Método para predecir o pronosticar la respuesta de un sujeto humano que padece un cáncer al tratamiento con un antagonista del receptor NK1.

Método para predecir o pronosticar la respuesta de un sujeto humano que padece un cáncer al tratamiento con un antagonista del receptor NK1,

que permite agrupar a los sujetos en respondedores y no respondedores, así como al kit o dispositivo que comprende los elementos necesarios para llevar a cabo dicho método, y su uso. Este método predictivo permite optimizar el tratamiento con estos antagonistas, por ejemplo, en lo referente a dosis de uso de los mismos o asociación con otros agentes antitumorales.

Método para predecir o pronosticar la respuesta de un sujeto humano que padece un cáncer al tratamiento con un antagonista del receptor NK1.

SECTOR DE LA TÉCNICA.

La presente invención se encuentra dentro del campo de la medicina, la farmacia y la biología molecular, y más concretamente en el campo de la oncología. Específicamente, está relacionada con un método para predecir o pronosticar la respuesta de un sujeto humano que padece un cáncer al tratamiento con un antagonista del receptor NK1, que permite agrupar a los sujetos en respondedores y no respondedores, asi como al kit o dispositivo que comprende los elementos necesarios para llevar a cabo dicho método, y su uso.

ESTADO DE LA TÉCNICA.

Los receptores NK1 (receptores de la Neurokinina 1 o neuropeptídicos de la Sustancia P y de las taquicininas), están ampliamente distribuidos en las células del organismo. Actualmente se conocen numerosos procesos biológicos en cuya regulación están involucrados los receptores NK1. Los receptores NK1 son receptores del tipo de los receptores acoplados a la proteína G.

Como otros receptores, los receptores NK1 tienen sus propios agonistas naturales. El más selectivo de éstos es la Sustancia P. La Sustancia P (SP) es un undecapéptido de origen natural, que pertenece a la familia de las taquicininas, es producido en los mamíferos y su secuencia fue descrita por Veber et al., (US 4,680,283). La familia de las taquicininas también incluye otros péptidos como Neurokinina A, Neurokinina B, Neuropéptido K, Neuropéptido Gamma y Hemokinina I, entre otros. La implicación de la SP y de otras taquicininas en la etiopatogenia de diversas enfermedades ha sido ampliamente referida en la bibliografía científica. En este sentido, la acción de las taquicininas se ha relacionado con la etiopatogenia de enfermedades del sistema nervioso humano como la Enfermedad de Alzheimer, la Esclerosis Múltiple, la Enfermedad de Parkinson, la ansiedad y la depresión (Barker R. et al., 1996; Kramer MS, et al., 1998). También se ha constatado la implicación de las taquicininas en la etiopatogenia de diversas enfermedades con componente inflamatorio como la artritis reumatoide, el asma, la rinitis alérgica, las enfermedades inflamatorias intestinales como la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn (Maggi CA, et al., 1993).

En este sentido, la industria farmacéutica ha desarrollado antagonistas no peptídicos de los receptores NK1 como medicamentos para el tratamiento de diversos desórdenes del sistema nervioso central

como la depresión, la psicosis y la ansiedad (WO 95/16679, WO 95/18124, WO 95/23798 y WO 01/77100). Se ha descrito que el uso de antagonistas selectivos del receptor NK1 es útil en el tratamiento de las náuseas y el vómito inducido por quimioterápicos antineoplásicos, así como en el tratamiento de ciertas formas de incontinencia urinaria (Quartara L. et al., 1998; Doi T. et al., 1999).

En un trabajo publicado en 2003 (Giardina G, et al., 2003) y en otro publicado en 2010 (Huang SC, et al., 2010) se hace una revisión de las patentes más recientes sobre antagonistas de receptores NK1. Se describen las moléculas de los más importantes fabricantes mundiales con indicación de sus posibles aplicaciones entre las que cabe destacar: antidepresivo, antinflamatorio, ansiolítico, antiemético, tratamiento de la colitis ulcerosa y otros.

