Método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune mediante la inducción de la presentación de antígeno mediante células presentadoras de antígeno que inducen tolerancia.

Una construcción de anticuerpo/péptido que comprende: (i) un anticuerpo que reconoce a L-SIGN y (ii) un péptido unido al anticuerpo,

en el que el péptido es un autoantígeno, en el que el autoantígeno se selecciona de entre el grupo que consiste en la decarboxilasa del ácido glutámico (GAD), un epítopo de la GAD, insulina, un epítopo de la insulina, la proteína de choque térmico (HSP), un epítopo de la HSP y antígenos de las células ß

Método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune mediante la inducción de la presentación de antígeno mediante células presentadoras de antígeno que inducen tolerancia

Campo técnico

Desarrollo y restauración de la tolerancia inmune natural a autoantígenos para tratar o prevenir enfermedades autoinmunes.

Antecedentes de la técnica relacionada

La diabetes mellitus insulino-dependiente ("DM1") es una enfermedad mediada por células T es un problema de salud importante, que afecta a más de 1,5 millones de estadounidenses. Esta enfermedad autoinmune resulta de la destrucción mediada por células T de células (3 productoras de Insulina de los Islotes de Langerhans en el páncreas. A pesar del tratamiento con insulina, las muertes resultantes de la DM T1 han aumentado en los últimos 2 años, mientras que la mortalidad por cáncer, enfermedades cardiovasculares y los accidentes cerebrovasculares han disminuido (Hurlbert et al, 21). Además, las complicaciones del tratamiento con insulina exógena Incluyendo nefropatía, neuropatía y retinopatía son muy debilitantes.

La DM T1 se considera una enfermedad mediada por Th1 y la Intervención temprana que desplaza la respuesta inmune hacia un tipo Th2, por ejemplo, mediante la administración slstémlca de IL-4, puede prevenir la aparición de la enfermedad (Cameron et al, 1997). El equilibrio de las células T efectoras, Th1 y Th2, puede ser Importante en el mantenimiento de la tolerancia Inmune, y el cambia en el equilibrio puede resultar en la autolnmunldad. Sin embargo, la protección contra la enfermedad autoinmune no es una propiedad Intrínseca de las células Th2 ya que también se ha demostrado que las líneas de células Th2 a partir de ratones NOD transfieren la enfermedad (Pakkala et al, 1997).

El sistema inmune ha evolucionado de manera compleja para mantener la auto-tolerancia. El timo ofrece una Importante selección Inicial de las células T. Esta selección da como resultado la exportación, a la periferia, de células T que son tolerantes a auto-antígenos presentes en el timo. Sin embargo, muchas proteínas específicas de tejido no se expresan a niveles suficientes para inducir tolerancia. Por ejemplo, las células T reactivas de los islotes de Langerhans se han encontrado en sujetos sanos, aunque presumiblemente de baja afinidad (Lohman et al. 1996). Existen varios mecanismos de tolerancia periférica complementan los mecanismos centrales de tolerancia en el timo para mantener las células T autoreactivas bajo control. Uno de los principales mediadores de la tolerancia periférica es la célula presentadora de antígeno ("APC"). APC, como las células dendríticas ("DC") y los macrófagos capturan los antígenos propios de otras células y los presentan a células T autoreactivas para inducir tolerancia de células T por deleción, anergia y / o generación de células T reguladoras (Heath y Carbone, 21). La hipótesis actual es que las APC Inmaduras, tales como APC en el sistema ¡nmunológico de estado estacionario, inducen la tolerancia en lugar de activar las células T, presumiblemente debido a la falta de moléculas coestimuladoras. Hawiger et al. se han dirigido al antígeno hacia la ruta de la clase principal de histocompatibilidad II ("MHC, II") de DC usando anticuerpos frente a DEC-25, un receptor de endosltos restringido a DC (Hawiger et al., 21). La presentación de antígeno por estas DC provocó una corta proliferación de células T CD4+, seguido por la deleción y los receptores permanecieron tolerantes al antígeno, como se muestra por la falta de respuesta a la posterior Inmunización de péptldo. En contraste, cuando la localización de antígeno fue acompañada por un fuerte estímulo de maduración de las DC tales como anti-CD4, se indujo la Inmunidad.

Las células dendríticas también pueden inducir tolerancia periférica mediante la generación de células T reguladoras que Influyen en las funciones de las células T efectoras a través de cltoquinas supresoras o un mecanismo dependiente del contacto (Roncarolo et al, 21; Jonulelt et al, 2; Dhodapkar y Stelnman, 21). Se han desarrollado una serie de diferentes protocolos para la inducción de células T reguladoras, en general, por medio de estimulación "subóptima" de células T. La estimulación subóptlma de células T se puede lograr mediante la presentación de antígenos en ausencia de co-estimulaclón, o Inflamación, o por bloqueo parcial del receptor de células T o sus co-receptores CD4 y CD8. El fenotipo y el mecanismo de acción de las células T reguladoras es heterogénea. Muchas células supresoras son CD4+ CD25+, sin embargo, está quedando cada vez más claro que en muchas situaciones las células CD4+ CD25- son igualmente eficaces. Otros marcadores Identificados en la población de células T reguladoras incluyen CD62L, GITR y CD13 (Lafallle y Lafaille, 22), y las células T reguladoras CD8 + también se han descrito (Dhodapkar y Stelnman, 22). Algunas células T reguladoras han demostrado producir la interleuqulna citoquina inmunosupresora ("IL")-1 (Wakkach et al, 21; Barrat et al. 22), mientras que las células T reguladoras inducidas por la tolerancia oral se han caracterizado por la producción de Factor-p de crecimiento transformante ("TGF-p"), además de las cltoquinas de tipo Th2 IL-4 e IL-1 (Welner, 21). Las células supresoras dependientes de contacto se han generado mediante la activación de las células T periféricas humanas CD4+ CD45RA+ en presencia de TGF-p (Yamlgawa et al, 21). Mientras que la Inducción de células T reguladoras requiere la estimulación a través del receptor de células T, su efecto supresor parece no ser específico de antígeno (Thorton y Shevach, 2).

