MÉTODO DE OBTENCIÓN DE DATOS ÚTILES PARA EL DIAGNÓSTICO Y PRONÓSTICO DE LA HIPOACUSIA NEUROSENSORIAL.

Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico y pronóstico de la hipoacusia neurosensorial.

Método de obtención de datos útiles para la determinación del riesgo de un individuo a padecer hipoacusia neurosensorial severa, preferiblemente en la enfermedad de Meniére, cebadores útiles en la determinación y kit que los comprende.

Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico y pronóstico de

la hipoacusia neurosensorial.

La presente invención se encuentra dentro del campo de la biomedicina y la biotecnología, y se refiere a un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, el pronóstico y la clasificación de pacientes que sufren hipoacusia neurosensorial, y especialmente de aquellos que presentan enfermedad de Meniére.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

La enfermedad de Meniere (EM) es un trastorno crónico que afecta el oído interno caracterizado por episodios recurrentes de vértigo espontáneo, presión auditiva, acúfeno y pérdida de la audición. Dado que se observa un incremento en el número de autoanticuerpos y una mejoría clínica con la terapia con esteroides se observa en algunos pacientes, se ha propuesto una etiología autoinmune para esta enfermedad. La elevación en suero de complejos inmunes circulantes (CIC) que se encuentran en pacientes con EM sugiere que pueden estar involucrados en la fisiopatología de la enfermedad, ya sea como una causa directa del daño, o como producto de una anomalía autoinmune.

Las moléculas de clase I y moléculas de clase II del Complejo Mayor de Histocompatibidad Humano se han descrito como marcadores genéticos de muchas enfermedades autoinmunes. A su vez, la EM ha sido asociada con el HLA-B * 27, HLA-B * 44, HLA-B * 13, HLA-Cw * 07, HLA-DBR1 * 1602 y HLA-DRB1 * 1101 en diferentes poblaciones. El complejo principal de histocompatibilidad de clase I relacionado con el gen A (MICA) , codifica una molécula MICA estrés inducible con tres dominios extracelulares, es decir, α1 (codificado por el exón 2) , α2 (codificado por el exón 3) y α3 (codificado por el exón 4) , un segmento transmembrana (TM) (codificado por el exón 5) y una cola citoplasmática carboxi-terminal (codificado por el exón 6) .

El gen MICA muestra un notable grado de variación de nucleótidos en los exones 2, 3 y 4, y alberga un polimorfismo de repetición corta del tándem (GCT) n (cuatro, cinco, seis o nueve, abreviado como MICA-STR) en el exón 5. Además, el alelo MICA * A5.1 presenta la inserción de un nucleótido (G) entre las repeticiones de triplete segunda y la tercera, lo que resulta en un codón de parada prematuro.

Los genes MIC se expresan principalmente en el epitelio gastrointestinal, células endoteliales y fibroblastos. Sin embargo, las transcripciones de MIC se han observado en todos los órganos principales, excepto el cerebro. MICA actúa como un ligando para las células natural killer (NK) , células T γδ y αβ, células T CD8 +, que expresan un receptor de la activación de las células NK común NKG2D. La interacción MICA-NKG2D parece aumentar la producción de citoquinas inflamatorias y la proliferación de un determinado subconjunto de células T.

Varias investigaciones han sugerido una asociación entre el gen MICA y las enfermedades autoinmunes. Por otra parte, el producto del gen MICA podría desempeñar un papel importante en el proceso autoinmune y los polimorfismos del gen MICA puede modular las vías inmunes que son complementarios y sinérgicos de los modulados por los clásicos genes HLA de clase II. Se ha propuesto una gran variedad de tratamientos, tanto médicos como quirúrgicos, para la hipoacusia, y en concreto para la enfermedad de Ménière. Todos ellos con distintos resultados respecto a la remisión de los síntomas y efectos secundarios.

Dentro de los tratamientos médicos se encuentran la dieta hiposódica, antihistamínicos, diuréticos, histamina subcutánea, drogas antivertiginosas, benzodiazepinas y la terapia transtimpánica, que ha ganado alguna popularidad en el último tiempo, especialmente en aquel grupo de pacientes que no presentan respuesta a las terapias habituales En algunos centros se practica hace algún tiempo la inyección intratimpánica de medicamentos ototóxicos, como la gentamicina, en la cavidad del oído medio. El objetivo de este procedimiento sería el de producir una laberintectomía médica, lo que causaría la disminución o la desaparición de los síntomas. El riesgo de este procedimiento es el deterioro de la capacidad auditiva del paciente, descrito especialmente en aquellos pacientes sometidos a regímenes de tratamiento en plazos cortos de tiempo. Los agentes más utilizados han sido, inicialmente, estreptomicina y, actualmente, la gentamicina.