Se ha publicado que el uso de diversos antagonistas de la SP para inhibir la proliferación de carcinoma de células pulmonares (Orosz A, et al., 1995; Bunn PA Jr. et al., 1994).

Es conocido que los astrocitos del sistema nervioso central expresan receptores funcionales para varios neurotransmisores incluidos los receptores NKl(Palma C. et al., 2000). En los tumores cerebrales, las células gliales malignas derivadas de astrocitos desencadenan bajo la acción de las taquicininas y por mediación de los receptores NK1, la secreción de mediadores que aumentan su velocidad de proliferación. Consecuentemente, los antagonistas selectivos del NK1 pueden ser muy útiles como agentes terapéuticos para el tratamiento de gliomas malignos.

En la patente EP 773026 (Pfizer) se hace referencia a la utilización de antagonistas no peptídicos del receptor NK1 para el tratamiento de cánceres en mamíferos. Particularmente en el tratamiento de pequeños carcinomas pulmonares, APUDOMAS (tumores de células enterocromafines que se localizan de modo predominante en la mucosa del tubo digestivo. Sus siglas significan "Amine Precursos Uptake and Decarboxylation", utilización y decarboxilación de los precursores de aminas).

Por otro lado, en la patente WO 2001001922 se describe el uso de antagonistas de receptores NK1 para el tratamiento de adenocarcinomas y muy específicamente los carcinomas prostáticos.

Diversos estudios con antagonistas específicos de los receptores de la neurokinina como el CP-96341- 1 (Pfizer), MEN 11467, SR 48968 (Sanofi) y MEN 11420 (Nepadutant) han demostrado la eficacia de los mismos en el bloqueo de la proliferación celular (Singh D et al., 2000; y Bigioni M. et al., 2005).

Se ha descrito que los antagonistas no peptídicos de receptores NK1 inducen apoptosis (muerte celular) en las células cancerosas de diversos tumores como el carcinoma de estómago, el carcinoma de colon (Rosso M, et al., 2008) , el melanoma (Muñoz M, et al., 2010) o el carcinoma de pulmón (Muñoz M, 2012).

La patente ES 2246687 reivindica la utilización de los antagonistas no peptídicos de receptores NK1 y de la SP en la elaboración de una composición farmacéutica para la producción de apoptosis en células tumorales cancerosas de mamíferos. La solicitud de patente española P201101311 (PCT/ES2012/070865) reivindica el uso de agentes modificadores del microambiente peritumoral, en concreto los antagonistas de los receptores NK1, para el tratamiento del cáncer. Por otro lado, la solicitud de patente W02012020162 describe el uso de anticuerpos o fragmentos de los mismos, frente a los receptores NK1, NK2 y/o NK3, útiles en el tratamiento del cáncer, mediante la producción de apoptosis de las células tumorales.

Actualmente son de uso común en la práctica clínica diversos fármacos dirigidos para antagonizar los efectos de ciertos receptores de membrana con objeto de tratar el cáncer. Los ejemplos más representativos son el uso de anticuerpos monoclonales contra el receptor Her2 para el tratamiento del cáncer de mama y estómago, el uso de fármacos inhibidores de la Tirosín Kinasa para el tratamiento del cáncer del Pulmón y el uso de anticuerpos monoclonales dirigidos contra el receptor EGFR (Receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico) para el tratamiento del cáncer de colon, entre otros. En todos estos casos se conoce la existencia de marcadores biológicos predictivos de la respuesta a dichos tratamientos. Por ejemplo, en el caso del cáncer de mama, es conocido que, en humanos, el anticuerpo monoclonal dirigido contra el receptor Her-2 sólo es efectivo si existe una sobrexpresión de dicho receptor observada mediante la realización de un estudio inmunohistoquímico o una amplificación del gen observada mediante mareaje de dicho gen con sondas específicas que se pueden visualizar, por métodos de hibridación in situ En el caso del tratamiento del cáncer de pulmón con fármacos inhibidores de la Tirosín Kinasa, se sabe que estos fármacos sólo son efectivos si existe una mutación del gen que codifica el receptor EGFR, que condicionan una alteración en la estructura del mismo, que condiciona, a su vez que dicho receptor se encuentre constitucionalmente y permanentemente activado, mientras que si no existe dicha mutación en este gen, los mencionados fármacos no son efectivos en el tratamiento del cáncer de pulmón. En el caso del cáncer de colon, se sabe que el tratamiento con anticuerpos monoclonales dirigidos contra el receptor EGFR es efectivo sólo si no existe mutación a nivel del gen K-ras, mientras que si existe mutación a nivel de este gen, que condiciona un cambio a nivel de la proteína codificada por este gen de forma que ésta se encuentra

