MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN PRECOZ DEL SEXO EN ESPECIES DEL GENERO SCOPHTHALMUS.

Método de identificación precoz del sexo en especies del género Scophthalmus.

Método para identificar el sexo en especies del género Scophthalmus antes de que tenga lugar la maduración sexual, que comprende: la extracción de DNA de una muestra biológica aislada de un individuo; poner en contacto la muestra a analizar con una mezcla de reacción, que contiene cebadores capaces de amplificar el marcador microsatélite M-SmaSD; amplificar mediante la reacción en cadena de la polimerasa el marcador microsatélite M-SmaSD; y realizar el genotipado del individuo. Además se refiere a los dos cebadores mencionados utilizados en dicho método, así como a un kit de diagnóstico que comprende los elementos adecuados para llevar a cabo este método

Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P200930098.

Solicitante: UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE COMPOSTELA
UNIVERSIDAD POLITECNICA DE MADRID
INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACION Y TECNOLOGIA AGRARIA Y ALIMENTARIA (INIA)
.

Nacionalidad solicitante: España.

Provincia: A CORUÑA.

Inventor/es: BOUZA FERNANDEZ,CARMEN, GOMEZ PARDO,BELEN, MARTINEZ PORTELA,PAULINO, TORO IBAÑEZ,MIGUEL ANGEL, FERNANDEZ MARTIN,JESUS, VIÑAS DIAZ,ANA MARIA, VERA RODRIGUEZ,MANUEL, HERMIDA PRIETO,MIGUEL, FERNANDEZ LOPEZ,CARLOS, SANCHEZ PIÑON,LAURA.

Fecha de Solicitud: 24 de Abril de 2009.

Fecha de Publicación: .

Fecha de Concesión: 10 de Octubre de 2011.

Clasificación PCT:

  • A01K61/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01K CRÍA DE ANIMALES; AVICULTURA; APICULTURA; PISCICULTURA; PESCA; ANIMALES PARA CRIA O REPRODUCCIÓN, NO PREVISTOS EN OTRO LUGAR; NUEVAS VARIEDADES DE ANIMALES.Cultivo de animales acuáticos (recipientes para peces vivos, p. ej. acuarios, A01K 63/00).
  • C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2354343_B2.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Método de identificación precoz del sexo en especies del género Scophthalmus.

La presente invención se encuentra dentro del campo de la biología molecular y la acuicultura y se refiere a un método para identificar el sexo en especies del género Scophthalmus antes de que tenga lugar la maduración sexual, lo que permite la selección precoz de los individuos de mayor interés productivo, en este caso, las hembras.

Estado de la técnica anterior

El rodaballo (Scophthalmus maximus) posee un alto valor comercial y ha sido cultivado intensivamente durante la última década. Con el fin de conseguir el éxito en la acuicultura a gran escala, es necesaria la mejora genética de esta especie y/o la selección asistida por marcadores genéticos de los individuos más interesantes para los cultivos.

La evaluación de los recursos genéticos en poblaciones naturales constituye una herramienta esencial que se ha venido aplicando en diferentes especies, y en particular en rodaballo (Bouza et al., 2002, Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 59: 1460-1473), mediante el análisis de las variantes alélicas de diferentes marcadores (isoenzimas, AFLP, RAPD, microsatélites, etc.) o mediante el análisis de secuencias mitocondriales (Moritz, 1994, Trends in Ecology and Evolution 9: 373-375). La estimación de parentescos moleculares tiene gran interés para los programas de selección genética, y para ello se precisa de marcadores genéticos altamente polimórficos, técnicamente fiables y preferentemente codominantes. Los candidatos idóneos son los loci microsatélites que se han usado ampliamente para tal fin (Liu y Cordes, 2004, Aquaculture 238: 1-37), y en particular en rodaballo (Castro et al., 2004, Aquaculture, 242: 119-135). Los marcadores moleculares, además suponen un método para confirmar la herencia exclusiva paterna o materna en individuos androgenéticos y ginogenéticos, respectivamente (Felip et al., 2000, Marine Biotechnology 2: 301-306), metodología que también se ha aplicado a rodaballo (Castro et al., 2003, Marine Biotechnology, 5: 584-592). Estos marcadores moleculares, tienen múltiples aplicaciones en la fundación de stocks de reproductores y en el desarrollo de planes de selección.

Aunque los marcadores genéticos son una herramienta empleada en acuicultura para llevar a cabo la selección asistida por marcadores de individuos de interés productivo dentro de una población en cultivo (Thomas Moen et al., 2008, BMC Genetics. 9:18), nunca habían sido empleados para seleccionar individuos de rodaballo en base a su sexo, porque se desconocían los marcadores asociados a su determinación.