En casos muy graves se ha recurrido a la cirugía, pero este recurso empeora la calidad de vida del enfermo porque elimina no sólo los síntomas, sino también el sentido del equilibrio.

Por tanto, los tratamientos actualmente disponibles para la hipoacusia, pueden ser excesivamente agresivos, como por ejemplo la cirugía o la aplicación de gentamicina intratimpánica y pueden poner el riesgo la audición del paciente. Por tanto, sería importante, disponer de de algún marcador que permitiera evaluar la idoneidad del tratamiento.

Sin embargo, hasta el momento no se dispone de un método o marcador biológico que nos permita un diagnóstico precoz o establecer un pronóstico sobre la pérdida de audición a largo plazo, que sea de utilidad para realizar una clasificación de los pacientes, y facilite la toma de decisiones sobre el tratamiento y el seguimiento de la evolución de la enfermedad.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico precoz y el pronóstico de la pérdida auditiva, así como para evaluar la respuesta al tratamiento de dicha enfermedad, permitiendo el seguimiento y el establecimiento de grupos de pacientes. Los autores de la presente invención son los primeros en demostrar la asociación de microsatélites polimórficos, como MICA-STR, con la progresión de la hipooacusia en la EM, demostrando, a su vez, que la asociación con otros marcadores previos no tiene soporte estadístico. Por tanto, las variantes alélicas de MICA-STR en el exón 5 influyen en la susceptibilidad y curso temporal de la pérdida de audición de la EM, preferiblemente en la población española.

Por tanto, un primer aspecto de la invención se refiere al uso del gen MICA, 10 para la obtención de datos útiles en el diagnóstico y/o pronóstico de la hipoacusia neurosensorial.

En esta memoria se entiende por “hipoacusia neurosensorial” la disminución del nivel de audición por debajo de lo que se considera normal, por lo que 15 según la pérdida de intensidad, medida en decibelios (dB) , la hipoacusia se clasifica en: Leve – cuando la pérdida de audición es menor de 35 dB. Moderada – cuando la pérdida de audición está entre 35 y 60 dB. Profunda o severa – cuando la pérdida de audición está entre 60 y 90

dB. Total o cofosis – cuando la pérdida de audición es superior a 90

Además, en la enfermedad de Meniere, la American Academy of Otolar y ngology-Head and Neck Surger y (AAO-HNS) definió en 1995 cuatro 25 estadios auditivos basados en el umbral de audición de las frecuencias de 500,

1000, 2000 y 3000 Hz, donde la hipoacusia se clasifica en: Estadio 1- cuando la pérdida de audición es menor o igual a 25 dB Estadio 2- cuando la pérdida de audición está entre 26 y 40 dB Estadio 3- cuando la pérdida de audición está entre 41-70 dB

Estadio 4. Cuando la pérdida de audición es superior a 70 dB Se determina mediante audiometria con tonos puros. La hipoacusia puede presentarse en uno o ambos oidos y puede ser súbita o brusca, rápidamente progresiva (semanas o meses) o lentamente progresiva (meses o años) . La hipoacusia neurosensorial afecta al oído interno y, se produce cuando los elementos neurosensoriales cocleares o el nervio coclear se lesionan de algún modo, por medios físicos o de otra naturaleza.

La cóclea es el órgano fundamental de audición situado en el oído interno, con forma de conducto enrollado espiralmente y, que contiene el órgano de Corti, donde se transforman las vibraciones mecánicas en impulsos nerviosos que, a través del nervio auditivo, llegan al cerebro para ser identificados. Cuando las células del órgano de Corti y/o el nervio auditivo se ven afectados, se interrumpe la transmisión de los sonidos. Cualquiera de estas delicadas estructuras pueden verse afectadas por diferentes procesos infecciosos, inflamatorios, tóxicos o degenerativos, siendo de todos ellos el ruido intenso y los procesos degenerativos, los responsables de la mayor parte de las sorderas de percepción.

Según el órgano afectado pueden clasificarse en:

! Endococleares. Cuando está afectado el oído interno.

