Un método para preparar una red de fibrina sólida capaz de regenerar tejido en un organismo vivo,

comprendiendo el método:

extraer sangre de un paciente en un dispositivo de recogida principal (10) que tiene un precinto (22);

proporcionar un depósito (94) que incluye una cámara (96) y un conducto en comunicación fluida con la cámara (96), estando la cámara (96) al menos parcialmente llena con un activador de la coagulación del calcio (104), estando al menos parcialmente lleno el conducto con un medio de bloqueo (108) para evitar que el activador fluya desde la cámara a condiciones ambientales;

conectar el depósito (94) con el dispositivo de recogida principal (10) de modo que la cámara, el conducto y el dispositivo de recogida estarían en comunicación fluida si no fuera por el medio de bloqueo (108);

centrifugar el dispositivo de recogida principal (10) a una primera velocidad, siendo la primera velocidad suficiente para separar el plasma de la sangre, aunque no suficiente para mover el medio de bloqueo (108) en el conducto al dispositivo de recogida principal; y

centrifugar el dispositivo de recogida principal a una segunda velocidad, siendo la segunda velocidad suficiente para mover al menos una parte del medio de bloqueo (108) desde el conducto al dispositivo de recogida principal, permitiendo de este modo que el activador de la coagulación del calcio fluya al dispositivo de recogida (10) y entre en contacto con el plasma, y

continuar centrifugando el dispositivo a la segunda velocidad, formando de este modo una red de fibrina sólida adecuada para regenerar tejido en un organismo vivo

Métodos para preparar cola de fibrina autóloga.

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

Esta solicitud es una continuación parcial y reivindica prioridad sobre la solicitud de Estados Unidos Nº 09/446.729 presentada el 13 de julio de 2001 que se expidió como Patente de Estados Unidos Nº 6.368.298 B1, que es una solicitud de 35 U.S.C. NAK 371 y reivindica prioridad sobre la solicitud internacional Nº PCT/IT98/00173 presentada el 24 de junio de 1998, que reivindica prioridad sobre la solicitud Italiana Nº MI97A001490 presentada el 24 de junio de 1997. Esta solicitud reivindica prioridad sobre cada una de las solicitudes mencionadas anteriormente.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a un método para preparar una red sólida de fibrina.

Se sabe que la cola de fibrina es un hemoderivado que se usa en gran medida como adhesivo quirúrgico tópico o agente hemostático. Hay varios kits disponibles en el mercado que contienen fibrinógeno concentrado de donantes, asociado con un activador proteico de origen humano o animal, tal como trombina o batroxobina, para obtener cola de fibrina heteróloga.

Dichos kits conocidos implican el uso de material de origen humano o animal que, debido a su origen, podría provocar una posible contaminación viral y graves riesgos para el destinatario de la cola de fibrina. En el pasado las autoridades se han visto obligadas a retirar del mercado o incluso prohibir los hemoderivados obtenidos usando material de origen humano o animal. Además, se conocen en la bibliografía casos de rechazo provocados por reimplantar fibrina producida usando proteínas humanas o animales en pacientes. Dichos casos de hecho se deben al origen heterólogo, con respecto al organismo destinatario, de la proteína selladora que se reimplanta o algunos de los componentes usados para prepararla.

La cola de fibrina autóloga, es decir, cola de fibrina obtenida de forma autóloga de la propia sangre de un paciente, es más fiable con respecto a los riesgos de rechazo y/o infección. Ya se han descrito varios procedimientos para obtener cola de fibrina autóloga improvisada, pero no está disponible en el mercado ningún kit "listo para usar" aunque pueden encontrarse algunas referencias relevantes en la bibliografía de patentes.

La Patente de Estados Unidos Nº 5.733.545 describe un concentrado de capa leuco-plaquetaria de plasma para combinar con un activador de fibrinógeno para formar una cola de plaquetas selladora de heridas. El método descrito en esta patente permite procesar la sangre de un paciente para obtener cola de fibrina autóloga, pero los métodos usan trombina o batroxobina como activador de fibrinógeno. Estos activadores son de naturaleza humana o animal e implican por lo tanto el riesgo de rechazo y/o infecciones víricas para el paciente.

El documento WO 98/58689 describe un kit listo para usar para preparar cola de fibrina autóloga. Comprende un recipiente cerrado herméticamente que contiene cloruro cálcico como activador de la coagulación y, posiblemente ácido tranexámico o ácido epsilon-amino-caproico como estabilizador de fibrina. Para producir cola de fibrina autóloga, se extrae sangre venosa de un paciente, por ejemplo usando tubos de ensayo estériles. El tubo de ensayo se introduce después en una centrífuga adecuada. La muestra se centrifuga, separando de este modo los glóbulos rojos del plasma tratado con citrato. El tubo de ensayo que contiene el plasma separado se mantiene tapado en condiciones estériles y se coloca verticalmente en un estante para recuperar el propio plasma. La porción externa de la tapa del tubo de ensayo se esteriliza después usando alcohol desnaturalizado y después se introduce una aguja estéril, que está conectada a una jeringa estéril, en la tapa del tubo de ensayo. La aguja se separa de 3 a 4 mm del menisco de separación de las dos fases, y se retiran 4 ml de plasma. Usando la misma aguja, se perfora la tapa del recipiente mencionado anteriormente, que se ha esterilizado previamente usando alcohol. El plasma tratado con citrato contenido en la jeringa se absorbe completamente en el recipiente. Éste se agita suavemente y, después de aproximadamente dos minutos a 37ºC, se obtiene un coágulo de cola de fibrina estéril autóloga.

El documento WO 98/11925 describe un sistema para preparar cola de fibrina autóloga que comprende un recipiente cerrado herméticamente, para contener un medio de separación de centrífuga, y un recipiente secundario cerrado herméticamente para contener un activador de la coagulación del calcio. Se proporciona un tubo de conexión para conectar los recipientes principal y secundario.

El documento US 6.083.383 describe un sistema para preparar una cola de fibrina autóloga que comprende un recipiente principal cerrado herméticamente, para contener un medio de separación, y un recipiente secundario cerrado herméticamente para contener un activador de la coagulación del calcio.

El documento US 5.030.215 describe un sistema adicional para preparar una cola de fibrina autóloga que comprende un recipiente principal centrifugado cerrado herméticamente y un recipiente secundario cerrado herméticamente que contiene un activador de la coagulación del calcio. Los recipientes están conectados por un conducto.

La Patente de Estados Unidos Nº 5.555.007 describe un método y un aparato para preparar plasma concentrado para usar como un sellador tisular. El método consiste en separar plasma de sangre completa y retirar el agua de dicho plasma poniéndolo en contacto con un concentrador para proporcionar plasma concentrado que puede coagularse después con una solución que contiene trombina y calcio. El aparato comprende un primer separador de centrífuga en una primera cámara, un concentrador (por ejemplo dextranómero o poliacrilamida) incluido en una segunda cámara que comunica con la primera cámara, y un segundo separador. El método descrito en esta referencia requiere mucho tiempo para obtener el concentrado de plasma necesario para la posterior preparación de cola de fibrina autóloga y el aparato es caro y no desechable. El método no describe el uso de un activador de la coagulación del calcio, y requiere una etapa de preconcentración.

Muchos métodos y sistemas requieren la transferencia de un fluido de un recipiente a otro. Por ejemplo, muchos dispositivos químicos y médicos requieren la transferencia de un volumen requerido de líquido para reaccionar secuencialmente con diversos reactivos y alícuotas volumétricas específicas. Una práctica común es retirar los cierres de dos recipientes y pipetear líquido de un recipiente al otro. Esta práctica, sin embargo, expone la muestra a contaminantes ambientales. Por ejemplo, se usa esta técnica para transferir plasma que se ha separado de los glóbulos rojos en una muestra de sangre. Se requiere una técnica especial, sin embargo, para retirar el plasma en el menisco del interfaz. Frecuentemente los glóbulos rojos de la fracción inferior, no deseables y de alta densidad contaminan el plasma aspirado. Para evitar este problema, la pipeta se mantiene frecuentemente a una distancia segura del menisco (es decir, el separador entre el plasma y los glóbulos rojos), provocando de este modo una transferencia incompleta de la muestra. La transferencia incompleta de la fracción deseable produce un rendimiento de volumen inferior al óptimo y proporciones no estequiométricas de los reactivos de la muestra y los del segundo recipiente. Esta segunda condición puede ser un origen importante de variación en el rendimiento del producto. Este es el caso de muchas reacciones enzimáticas en las que las velocidades de reacción son máximas a ciertas proporciones estequiométricas y disminuyen rápidamente a proporciones mayores o menores.

En general, se desean métodos y sistemas para preparar cola de fibrina autóloga o una fibrina sólida que sea capaz de regenerar tejido en un organismo vivo.

Descripción detallada de los dibujos

La Figura 1 es una vista en perspectiva de un ejemplo de referencia de un sistema que no pertenece a la invención reivindicada pero que ilustra ciertas características de la invención.

La Figura 2 es una vista en sección transversal de un recipiente principal del ejemplo mostrado en la Figura 1.

La Figura 3 es una vista en sección transversal de una realización diferente del recipiente principal de la Figura 2.

La Figura 4 es una vista en sección transversal de una realización diferente del recipiente principal de la Figura 2.

La Figura 5 es una...

1. Un método para preparar una red de fibrina sólida capaz de regenerar tejido en un organismo vivo, comprendiendo el método:

2. El método de la reivindicación precedente, en el que se realiza la centrifugación del dispositivo de recogida principal (10) a la segunda velocidad durante un tiempo suficiente para centrifugar y coagular simultáneamente el plasma y el activador para formar la red de fibrina.

3. El método de una de las reivindicación precedentes, en el que el activador de la coagulación del calcio es al menos uno de cloruro cálcico, fluoruro cálcico, carbonato cálcico, gluconato cálcico, fumarato cálcico, piruvato cálcico y combinaciones de los mismos

4. El método de una de las reivindicación precedentes, en el que el conducto es una cánula (100), que tiene un extremo afilado, y en el que se realiza la conexión del depósito (94) al dispositivo de recogida principal (10) por la perforación del precinto con el extremo de la cánula (100).

5. El método de la reivindicación 4, en el que el extremo de la cánula (100) se cubre por una funda elastomérica (112) capaz de retraerse cuando el extremo perfora el precinto.

6. El método de una de las reivindicación precedentes, en el que la cámara (96) contiene uno o más de un antibiótico, un analgésico, un agente terapéutico contra el cáncer, un factor de crecimiento de plaquetas y una proteína morfogénica del hueso.