Método para predecir el patrón de locomoción en caballos.

. Método para predecir el patrón de locomoción en un caballo incluyendo la capacidad de usar aires alternativos,

trotar o pasear alta velocidad rápida, y realizar el adiestramiento, comprendiendo dicho método las etapas de;

i) extraer ADN de una muestra obtenida de un caballo,

ii) determinante dicho ADN la presencia o ausencia de al menos un marcador genético útil para predecir la capacidad de un caballo de usar aires diferentes en el que dicho al menos un marcador genético se ubica en la región en tres los SNP flanqueantes en las posiciones de nucleótido 22.628.976. correspondiente a la posición 51 de SEO ID NO: 6. y 23.315.071, correspondiente a la posición 51 de SEO ID NO, 7. en el cromosoma 23 de caballo; y

en el que la posición de nucleótido de dicho marcador sé refiere a la secuencia de referencia de caballo según el conjunto preliminar de Sep. 2007 Equus caballus, EqllCab2.

Método para predecir el patrón de locomoción en caballe<s Campo de la invención La presente invención se refiere a meledos para pr?ldecir el patrón de locomoción en caballos incluyendo la capacidad de un Cc, ballo de: usar aires diferentes y la capacidad de trolal o pasear a una velocidad rápida. Los métodos comprenden determinar en ulla nluestra de ADN obtenida de un caballo el alejo de al menos un marcador

lO genético, en el que dicho ill menos un mmc., dor genético se ubica en el cromosoma 23 de caballo, estando dicho marcador asociado con la capacidad de usar aires diferentes.

Antecedentes Los caballos muestran una variación considerable en su patrón de locomoción t<lnto dentro de como entre las razas. Los tres aires bllsicos en caballos son paso, trote y oalope los caballos usan estos aires diferentes segun su yelocidad, el paso se usa a velocidad tenta, el trote es UI' modo 11111s I'fIpido de locomoción y el galope es el aire que los caballos usan normalmente para correr rápido, Su, embargo. algunos caballos tienen la capacldad de usar lambién aires alternativos, por ejemplo paseo y tOIl, y tales caballos se denominan caballos de paso. Un caballo que pasea mueve las dos patas en el mismo lado en un movimiento lateral a dlferenda de un caballo que trola que hace un movimiento diagonal en el que las patils trascr<ls y drelanterClS dlagonClles se mueven hacia delante y hada atrlls juntas Ademas, los caballos islandeses pueden realizar un quinlo aire denominado tOll. que es un aire de cualro rilmos con el mismo patrón de caída de pata que el pasu Un rasgo caracteristico del tolt es quo el cabClUo entonces siempre liene 01 menos un casco toc<, ndo el suelo, dando un aire muy suave. EjemplOs de otros aires alternativos similares, también conocidos como aires amblados, son el fax trot, el rack, el runnlng walk y el paso corto, Los aIres alternativos vallan en el patrón, la sincronizaciÓn y ta cadencia do c.:, ida de pata, y pueden dividirse en general en cualro categodas: paseo, .. mbladura de ritmo regutnr. ambladura laterat y ambladura diagonal. la tabla 1 proporciooa una clasificación de razas como caballos de paso o no de paso. La mayoría de las razas de caballos son de hecho no de paso y sólo se ¡¡stan ejemplos representativos de tales razas en la tabla. Los caballos que representan razas claSificadas como no de paso nunca CI raramente pueden realizar los aires alternativos mienlras la mayoria de o todos los caballos de las razas de paso pueden realizar aires alternativos. Hay mas rélzas de paso por lodo el mundo ademas de I;;¡s lisiadas en la labia t A veces, hay una variación considerable también dentro de tas razas con respecto at patrón de locomoción, Por ejemplo, los caballos islandeses se clasifican como de cuatro pasos o de cinco pasos, en los que los primeros puederl reallzm paso, Irole, galope y tOIt mienlras que los litllmos lambién 35 pueden pasear.

