, los pacientes con riesgo moderadamente alto de CHD con factores de riesgo múltiples (2 o más) , en los que el riesgo de cardiopatía coronaria en 10 años es del 20%, el objetivo es un colesterol LDL inferior a 130 mg/dL. Las recomendaciones más recientes incluyen una opción terapéutica para disminuir los niveles de colesterol LDL a menos de 100 mg/dL en la categoría de riesgo moderadamente alto. La tercera categoría incluye personas con factores de riesgo de 0-1 y el colesterol LDL objetivo es menor de 160 mg/dL. Los factores de riesgo incluyen la edad, el tabaquismo, la hipertensión, un colesterol HDL bajo y antecedentes familiares de CHD. La terapia con fármacos se debe iniciar cuando el colesterol LDL en suero se mantiene por encima de 130, 160 y 190 mg/dL en los 3 grupos de riesgo, respectivamente, a pesar de los cambios terapéuticos del estilo de vida (Grundy et al., Circulation, 2004, 110 227-239) .

Las lipoproteínas de baja densidad son una de las cinco grandes clases de lipoproteínas, que incluyen las siguientes: quilomicrones, responsables del transporte de los lípidos de la dieta desde el intestino a los tejidos; lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) ; lipoproteínas de densidad intermedia (IDL) ; lipoproteínas de baja densidad (LDL) ; todas ellas transportan triacilgliceroles y colesterol desde el hígado a los tejidos; y las lipoproteínas de alta densidad (HDL) , que transportan el colesterol endógeno desde los tejidos al hígado. Las partículas de lipoproteínas experimentan un procesamiento metabólico continuo y tienen propiedades y composiciones variables. Los componentes proteicos de las lipoproteínas se conocen como apolipoproteínas. Al menos nueve apolipoproteínas, una de las cuales es la apolipoproteína B, se distribuyen en cantidades significativas entre las diversas lipoproteínas humanas.

La apolipoproteína B (también conocida como ApoB, apolipoproteína B-100; ApoB-100, apolipoproteína B-48; ApoB-48 y antígeno Ag (x) ) , es una glicoproteína grande implicada en el ensamblaje y la secreción de lípidos y en el transporte y la absorción mediada por receptor, y la entrega de distintas clases de lipoproteínas. La apolipoproteína B realiza una variedad de funciones, incluyendo la absorción y el procesamiento de los lípidos de la dieta, así como la regulación de los niveles de lipoproteínas circulantes (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) .

En los mamíferos existen dos formas de apolipoproteína B. La ApoB-100 representa la proteína de longitud completa que contiene 4536 residuos de aminoácidos, sintetizada principalmente en el hígado humano (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) . Una forma truncada, conocida como apoB-48, es colineal con los 2152 residuos de aminoácidos terminales y se sintetiza en el intestino delgado de todos los mamíferos (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) . En los seres humanos, apoB-48 circula asociada con los quilomicrones y los restos de quilomicrones y estas partículas son eliminadas por un receptor distinto conocido como proteína relacionada con el receptor de LDL (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) . La apoB-48 se puede considerar como una adaptación, según la cual el lípido de la dieta se entrega desde el intestino delgado al hígado, mientras que la apoB-100 participa en el transporte y la entrega de colesterol (Davidson and Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) . La apoB-100 es el principal componente proteico de LDL y contiene el dominio necesario para la interacción de esta especie de lipoproteína con el receptor de LDL. Además, la apoB-100 contiene un residuo de cisteína no emparejado que media la interacción con la apolipoproteína (a) y genera lipoproteína (a) o Lp (a) , otra lipoproteína distinta con potencial aterogénico (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) . Niveles plasmáticos elevados de lipoproteína Lp (a) que contiene apoB-100, están asociados con un mayor riesgo de aterosclerosis y sus manifestaciones, que pueden incluir la hipercolesterolemia (Seed et al., N. Engl. J. Med., 1990, 322, 1494-1499) , infarto de miocardio (Sandkamp et al., Clin. Chem., 1990, 36, 20-23) y trombosis (Nowak-Gottl et al., Pediatrics, 1997, 99, E11) .

La apolipoproteína B está implicada en la homeostasis del colesterol y su hiperproducción se ha asociado con varias enfermedades, incluyendo hipercolesterolemia familiar, apoB-100 defectuosa familiar e hipercolesterolemia familiar combinada (Kane y Havel, “The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Diseases”, 2001, 8ª edición, 2717-2751) . Los trastornos en el metabolismo de apoB-100 que se corresponden con un mayor riesgo de CHD, también se observan en la diabetes y la obesidad (Grundy, Am. J. Cardiol., 1998, 81, 18B-25B; Chan et al., Diabetes, 2002, 51, 2377-2386; Chan et al., Metabolism, 2002, 51, 1041-1046) . Además, estudios genéticos en modelos de ratón han mostrado una correlación entre apolipoproteína B elevada, niveles elevados de colesterol y aterosclerosis (Kim y Young, J. Lipid Res., 1998, 39, 703-723; Nishina et al., J. Lipid Res., 1990, 31, 859869) .

En estudios de pacientes con hipobetalipoproteinemia familiar (FHBL) , estos pacientes presentan niveles séricos reducidos de apolipoproteína B, niveles séricos disminuidos de colesterol LDL y una menor incidencia de la enfermedad arterial coronaria (Schonfeld et al., J. Lipid Res., 2003, 44, 878-883) . Estudios en múridos han mostrado que ratones que tienen deficiencias heterocigotas en la apolipoproteína B, muestran niveles séricos reducidos de colesterol LDL y apolipoproteína B, y, además, están protegidos de la hipercolesterolemia inducida por dieta. (Farese et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1995, 92, 1774-1778) .

Los documentos WO 2004/044181, WO 03/097662 y WO 03/011887 describen oligonucleótidos complementarios (antisentido) dirigidos a la apolipoproteína B.

Compendio de la invención La presente invención proporciona un oligonucleótido con la secuencia de bases nucleicas GCCTCAGTCTGCTTCGCACC (SEQ ID NO:2) que inhibe la expresión de la apolipoproteína B, para uso en la reducción de los niveles de partículas pequeñas de LDL en un sujeto humano que muestra un nivel elevado de partículas pequeñas de LDL, en donde el nivel total de colesterol LDL en dicho sujeto no es elevado.

1. Un oligonucleótido con la secuencia de bases nucleicas GCCTCAGTCTGCTTCGCACC (SEQ ID NO:2) que inhibe la expresión de la apolipoproteína B, para uso en la reducción de los niveles de partículas pequeñas de LDL en un sujeto humano que muestra un nivel elevado de partículas pequeñas de LDL, en donde el nivel total

de colesterol LDL en dicho sujeto no es elevado.

2. El oligonucleótido de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho oligonucleótido es un oligonucleótido quimérico con una longitud de 20 nucleótidos, compuesto por una región “interna” central que consiste en diez 2’-desoxinucleótidos, que está flanqueada en ambos lados (direcciones 5’ y 3’) por “alas” de cinco nucleótidos, compuestas de 2’-O-metoxietil nucleótidos, en donde los enlaces internucleósidos son de tipo fosforotioato a lo largo del oligonucleótido, y en donde todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas.