Métodos para la síntesis de polipéptidos hetero-multinuméricos en levaduras usando una estrategia de apareamiento haploide.

Un método para la síntesis y recuperación de una proteína heteromultimérica heteróloga (no de levadura),

biológicamente activa, secretada que comprende al menos dos cadenas de polipéptido de subunidades no idénticas, caracterizado por las siguientes etapas:

(i) producir una o varias células de levadura de Pichia diploides estables mediante apareamiento o fusión de esferoplastos de células de Pichia haploides en condiciones tales que dichos eventos de apareamiento o fusión de esferoplastos dan como resultado la producción de una o varias células de Pichia diploides, donde dichas una o varias células de Pichia diploides después de dicho apareamiento o fusión comprenden constructos de expresión que proporcionan la expresión y secreción de al menos dos cadenas de polipéptido no idénticas que constituyen dicha proteína heteromultimérica, y cuyas células de Pichia diploides estables son susceptibles de ensamblaje y expresión y expresión y secreción prolongada de dicha proteína heteromultimérica en un medio de cultivo que contiene dichas una o varias células de Pichia diploides estables cuando dichas una o varias células de Pichia diploides se cultivan en condiciones de cultivo apropiadas;

(ii) después de efectuar dicho apareamiento o fusión de esferoplastos, identificar y aislar las una o varias células de levadura de Pichia diploides resultantes que contienen constructos de expresión que proporcionan la expresión y secreción estables de al menos dos cadenas de polipéptido no idénticas que constituyen dicha proteína heteromultimérica cuando dichas una o varias células de Pichia diploides se cultivan en condiciones de cultivo apropiadas;

(iii) hacer crecer dichas una o varias células de Pichia diploides aisladas o su progenie diploide en un medio de cultivo en condiciones que dan como resultado la expresión, ensamblaje y secreción de dicha proteína heteromultimérica biológicamente activa en el medio de cultivo; y

(iv) recuperar la proteína heteromultimérica resultante del medio de cultivo.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2004/035302.

Solicitante: KECK GRADUATE INSTITUTE.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 535 WATSON DRIVE CLAREMONT, CA 91711 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: LATHAM,John, CREGG,JAMES M, LITTON,MARK, SCHATZMAN,RANDALL, TOLSTORUKOV,ILYA I.

Fecha de Publicación: 5 de Septiembre de 2012.

Clasificación Internacional de Patentes:

C07K16/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
C12N15/81 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para levaduras.

PDF original: ES-2393555_T3.pdf

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