El caballo Slandardbred, usado para carreras de trotc<ncs tiene una capacidad (miC<l de trotar o pasear a una velocidad muy rápida sin ~er en galopo que es el airt! normal a alta velocidad para un caballo. En América del Norte. se ha desarrollado una subpoblaciM de caballos Slandardbred que pasean él velocidad muy alta. Otras razas de caballos usadas para carreras de Irotones incluyen razas como el trotón de sangre fria, caballos finlandeses, el Irolón francés y el trotón Orlov,

El patrón de locomoción en cab{lllos se enCl, Jentra bajo una fuerte selección en la crla de caballos. Por ejemplo, la capacidad de correr usando galope, tfole y paseo se s<elecclona en caballos pllfosrmgre, Irolones Standardbred y

caballos de paso Standardbred, respectiv;;¡mente. Los c;¡¡ballos con la capacidad de usar aires alternativos lambién son altamente deseados por algunos jinetes y es un rasgo sobre el cu<) 1 se han desarrollado muchas razas especializadas. Los métodos para predecir el patrón de locomoción en un caballo, es decIr su capacidad de usar aires diferentes, lendria por tanto una gran utilidad en la industria de la cria de caballos. El documento WQ 20101029527 da a conocer SNP predictivos del rendimlCl110 de carrera de caballos Brova descripción de la invención los presentes Inventores han Identificado un locus genl!tico en caballos que determina la capacidad del caballo de usar aires diferenles y la capacidad de t!'Otar a una velocidad rápida, Se encontró un codón de terminación 55 prematuro en el gen para el factor de tranSCripción 3 relacionado con dOllbleseK y mab-3 (DMRT3) en todos los caballos sometidos él prueba con la capacidad de leali.~ar aireS alternativos. Los caballos l11utanles expresan una protelna DMRT3 Iruncada que carece de tos ultlmos 174 residuos de aminoácido pero mantiene un dominio de unión a ADN funcional DMRT3 se e) (presa en un subconjunto de neuronas en la médula espinat del caballo.

Por consiguiente, liJ presente invenciÓn proporciona mélodos para predecir el patrón de locomoción en caballos inCluyendo la capaCidad de un caballo de usar aites dufercntes, la capaCidad de trotar o pasear a una velOCidad rapida y la capacidad de realizar el adiestramionto,

Un primet aspecto de la Invención proporciona métcJdos para predecir el patrón de locomociÓn en caballos 65 inCluyendo la capacidad de un caballo de usar aires altEirnatívos, 1;:1 c.1pacldad de trolar a tina velocidad rápida y la cllp~cld::ld de rcal¡z~r el adic&lromicnto qllo comprende () Klraor proteina de Ulla muestra obtenida de un caballo. Los mótodos compranden ademas determinar en dicha mueslra de protelna la presencia o ausencia de una forma truncada de la pl'Olelna DMRT3. La prolelna DMRT3 puede ser una proteína OMRT3 truncada en la posición de aminoaddo 300 correspondiente a la protelna SEO ID NO: 4. l a determinación puede hacerse mediante el uso de un mélodo inmunoqulmico. tal como inmunolransferenciél de tipo Western. usando un anticuorpo anli-OMRTJ.

Un segundo aspecto de la Invención proporciona métodos para predecir el patrón de locomoción en caballos incluyendo la capacidad de un caballo de usar aires aUElrnativos, la capacidad de trolar a una velocidad rapida y la capacidad dé realizar el adiestramiento qua comprende exlrner AON de una muestra oblenida de un caballo. l os métodos comprenden ademas determinar en dicho AON el alelo de al menos un marcador genétJco, en el que dicho al menos un marcador genético se ubica en ta reglón entr'e los SNP nanqueantes en las posiCiones de nucleótido 22.628.976 (corresl) Qndienle a la posición 51 en seo ID NO' 6) Y 23 315.071 (cofrespondiente a la posición 51 en sea ID NO; 7) en el cromosoma 23 de caballo El marcador genético puede seleccionarse de polimorfusmos de un solo nudeótido (SNP) e inserción/deleciones 15 (INDELS) .

Preferiblemente. el marcador genetlco so selecciona de li;lS marcadores genéticos listados en las labIas 4. 5, 7 Y 8.

Preferiblemente. el marcador genético se ubica en la región enlre los SNP flanqueanles en las posiciones de nudcótido 22.919.676 y 23 01 1.289 en el cromosoma 23 de caballo.

Preferiblemente. el marcador genético se sel~ionll do II) s marCóldores genélicos listados en la tabla 8.

Lo més preferiblemente, el marcador genético se ubIca en la pOSIción 22.999.655 en el cromosoma 23 de caballo. 25 correspondiente ó) lo posición 939 on SEQ ID NO; 1

Mas especHic8lllente, los mélodos pueder, colllprendm idenlifícar en dicho AON el nucleólldo en una o rnAs posiCión/posIciones especifica (s) seleccionada (s) de las posiciones 22.919.878; 22.920.361; 22.920.434: 22920.&16: 22.020.717, 22.921.203; 22.922.079; 22.9'22.780, 22.923.569; 22.924120; 22924.142; 22.924.299,