En aquellas especies en cultivo en que las ventajas de crecimiento, maduración o adaptación al mercado estén asociadas a uno de los sexos, el estudio de los mecanismos de determinación sexual es esencial para poder obtener poblaciones monosexo. El conocimiento del sexo a edades tempranas es necesario en el manejo de las poblaciones en cultivo y en el establecimiento de stocks de reproductores. No obstante, la determinación del sexo en peces presenta características peculiares dado que existe una mayor labilidad y versatilidad que en el resto de los vertebrados (Bull, 1983, Benjamin Cumming Pub. Menlo Park, California. EE UU: 316 pp): son poco frecuentes los heteromorfismos cromosómicos asociados al sexo, se han descrito mecanismos poligénicos de determinación sexual, es factible la reversión sexual mediante tratamientos hormonales, es frecuente el hermafroditismo y los factores ambientales pueden influir en la determinación sexual. Sin embargo, hay indicios de mecanismos genéticos de determinación sexual similares a los de los vertebrados (Hunter y Donaldson, 1983, Fish Physiology 9 B: 223-303. Academic Press. Nueva York; Nanda et al., 1992, Chromosoma 101: 301-310).

Como en otras especies de peces teleósteos, en el rodaballo las hembras crecen más rápidamente que los machos alcanzando el tamaño comercial entre tres y seis meses antes que estos. Además, las hembras maduran sexualmente más tarde (a los 24 meses de edad frente a los 15-18 meses de los machos). Dicha maduración está asociada con una pérdida de calidad de la carne, una mayor susceptibilidad a enfermedades y una ralentización del crecimiento. Por todo ello, en el cultivo intensivo de esta especie es de gran interés incrementar la proporción de hembras, ya que presentan un mayor valor económico.

Sin embargo, la determinación del sexo en rodaballo es compleja y no se puede realizar con fiabilidad hasta después de que se produzca la maduración sexual, lo que imposibilita la detección precoz de machos y hembras necesaria para llevar a cabo los planes de selección. El gen o genes responsables de que la gónada esté predeterminada a convertirse en ovario o testículo pueden estar en un solo par cromosómico, en el par sexual, o distribuidos en distintos lugares del genoma.

Con anterioridad, se ha detectado la existencia de un comportamiento cromosómico diferencial durante la meiosis entre machos y hembras triploides, que podría explicar la diferencia en la maduración gonadal entre ambos sexos de rodaballo (Cuñado et al., 2001, Genome 44: 1143-1147; Cuñado et al., 2002, Heredity 89: 460-464). Además se ha visto que los triploides de esta especie tienen la ventaja de evitar los problemas asociados a la maduración gonadal y muestran una proporción superior de hembras (Piferrer et al., 2000, Aquaculture 188: 79-90; Cal et al., 2006, Aquaculture, 251: 99-108), lo cual es interesante en las poblaciones de rodaballo, en las que las hembras crecen más rápidamente que los machos. Sin embargo, la metodología de obtención de triploides aún ha de ser valorada y adaptada para su aplicación a escala industrial.

Algo similar ocurre en el caso de los ginogenéticos (individuos de constitución genética matrilineal). El análisis de la proporción de sexos en ginogenéticos ha aportado información relevante en relación con la elucidación de los mecanismos de determinación sexual en diferentes especies, y en particular en rodaballo (Cal et al, 2006, Journal of Fish Biology, 68: 401-413).

Otra de las aproximaciones a esta cuestión ha sido la búsqueda de secuencias de ADN específicas asociadas al sexo en otras especies de peces (Nakayama et al, 1994, Chromosoma 103: 31-39). Así, en el lenguado japonés se han logrado asociar determinadas regiones genéticas con la determinación del sexo y se ha desarrollado un método basado en la técnica de PCR para amplificar estas regiones de ADN, las cuales posteriormente son analizadas en un gel en el que la diferencia de tamaños de los fragmentos obtenidos permite determinar el sexo del individuo analizado (W02008117715 A1). No obstante, no existe ninguna técnica similar a esta que permita una identificación sexual en Scophthalmus maximus, por no haberse encontrado ninguna región genética asociada con la determinación sexual, de manera que la selección en base al sexo asistida por marcadores se ha podido desarrollar en otras especies de peces pero no así en el rodaballo.

En rodaballo, se han realizado aproximaciones citogenéticas con cromosomas mitóticos (Bouza, Sánchez y Martínez, 1994, Mar. Biol. 120: 609-613) y meióticos (Cuñado, Terrones, Sánchez, Martínez y Santos, 2001, Genome, 44: 1143-1147) para tratar de evidenciar heteromorfismos asociados al sexo, pero sin resultados positivos.

Se han aplicado técnicas de genómica estructural (mapas genéticos y "quantitative trait loci" o QTL) y proteómica para detectar regiones genómicas o genes específicos relacionados con los mecanismos de diferenciación gonadal en esta especie (Martínez, P., 2005, Boletín Instituto Español de Oceanografía. 21 (1-4): 225-238). En relación a ello, se ha construido un mapa genético con microsatélites de Scophthalmus maximus (Bouza, 2007, Genetics 177: 2457-2467), que ha aportado la posibilidad de identificar QTLs relacionados con el crecimiento y la resistencia a enfermedades y con la detección de regiones genómicas asociadas con la determinación sexual, que pueden tener aplicación en la selección asistida por marcadores. No obstante, hasta la fecha no se había conseguido asociar ninguna región genética concreta a la determinación sexual.