constitucionalmente activada, dichos anticuerpos no son efectivos en el tratamiento de estos tumores cancerosos de colon.

Se ha descrito en la literatura científica que algunas células tumorales pueden tener una forma truncada de receptor NK1 (Gillespie E, et al. 2011).

Por lo tanto y en conclusión, en la actualidad son conocidos en el estado del arte, los siguientes hechos:

1. Que los receptores NK1 están ampliamente difundidos en el organismo del ser humano.

2. Que las taquicininas y en concreto la SP actúan sobre los receptores NK1.

3. Que la utilización de antagonistas no peptídicos del receptor NK1 ha demostrado efectos sobre... [Seguir leyendo]

1.- Un método in vi tro para predecir o pronosticar la respuesta de un sujeto humano al tratamiento con un antagonista del receptor NK1, en el que el sujeto padece un cáncer, que comprende usar, como un indicador, los niveles de expresión del receptor NK1.

2.- El método in vi tro según la reivindicación 1, en el que se usa como indicador la expresión del receptor NK1, o del ARNm que codifica para el receptor NK1.

3.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, que comprendedetectar los niveles de expresión del receptor NK1 o del ARNm que codifica para el receptor NK1 en una muestra aislada que comprende células tumorales de un sujeto humano que padece un cáncer.

4.- El método in vitro según la reivindicación 3, en el que el resultado es indicativo de una respuesta positiva si los niveles de expresión del receptor NK1, o del ARNm que codifica para el receptor NK1, están sobreexpresados en comparación con una muestra de referencia y/o un control que expresa unos niveles indicativos de falta de respuesta.

- El método in vitro según la reivindicación 4, en el que la sobreexpresión se define como un nivel de expresión del receptor NK1, o del ARNm que codifica para el receptor NK1, aumentado en más del 20% de las células de la muestra biológica aislada.

6.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 4-5, en el que la sobreexpresión se define como un nivel de expresión del receptor NK1, o del ARNm que codifica para el receptor NK1, aumentado en más del:

a) 30%

b) 40%

c) 50%

d) 60%

e) 70%, o del

f) 80%

de las células de la muestra biológica aislada.

7.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 3-6, en el que además se determina la presencia o no de mutaciones en el gen K-ras en las células tumorales de la muestra aislada, siendo el

resultado indicativo de una respuesta positiva si las células cancerosas no presentan mutación en el gen K-ras.

8 - El método in vi tro según cualquiera de las reivindicaciones 3-7, en el que además se determina la presencia o no de la proteína ERK en las células tumorales de la muestra aislada, siendo el resultado indicativo de una respuesta positiva si las células cancerosas presentan la proteína ERK o el ARNm que la codifica.

9 - El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 3-8, en el que además se determina la presencia o no de la proteína MEK en las células tumorales de la muestra aislada, siendo el resultado indicativo de una respuesta positiva si las células cancerosas presentan la proteína MEK o el ARNm que la codifica.

- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 3-9, en el que además se determina la presencia o no de la proteína AKT en las células tumorales de la muestra aislada, siendo el resultado indicativo de una respuesta positiva si las células cancerosas presentan la proteína AKT o el ARNm que la codifica.

11.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 3-10, en el que además se determina la presencia o no de la forma truncada del receptor NK1 en las células tumorales de la muestra aislada, siendo el resultado indicativo de una respuesta positiva si las células cancerosas presentan la forma truncada del receptor NK1.