Las células inmunoreguladoras T han demostrado desempeñar un papel en la modulación de las células T autorreactivas patógenas en los ratones NOD. Hay evidencia de que los ratones prediabéticos albergan células inmunoreguladoras T y que la disminución de su número, o su capacidad funcional, es un evento Importante que contribuye a la progresión de la enfermedad (Sempe et al, 1994). Los experimentos de cotransferencla han demostrado que los esplenocitos T CD4+ de ratones prediabéticos impiden totalmente la transmisión de enfermedades por las células diabetogénicas en receptores ¡nmunolncompetentes (Boitard et al, 1989; Hutchlngs & Cooke, 199). Además, la inducción de células T reguladoras por las CD inmaduras se correlaciona con la prevención de la enfermedad en el modelo de ratón NOD (Huges et al, 22).

En los seres humanos, las células T autorreactivas que responden a la Insulina, descarboxilasa del ácido glutámico ("GAD"), proteína de choque térmico ("HSP") 6, o molécula similar a la proteína tirosina-fosfatasa ("IA-2"), y otros antígenos de células (3 indefinidos han sido descritos (Roep et al, 199; Atklnson et al, 1992; Honeyman et al, 1993; Reijonen et al, 22).

GAD es una enzima biosintética del neurotransmisor Inhibidor del ácido gamma aminobutírico (Baekkeskov et al, 199). Se han clonado dos ¡soformas distintas con 65% de homología, GAD65 y GAD67. Aunque GAD65 es la ¡soforma predominante en los seres humanos, mientras que GAD67 es la forma principal en los ratones NOD, los anticuerpos contra ambas ¡soformas se detectan en los seres humanos (Kaufman et al, 1992). En los ratones NOD, los anticuerpos anti-GAD se detectaron antes, o en el momento de, ¡nsulitis, y antes de que se desarrollen anticuerpos frente a otros antígenos de las células (3. Este tiempo Implica que GAD es el antígeno primario que inicia la autoinmumdad de las células (3 en este modelo (Tlsch et al, 1993). La evidencia adicional para un papel importante en la diabetes de GAD proviene de las observaciones de muchos laboratorios que las células T específicas de GAD aisladas de bazo o el páncreas de ratones diabéticos pueden transferir la enfermedad a los animales no expuestos (Rohane et al, 1995; Wen et al, 1998; Zekzer et al, 1998). Aunque sigue habiendo controversia con respecto a la función central de GAD en la patogénesis de DM T1, la evidencia de los experimentos con animales sugiere al menos un papel importante de esta proteína.

La Inmunización con GAD65 purificada a una edad temprana, ya sea por vía ¡ntratímica o intravenosa puede inducir tolerancia de células T contra células (3 pancreáticas en ratones NOD, evitando de ese modo la ¡nsulitis y la diabetes (Tian et al, 1996; Ma et al, 1997). La inducción de tolerancia contra GAD también podría prevenir el desarrollo de reacciones ¡nmunltarlas contra otros antígenos, tales como HSP65. Otros estudios dirigidos contra péptidos de GAD fueron capaces de inducir la tolerancia (Tlsch et al, 21; Tisch et al, 1999; Zechel et al, 1998). La protección contra la aparición de la diabetes también se puede... [Seguir leyendo]

1. Una construcción de anticuerpo/péptido que comprende: (i) un anticuerpo que reconoce a L-SIGN y (ii) un péptido unido al anticuerpo, en el que el péptido es un autoantígeno, en el que el autoantígeno se selecciona de entre el

grupo que consiste en la decarboxilasa del ácido glutámlco (GAD), un epítopo de la GAD, Insulina, un epítopo de la Insulina, la proteína de choque térmico (HSP), un epítopo de la HSP y antígenos de las células (3.

2. La construcción de anticuerpo/péptido de acuerdo con la reivindicación 1, en la que I) el L-SIGN es un L-SIGN humano y ii) el péptido es un péptido humano.

3. Una composición que comprende una construcción de anticuerpo/péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 y un transportador aceptable a nivel farmacéutico.

4. Un método para producir anticuerpos modificados mediante métodos recombinantes, cuyo método comprende la 15 unión de un anticuerpo que reconoce a L-SIGN con un autoantígeno, en el que el autoantígeno se selecciona de

entre el grupo que consiste en la decarboxilasa del ácido glutámico (GAD), un epítopo de la GAD, insulina, un epítopo de la insulina, la proteína de choque térmico (HSP), un epítopo de la HSP y antígenos de las células (3.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 4, en el que i) el L-SIGN es un L-SIGN humano y ¡I) el péptido es un 2 péptido humano.