Debido a todas estas dificultades, hasta el momento la selección se realiza a una edad en la que... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Método de obtención de datos para la identificación precoz del sexo en especies del género Scophthalmus, que comprende:

a. la extracción de DNA de una muestra biológica aislada de un individuo,

b. poner en contacto la muestra a analizar con una mezcla de reacción, que contiene cebadores capaces de amplificar el marcador microsatélite M-SmaSD que se encuentra incluido en la SEQ ID NO: 3,

c. amplificar mediante la reacción en cadena de la polimerasa el marcador microsatélite M-SmaSD,

d. realizar el genotipado del individuo.

2. Método de obtención de datos para la identificación precoz del sexo en especies del género Scophthalmus según la reivindicación 1, donde los cebadores para el marcador microsatélite M-SmaSD son los que se recogen en la SEQ ID NO: 1 y la SEQ ID NO: 2.

3. Método de identificación precoz del sexo en especies del género Scophthalmus, que comprende el método de obtención de datos según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, y además:

e. asociar un determinado genotipo del paso (d) al sexo masculino y otro al sexo femenino.

4. Método de selección de individuos del sexo femenino en especies del género Scophthalmus, que comprende los pasos del método de obtención de datos según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 y/o del método de identificación precoz del sexo según la reivindicación 3, y que además comprende testar la presencia de un QTL (quantitative trait loci) relacionado con el sexo y asociado con el marcador microsatélite M-SmaSD.

5. Método de obtención de datos según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, método de identificación precoz del sexo según la reivindicación 3, o método de selección de especies del género Scophthalmus según la reivindicación 4, donde la muestra biológica aislada proviene de la aleta caudal.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que uno de los cebadores capaces de amplificar el marcador microsatélite M-SmaSD del paso (b) está marcado con un fluorocromo.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 donde el marcador microsatélite M-SmaSD incluye una o más secuencias de tipo: (TA)n.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 donde la especie del género Scophthalmus es Scophthalmus maximus.

9. Uso de los cebadores recogidos en las SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2 para llevar a cabo cualquiera de los métodos de las reivindicaciones 1-8.

10. Uso de la secuencia de nucleótidos de tipo microsatélite recogida en la SEQ ID NO: 3 para llevar a cabo los métodos de cualquiera de las reivindicaciones 1-8.

11. Kit de diagnóstico precoz del sexo en especies del género Scophthalmus que comprende los cebadores para el marcador microsatélite M-SmaSD cuya secuencia se recoge en la SEQ ID NO: 1 y la SEQ ID NO: 2.


 

Patentes similares o relacionadas:

Método para analizar ácido nucleico molde, método para analizar sustancia objetivo, kit de análisis para ácido nucleico molde o sustancia objetivo y analizador para ácido nucleico molde o sustancia objetivo, del 29 de Julio de 2020, de Kabushiki Kaisha DNAFORM: Un método para analizar un ácido nucleico molde, que comprende las etapas de: fraccionar una muestra que comprende un ácido nucleico molde […]

MÉTODOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMOS ATÓPICOS SENSIBLES A COMPONENTES ALERGÉNICOS DEL POLEN DE OLEA EUROPAEA (OLIVO), del 23 de Julio de 2020, de SERVICIO ANDALUZ DE SALUD: Biomarcadores y método para el diagnostico, estratificación, seguimiento y pronostico de la evolución de la enfermedad alérgica a polen del olivo, kit […]

Detección de interacciones proteína a proteína, del 15 de Julio de 2020, de THE GOVERNING COUNCIL OF THE UNIVERSITY OF TORONTO: Un método para medir cuantitativamente la fuerza y la afinidad de una interacción entre una primera proteína de membrana o parte de la misma y una […]

Secuenciación dirigida y filtrado de UID, del 15 de Julio de 2020, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Un procedimiento para generar una biblioteca de polinucleótidos que comprende: (a) generar una primera secuencia del complemento (CS) de un polinucleótido diana a partir […]

Métodos para la recopilación, estabilización y conservación de muestras, del 8 de Julio de 2020, de Drawbridge Health, Inc: Un método para estabilizar uno o más componentes biológicos de una muestra biológica de un sujeto, comprendiendo el método obtener un […]

Evento de maíz DP-004114-3 y métodos para la detección del mismo, del 1 de Julio de 2020, de PIONEER HI-BRED INTERNATIONAL, INC.: Un amplicón que consiste en la secuencia de ácido nucleico de la SEQ ID NO: 32 o el complemento de longitud completa del mismo.

Composiciones para modular la expresión de SOD-1, del 24 de Junio de 2020, de Biogen MA Inc: Un compuesto antisentido según la siguiente fórmula: mCes Aeo Ges Geo Aes Tds Ads mCds Ads Tds Tds Tds mCds Tds Ads mCeo Aes Geo mCes Te (secuencia […]

Aislamiento de ácidos nucleicos, del 24 de Junio de 2020, de REVOLUGEN LIMITED: Un método de aislamiento de ácidos nucleicos que comprenden ADN de material biológico, comprendiendo el método las etapas que consisten en: (i) efectuar un lisado […]

Utilizamos cookies para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relevante. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede obtener más información aquí. .