12.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 3-11, en el que además se determina si las células tumorales de la muestra aislada presentan una forma constitutivamemente activada del receptor NK1, siendo el resultado indicativo de una respuesta positiva si las células cancerosas presentan una forma constitutivamemente activada del receptor NK1.

13.- El método in vitro según la reivindicación anterior, donde la determinación de si las células tumorales de la muestra aisladapresentan una forma constitutivamemente activada del receptor NK1 o no, se realiza exponiendo las células a la sustancia P, considerando que las células presentan una forma constitutivamemente activada del receptor NK1 si presentan escasa respuesta proliferativa ante la exposición a la sustancia P.

14. El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la detección

a. de los niveles de expresión del receptor NK1, o del ARNm que codifica para el receptor

NK1, o

b. de la presencia o no de mutaciones en el gen K-ras,

c. de la presencia de la proteína ERK, o del ARNm que la codifica,

d. de la presencia de la proteína MEK, o del ARNm que la codifica,

e. de la presencia de la proteína AKT, o del ARNm que la codifica, o

f. de la presencia o no de la forma truncada del receptor NK1, se realiza por

i. un procedimiento de perfil genético, tal como una micromatriz, y/o

ii. un procedimiento que comprende PCR, tal como una PCR en tiempo real; y/o

iii. transferencia Northern, y/o

iv. un procedimiento inmunohistoquímico.

15.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 3-14, en el que la muestra biológica aislada es un tejido reciente, tejido embebido en parafina o ARN extraído de un tejido de un paciente con cáncer.

16.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 3-15, que se lleva a cabo in vitro usando una muestra aislada originaria del sujeto humano, y en el que en el momento de tomar la muestra del sujeto humano, el sujeto humano no ha sido tratado con un antagonista del receptor NK1.

17 - El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la detección de los niveles de expresión de los genes se realiza mediante Q-RT-PCR.

18 - El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la detección de los niveles de proteínas NK1, ERK, MEK, AKT y/o el receptor truncado de NK1, se realiza mediante técnicas inmmunológicas.

19.- El método según la reivindicación 18, donde las técnicas inmunológicas están basadas en reacciones de precipitación, basadas en reacciones de aglutinación, inmunomarcación, radioinmunoanálisis y técnicas radioinmunométricas, ELISA (Enzime Linked ImmunoadSorbent Assay), o en cualquiera de sus combinaciones.

20.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 18-19, donde las técnicas inmunológicas comprenden el inmunomarcaje.

21.- El método in vitro según la reivindicación 20, donde el inmunomarcaje se selecciona de entre inmunomarcaje con anticuerpos conjugados a enzimas, inmunomarcaje con anticuerpos conjugados a fluorocromos, o citometría.

22.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 1-21, en el que el cáncer se selecciona de entre los siguientes: carcinoma gástrico, preferentemente adenocarcinoma gástrico; carcinoma de colon, preferentemente adenocarcinoma de colon; carcinoma de páncreas, preferentemente adenocarcinoma de páncreas; carcinoma renal, preferentemente carcinoma renal de células claras; carcinoma de mama, preferentemente adenocarcinoma de mama; carcinoma de ovario, preferentemente adenocarcinoma de ovario; carcinoma de endometrio; carcinoma de cérvix uterino; carcinoma de pulmón, preferentemente carcinoma de pulmón de célula no pequeña y/o carcinoma de pulmón de células pequeñas; carcinoma de tiroides, preferentemente carcinoma de tiroides papilar y/o carcinoma folicular de tiroides; carcinoma de vejiga, preferentemente carinoma transicional de vejiga de la orina; carcinoma de próstata; cáncer de estirpe glial del sistema nervioso central (glioma); sarcomas, preferentemente fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno y sarcoma de Edwing; melanoma; cánceres embrionarios, preferentemente neuroblastoma; y cánceres hematológicos, preferentemente leucemias de estirpe B o de estirpe T, linfomas no Hodgkin, preferentemente de estirpe B o de estirpe T, linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin y mieloma múltiple.

23.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 1-22, donde los antagonistas del receptor NK1 son antagonistas no peptídicos.