! Retrococleares. Cuando está afectado el nervio auditivo.

En una... [Seguir leyendo]

1. Uso del gen MICA, para la obtención de datos útiles en el diagnóstico y/o pronóstico de la hipoacusia neurosensorial.

2. El uso del gen MICA según la reivindicación anterior, donde la hipoacusia neurosensorial se selecciona de la lista que consiste en: hipoacusia súbita, hipoacusia rápidamente progresiva, hipoacusia lentamente progresiva, hipoacusia neurosensorial con afectación de bajas frecuencias, enfermedad inmunomediada del oído interno, o cualquiera de sus combinaciones.

3. El uso del gen MICA según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde la hipoacusia neurosensorial además se asocia a crisis de vértigo recurrente.

4. El uso del gen MICA según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el diagnóstico y/o pronóstico de la enfermedad de Menière.

5. El uso del gen MICA según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque la región del gen MICA que se emplea es la región 5´ del exón terminal (SEQ ID NO: 2) .

6. Un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico y/o pronóstico de la hipoacusia neurosensorial, que comprende:

a) obtener el ADN genómico de una muestra biológica aislada de un individuo, y

b) detectar las variantes del gen MICA, en el ADN genómico de la muestra biológica aislada de (a) .

7. El método de obtención de datos útiles según la reivindicación anterior, que además comprende:

c) comparar las variantes detectadas en el paso (b) con una variante de referencia.

8. El método de obtención de datos útiles según cualquiera de las reivindicaciones 6-7, caracterizado porque la región del gen MICA que se emplea es la región 5´ del exón terminal (SEQ ID NO: 2) .

9. El método de obtención de datos útiles según cualquiera de las reivindicaciones 6-8, donde la muestra aislada es ADN de sangre periférica.

10. El método de obtención de datos útiles según cualquiera de las reivindicaciones 6-9, que además comprende asignar al individuo del paso (a) al grupo de individuos con bajo riesgo de padecer la enfermedad hipoacusia neurosensorial severa, cuando presenta el alelo MICA * A4.

11. El método de obtención de datos útiles según cualquiera de las reivindicaciones 6-10, donde la hipoacusia neurosensorial se selecciona de la lista que consiste en: hipoacusia súbita, hipoacusia rápidamente progresiva, hipoacusia lentamente progresiva, hipoacusia neurosensorial con afectación de bajas frecuencias, enfermedad inmunomediada del oído interno, o cualquiera de sus combinaciones.

12. El método de obtención de datos útiles según cualquiera de las reivindicaciones 6-11, donde la hipoacusia neurosensorial además se asocia a crisis de vértigo recurrente.

13. El uso del método de obtención de datos útiles según cualquiera de las reivindicaciones 6-12, en el diagnóstico y/o pronóstico de la enfermedad de Menière.

14. Un kit que comprende al menos un oligonucleótido complementario a la secuencia SEQ ID NO: 1.

15. El kit según la reivindicación anterior, que comprende dos cebadores complementarios a la secuencia SEQ ID NO: 1, capaces de hibridar con ella, o con su secuencia complementaria, en condiciones de amplificación.

16. El kit según cualquiera de las reivindicaciones 14-15, donde los cebadores son capaces de hibridar con la secuencia SEQ ID NO: 2, o con su secuencia complementaria.

17. El kit según cualquiera de las reivindicaciones 14-16, donde los cebadores son la secuencia nucleotídica SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4, respectivamente.

18. El kit según la reivindicación 17, donde el cebador de secuencia nucleotídica SEQ ID NO: 4 está marcado en el extremo 5' con 6-FAM.

19. Uso del kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-15, para el diagnóstico y/o pronóstico de la hipoacusia neurosensorial.

20. El uso del kit según la reivindicación anterior, donde la hipoacusia neurosensorial se selecciona de la lista que consiste en: hipoacusia súbita, hipoacusia rápidamente progresiva, hipoacusia lentamente progresiva, hipoacusia neurosensorial con afectación de bajas frecuencias, enfermedad inmunomediada del oído interno, o cualquiera de sus combinaciones.

21. El uso del kit según cualquiera de las reivindicaciones 19-20, donde la hipoacusia neurosensorial además se asocia a crisis de vértigo recurrente.

22. El uso del kit según cualquiera de las reivindicaciones 19-21, en el diagnóstico y/o pronóstico de la enfermedad de Menière.

Figura 1