22.924.380: 22.924.407. 22.926.098; 22.926.188; 22.926.872: 22.927.387; 22927607; 22.928.220. 22.928.537: 22.928.587; 22.929.137; 22.93001 1; 22.932024: 22.932.895: 22.933.218. 22.936.034; 22.940.759: 22.942.423:

22.945.643: 22.946.599: 22.948.774: 22.949.055: 22.949.108; 22.949.240; 22949.710; 22.956.846: 22.960.132; 22.960.528; 22.960.710; 22.964.042; 22.965.059; 229167119; 22.967.656; 22.967.915; 22.968.898; 22.973.984;

22.974.589; 22979 124; 22.980.014, 22.982.879, 22984.588. 22.985.746. 22.988.210; 22.986.99 '1; 22.993.092; 35 22994.591. 22999.058; 22.999.655. 23.002.606. 23.003.956; 23.008.772; 23.008.789; 23009.648, 23.010.164. Y

23.011.289. en el cromOSOIlló) 23 de caballo lo más preferiblemente. tos métodos comprenden identificar en dicho AON el nllcleótido en ta posición especifica

22.999.655 en el cromosoma 23 de caballo Mas especlllcamente. los métodos pueden comprender delerminar en dicho ADN la presencia o ausencia de: i) el nucleótido e en una posición de Ilucleótldo conespondienle a la posición 939 en SEO ID NO: 1.

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Método para predecir el patrón de locomoción en un caballo incluyendo la capacidad de usar aires altemativos, trotar o pasear a un;) velocid¡;td raplda , y realizar el adiestramiento, comprendiendo dicho método las etapas de;

i) extraer ADN de una rnuestm obtenida ele un caballo,

ji) deletrninar en dicho ADN la preséllcia o aUSE!nCI8 de al menos un mOlcador genéHco útil para predeCir la capacidad de un caballo de usar aires dlferenl?iS, en el que diCho al menos un marCc'ldor genétiCO se ubica en la región entre los SNP flanqueanles en las, posiciones de nudeótido 22.628.976. correspondiente a la posición 51 de SEQ ID NO! 6, Y 23.315.071, correspondiente a la posición 51 de SEa ID NO-7, en el cromosoma 23 de caballo; y

en el que la posición de nucfeótido de dicho marcador se refiere a la ~ecuencia de referencIa de célballo según el conjunto preliminnr do Sep. 2007 Eq/¡uS r.ah;Jl/lIs , EquCab2.

Mélodo según la reivindicación 1. en el que dicho al menos un marcador genético se ubica en la región entre los SNP IltlOquo;) nles en las posiciones d, ~ nucleótido de pares de bases 22.9'19.878 y 23.011 .289 en el cromosoma 23 de caballo.

Método segLIIl la reivindicación 1. en el que el marcador genético se selecciona de los marcadores genéticos listados en la labia 5. labia 7 y labia 8.

Método según la reiVindicación 2. er\ el que el man'.:ado ( genético se selecciOna de los marcadores genéticos listados en la labio 8.

Método segun la reivindicación 2. que comprende identificar en dicho AON el nucleótido en una o mas pOSiciones especificas seleccionadas de las posiCiones 22919.878: 22.920361; 22.920.434: 22920.646: 22.920.717; 22.92 '1 203: 22922.079; 22922.780: 22.923.569; 22.924. '120, 22.924.142. 22.924.299: 22.924.380; 22.924, 407: 22.926.098: 22.926.188: 22.926.872; 22.927.387, 22.927.607; 22.928.220: 22, 928.537: 22.928.587: 22.92D.137: 22.930, 011; 22.932024; 22.932895; 22.933.218; 22.936 034: 22.940.759; 22.942.423: 22.945.643: 22.946.599: 22.948.774: 22.949.055: 22.949.108: 22.949.240:

22.949.710: 22.956.846: 22.960.132: 22.960.528; 22.960.710; 22.964.042; 22.965.059; 22.967119;

22.967.656: 22.967915: 22.9G8.898: 22.973.984: 22.974.589: 22979.124; 22.980.014; 22.982.879: 22, 984.588; 22.985.746: 22.988.210, 22.988.991, 22.993.092: 22.994.591: 22.999.058: 22.999.655;