24.- El método in vitro según la reivindicación 23, donde los antagonistas no peptídicos se seleccionan de entre: Aprepitant, Vestipitant, Casopitant, Vofopitant, Ezlopitant, Lanepitant, LY-686017, L- 733,060, L-732,138, L-703,606, WIN 62,577, CP-122721, , TAK-637, y R673, CP-100263, WIN 51708, CP-96345, L-760735, , CP-122721, L-758298, L-741671, L-742694, CP-99994, T-2328, o cualquiera de sus combinaciones.

25.- El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 1-22, donde los antagonistas del receptor NK1 son antagonistas peptídicos.

26.- El método in vi tro según la reivindicación 25, donde los antagonistas peptídicos se seleccionan de entre anticuerpos o fragmentos de los mismos, dirigidos contra el receptor NK1.

27.- Un método in vi tro para clasificar un sujeto humano que padece de cáncer en uno de dos grupos, en el que el grupo 1 comprende los sujetos identificables mediante el método según cualquiera de las reivindicaciones 1-26, y en el que el grupo 2 representa el resto de sujetos.

28 - El uso de una composición farmacéutica que comprende un antagonista del receptor NKlen la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un sujeto humano del grupo 1 identificable mediante el método in vitro de la reivindicación 27.

29 - El uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 28, donde los antagonistas del receptor NK1 son antagonistas no peptídicos.

- El uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 29, donde los antagonistas no peptídicos se seleccionan de entre: Aprepitant, Vestipitant, Casopitant, Vofopitant, Ezlopitant, Lanepitant, LY-686017, L-733,060, L-732,138, L-703,606, WIN 62,577, CP-122721, , TAK-637, y R673, CP-100263, WIN 51708, CP-96345, L-760735, , CP-122721, L-758298, L-741671, L-742694, CP-99994, T-2328, o cualquiera de sus combinaciones.

31.- El uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 28, donde los antagonistas del receptor NK1 son antagonistas peptídicos.

32.- El uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 31, donde los antagonistas peptídicos se seleccionan de entre anticuerpos o fragmentos de los mismos dirigidos contra el receptor NK1.

33.- Un kit o dispositivo que comprende los elementos necesarios para analizar:

a) el nivel de expresión del receptor NK1,

b) la presencia de mutación en el gen K-ras,

c) el nivel de expresión de la proteína ERK,

d) el nivel de expresión de la proteína AKT,

e) la presencia o no de la forma truncada del receptor NK1,

f) la presencia del receptor NK1 constitutivamente activado

en las células cancerosas de la muestra biológica según se definen en el método de cualquiera de las reivindicaciones 3-27.

34.- El kit o dispositivo según la reivindicación anterior, que comprende al menos un anticuerpo que 5 se selecciona de entre:

a) un anticierpo anti-NKl,

b) un anticuerpo anti-ERK,

c) un anticuerpo anti-MEK y/o

d) un anticuerpo anti- AKT.

35.- El kit o dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 33-34, donde el anticuerpo es monoclonal.

36.- El kit o dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 33-35, donde el anticuerpo se 15 encuentra marcado con un flúor ocromo.

37 - El kit o dispositivo según la reivindicación anterior, donde el fluorocromo se selecciona de la lista que comprende: Fluoresceína (FITC), Tetrametilrodamina y derivados, Ficoeritrina (PE), PerCP, Cy5, Texas, aloficocianina, o cualquiera de sus combinaciones.

38.- El uso del kit o dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 33-37, para predecir o pronosticar la respuesta de un sujeto humano a un antagonista del receptor NK1, en el que el sujeto padece un cáncer.

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> Servicio Andaluz de Salud (SAS)

<120> Método para predecir o pronosticar la respuesta de un sujeto humano que padece un cáncer al tratamiento con un antagonista del receptor NK1

<130> P-06160

<160> 20

<170> BiSSAP 1.2

<210> 1

<211> 321

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> NK1

<400> 1

Val Val Asn Phe Thr Tyr Ala Val His Asn Glu Trp Tyr Tyr Gly Leu 15 10 15

Phe Tyr Cys Lys Phe His Asn Phe Phe Pro lie Ala Ala Val Phe Ala 20 25 30

Ser lie Tyr Ser Met Thr Ala Val Ala Phe Asp Arg Tyr Met Ala lie 35 40 45

<210> 2 <211> 1732 <212> DNA <213> Homo sapiens

<220>

<221> source <222> 1..1732

<223> /organism="Homo sapiens"

/note="NK1"

/mol_type="unassigned DNA"

<400> 2

agctgagcaa cccgaaccga gaggtgcccg cgaaactgca ggcggcggca gcggcagcaa 60

aagagaagga aaaatctcca gctggatacg aagctccaga atcctggcca taggctcaga 120

acttttacag gtcgcgctgc aatgggcccc cacttcgctc ctaagtcctc acgcagcaca 180

gggctttgcc tttccctgcg gaggaaggag aaataggagt tgcaggcagc agcaggtgca 240

taaatgcggg ggatctcttg cttcctagaa ctgtgaccgg tggaatttct ttcccttttt 300

cagtttaccg caagagagat gctgtctcca gacttctgaa ctcaaacgtc tcctgaagct 360

tgaaagtgga ggaattcaga gccaccgcgg gcaggcgggc agtgcatcca gaagcgttta 420

tattctgagc gccagttcag ctttcaaaaa gagtgctgcc cagaaaaagc cttccaccct 480

cctgtctggc tttagaagga ccctgagccc caggcgccag ccacaggact ctgctgcaga 540

ggggggttgt gtacagatag tagggcttta ccgcctagct tcgaaatgga taacgtcctc 600

ccggtggact cagacctctc cccaaacatc tccactaaca cctcggaacc caatcagttc 660

gtgcaaccag cctggcaaat tgtcctttgg gcagctgcct acacggtcat tgtggtgacc 720

tctgtggtgg gcaacgtggt agtgatgtgg atcatcttag cccacaaaag aatgaggaca 780

gtgacgaact attttctggt gaacctggcc ttcgcggagg cctccatggc tgcattcaat 840

acagtggtga acttcaccta tgctgtccac aacgaatggt actacggcct gttctactgc 900

aagttccaca acttctttcc catcgccgct gtcttcgcca gtatctactc catgacggct 960

gtggcctttg ataggtacat ggccatcata catcccctcc agccccggct gtcagccaca 1020

gccaccaaag tggtcatctg tgtcatctgg gtcctggctc tcctgctggc cttcccccag 1080

ggctactact caaccacaga gaccatgccc agcagagtcg tgtgcatgat cgaatggcca 1140

gagcatccga acaagattta tgagaaagtg taccacatct gtgtgactgt gctgatctac 1200

ttcctccccc tgctggtgat tggctatgca tacaccgtag tgggaatcac actatgggcc 1260

agtgagatcc ccggggactc ctctgaccgc taccacgagc aagtctctgc caagcgcaag 1320

gtggtcaaaa tgatgattgt cgtggtgtgc accttcgcca tctgctggct gcccttccac 1380

atcttcttcc tcctgcccta catcaaccca gatctctacc tgaagaagtt tatccagcag 1440

gtctacctgg ccatcatgtg gctggccatg agctccacca tgtacaaccc catcatctac 1500

tgctgcctca atgacaggtg aggatcccaa ccccatgagc tctccagggg ccacaagacc 1560

atctacatac acagtggcca agcggccatc ctaaatgagt aaacccagct gtgagacaag 1620

agggacaagt ggggactgca gctaacttat catcacacaa ctcagcctgg ctgattatca 1680

ccatccagga atgggagccc ggagtggact gattttcttt ttttcttttc ca 1732

<210> 3

<211> 366

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> ERK1

260 265 270