23.002.600: 23.003.956: 23.008.772, 23.008.789; 23.009.648; 23.010.164; Y 23.011.289. en el cromosoma 23 de caballo. Método segun la reivindicación 1. que comprencle determinar en dicho ADN la presencia o ausencia de' i) el nudeótido e en una posición de nucleótido corre$pondlente a la posición 939 en SEO 10 NO: 1, ii) el nucleólldo A en una posICión de nucte6l1do correspondiente a la posicIón 939 en SEO 10 NO: 3, iii) el nucleótido e y/o T en una posición de nucleótido correspondiente a la posición 51 en SEO ID NO. 5. Iv) el mlcleó!ido A y/o G en una posición de nucleótido correspondiente a la posición 51 en seo 10 NO. 6. v) el nucleólido e '110 T en una pOSición de nucl?'ótido correspondiente a la posición 51 en seo ID NO: 7. vi) el nucleótido G '1'0 e en una posición de nucleótido correspondiente a la posición 51 en SEa ID NO: 8, vii) el nucleólido A y/o G en una posición de nucleótido correspo, ldiente a la pOSición 51 erl SEO ID NO; 9, viii) el nucleólido T y/o G en una posicIón de nudeótido correspondiente a la posición 51 en SEa 10 NO: 10, ix) el nucleótido T ylo e en una posición de nuch~ólido correspondienle a la posición 51 en SEa ID NO: 11, x) el nucleót1do e ylo T en una posición de nllclc~ótldo correspondiente a la posición 51 en SEO ID NO: 12, xi) el nuclcótido A y/o G en una posición de nucl e6lído correspondiente a la posición 51 en seo ID NO: 13,

xii) el nuc1eólido A ylo e en una posición de nucleólido correspondionte a la posición 51 en sea ID NO: 14 xlii) el 1l (lcleótido G ylo e en una posición de Iluclcótido correspondiente a 1<1 posiCión 51 en sea ID NO'

15,

XIV) el nuc!eólido eylo T en una posición de nucleólldo correspondiente a la posición 51 en SEO ID NO: 16,

5 ¡ (v) el nucleótido G ylo A en una posición de nucleótido correspondiente a la posición 51 en SEa ID NO' 17,

Kvi) el nucleótido G ylo e en una posición de nucleó!ido correspondiente a la posición 51 en SEa 10 NO:

l a,

xvii) el nucleótido e ylo A en una posición de nucleótido cor (espondicnto a la posición 51 en SEa ID NO;

19,

) (viii) el nucle6lido T ylo e en una posición de nucle6lido correspondiente a la posición 51 en SEa ID NO:

20,

15

xix) el rlucle6lido e ylo T en una posición de nucleótido correspondiente a la posición 51 en SEO ID NO -21,

xx) el nucleótido e ylo T en una posición de nucleótido correspondiente a la posición 51 en SEO ID NO: 22,

XXI) el nucleólido e ylo A en una posición de nuclcólido correspondiente a la posición 51 en SEO ID NO: 23,

xxii) el nucleólido e y/o G en una posición de nude61ldo correspondiente a la posicIón 51 en SEO ID NO.

24, y/o

25 xxiii) el nucleóUdo A , /10 T en UI13 posición de nucleótido correspondiente a la posición 5 1 en SEO ID NO:

25.

7 Método según la reivindicación 4, quo comprende determinar en dicho AON le presencia o ausencia de:

i) el nllcle6lido een una posición de nucle61ido correspondiente a la posición 939 en SEO ID NO' 1, ylo

li) el nucleótido A en una posición de nucleólido correspondiente a la posición 939 en SEa 10 NO' 3.

6, Método para predecir el Péltrón do locomoción en un Cilballo incluyondo la capacidad de usar ¡¡ires

35 allernativos, trotar o pasear a una velocidad rápida, y rCillizar el adiestramiento. comprendiendo dicho

métode las etapas de:

i) extraer proteína de una muestra obtenida de un caballo, y

ii) delerminar en dicha muestra de protelna la presencia o ausencia de una forma truncada de 1 (1 protelna

DMIH3,

9. Uso del metodo seglm cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para la prueba de palernidad.

45 lO. Uso del método según cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para la selección de un caballo para crJa

11 , Método para la Selección do un caballo para crla. comprendiendo dicho metodo delermirlaf en una muestra

de ADN obtenida de dicho caballo el alelo de al menos un marcador genético útil para predecir ta capacidad

de un caballo de usar aires diferentes, en el que dicho al menos un marcador genético se ubica en I¡¡ reglón

entre los SNP flanqueantes en las poSiciones de nuc!e6lido 22, 628, 976 y 23.315.071 correspondientes a la

posición 51 de SEO ID NO: 6 y SEO ID NO: 7, rcspectiVarllenle, en el cromosoma 23 de caballo. en el que

la pOSición de nucleot¡do de dicho marcador se refiere <1 la secuencia de referencia de caballo según el

conjunto preliminar de Sep. 2007 Eqllus cabal/liS, EquCab2.