Ser Lys Thr Lys Val Ala Trp Ala Lys Leu Phe Pro Lys Ser Asp Ser 275 280 285

Lys Ala Leu Asp Leu Leu Asp Arg Met Leu Thr Phe Asn Pro Asn Lys 290 295 300

Arg Ile Thr Val Glu Glu Ala Leu Ala His Pro Tyr Leu Glu Gln Tyr

305 310 315 320

Tyr Asp Pro Thr Asp Glu Pro Val Ala Glu Glu Pro Phe Thr Phe Ala

325 330 335

Met Glu Leu Asp Asp Leu Pro Lys Glu Arg Leu Lys Glu Leu Ile Phe 340 345 350

Gln Glu Thr Ala Arg Phe Gln Pro Gly Val Leu Glu Ala Pro 355 360 365

<210> 4 <211> 1745 <212> DNA <213> Homo sapiens

<220>

<221> source <222> 1..1745

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<400> 4

ccccgtagaa ccgagggggt gggcccgggg gtcccggggg aggtggagat ggtgaagggg 60

cagccgttcg acgtgggccc gcgctacacg cagttgcagt acatcggcga gggcgcgtac 120

ggcatggtca gctcggccta tgaccacgtg cgcaagactc gcgtggccat caagaagatc 180

agccccttcg aacatcagac ctactgccag cgcacgctcc gggagatcca gatcctgctg 240

cgcttccgcc atgagaatgt catcggcatc cgagacattc tgcgggcgtc caccctggaa 300

gccatgagag atgtctacat tgtgcaggac ctgatggaga ctgacctgta caagttgctg 360

aaaagccagc agctgagcaa tgaccatatc tgctacttcc tctaccagat cctgcggggc 420

ctcaagtaca tccactccgc caacgtgctc caccgagatc taaagccctc caacctgctc 480

atcaacacca cctgcgacct taagatttgt gatttcggcc tggcccggat tgccgatcct 540

gagcatgacc acaccggctt cctgacggag tatgtggcta cgcgctggta ccgggcccca 600

gagatcatgc tgaactccaa gggctatacc aagtccatcg acatctggtc tgtgggctgc 660

attctggctg agatgctctc taaccggccc atcttccctg gcaagcacta cctggatcag 720

ctcaaccaca ttctgggcat cctgggctcc ccatcccagg aggacctgaa ttgtatcatc 780

aacatgaagg cccgaaacta cctacagtct ctgccctcca agaccaaggt ggcttgggcc 840

aagcttttcc ccaagtcaga ctccaaagcc cttgacctgc tggaccggat gttaaccttt 900

aaccccaata aacggatcac agtggaggaa gcgctggctc acccctacct ggagcagtac 960

tatgacccga cggatgagcc agtggccgag gagcccttca ccttcgccat ggagctggat 1020

gacctaccta aggagcggct gaaggagctc atcttccagg agacagcacg cttccagccc 1080

ggagtgctgg aggcccccta gcccagacag acatctctgc accctggggc ctggacctgc 1140

ctcctgcctg cccctctccc gccagactgt tagaaaatgg acactgtgcc cagcccggac 1200

cttggcagcc caggccgggg tggagcatgg gcctggccac ctctctcctt tgctgaggcc 1260

tccagcttca ggcaggccaa ggcttctcct ccccacccgc cctccccacg ggcctcggga 1320

cctcaggtgg gcccagttca atctcccgct gctgctgctg cgcccttacc ttccccagcg 1380

tcccagtctc tggcagtttt ggaatggaag ggttctggct gccccaacct gctgaagggc 1440

agaggtggag ggtggggggc gctgagtagg gactcacggc catgcctgcc cccctcatct 1500

cattcaaacc ccaccctagt ttccctgaag gaacattcct tagtctcaag ggctagcatc 1560

cctgaggagc caggccgggc cgaatcccct ccctgtcaaa gctgtcactt cgcgtgccct 1620

cgctgcttct gtgtgtggtg agcagaagtg gagctggggg gcgtggagag cccggctgcc 1680

cctgccacct ccctgacccg tctaatatat aaatatagag atgtgtctat ggctgaaaaa 1740

aaaaa

1745

<210> 5

<211> 360

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> ERK2

<220>

<221> source <222> 1..1611

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aa

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