METODO PARA LA IDENTIFICACION DEL ORIGEN DE LOS PIÑONES COMERCIALES.

Método para la identificación del origen de los piñones comerciales.

En la presente invención se describe un método para la identificación del origen de la procedencia de los piñones comerciales, ya sea en lotes comerciales (entero o en trozos, con cáscara, etc.) o formando parte de salsas, postres, etc. Mediante el método descrito en la presente invención se averigua la procedencia del piñón denominado coloquialmente "piñón comercial", diferenciando preferentemente entre los piñones europeos procedentes de la especie de pinos Pinus pinea L., frente a los piñones chinos procedente de la especie de pinos Pinus koraiensis. Para ello se utilizan marcadores genéticos invariantes del cloroplasto, el Pt15169 y el Pt30204, que presentan un número de pb específico e invariable en los piñones de procedencia europea, frente al variable y mayor número de pb que presentan los piñones de procedencia china

Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P200930304.

Solicitante: INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACIONES Y TECNOLOGIA AGRARIA Y ALIMENTARIA (INIA).

Nacionalidad solicitante: España.

Provincia: MADRID.

Inventor/es: GARCIA BARRIGA,MARIA CARMEN, GONZALEZ MARTINEZ,SANTIAGO CESAR, GRIVET,DELPHINE, VENDRAMIN,GIOVANNI GIUSEP.

Fecha de Solicitud: 12 de Junio de 2009.

Fecha de Publicación: .

Fecha de Concesión: 29 de Noviembre de 2011.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

Clasificación PCT:

  • C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.

Fragmento de la descripción:

Método para la identificación del origen de los piñones comerciales.

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a un método para la identificación de la especie de origen de los piñones comerciales, diferenciando preferentemente entre el piñón de origen europeo procedente de la especie de pino Pinus pinea y el piñón de origen chino procedente de la especie de pino Pinus koraiensis. Por lo tanto la presente invención puede englobarse dentro del campo de la industria alimentaria.

Estado de la técnica

La especie de origen del piñón es importante ya que determina su tamaño, valor nutricional (y medicinal) y sabor. Sin embargo, los consumidores no suelen poder distinguir entre las diferentes especies, que frecuentemente se comercializan bajo el nombre genérico de "piñón" sin precisar su origen. En general, el piñón europeo es más apreciado que el chino por sus características organolépticas y alcanza mayores precios en el mercado. El piñón se comercializa tanto entero (con cáscara), pelado, en trozos o formando parte de productos procesados o derivados del mismo, como es la salsa italiana "pesto" o diferentes tipos de preparados de repostería.

Ambos tipos de piñón, piñón europeo y piñón chino, se encuentran frecuentemente tanto en el mercado nacional como en el internacional. No existen estimaciones precisas de la producción mundial de piñón, pero se considera que pueda estar alrededor de las 20.000 toneladas en los años con buenas cosechas (Sharashkin y Gold 2004 Northern Nut Growers Association 95th Annual Report). Los piñones tienen un valor nutricional excepcional, con porcentajes altos de proteínas, micronutrientes y vitaminas, están libres de colesterol (FAO 1995 Non-wood forest producís from conifers, Chapter 8: Seeds, fruits and cones http://www.fao.org/docrep/X0453E/X0453e12.htm; Sharashkin y Gold 2004 op. cit.) y se recomiendan como un elemento importante para tener una dieta sana. Existen también evidencias epidemiológicas y clínicas sobre el efecto beneficioso del consumo regular de piñones en la prevención de enfermedades coronarias y los factores de riesgo asociados (Kris-Etherton y cols. 2008 Journal of Nutrition).

España es uno de los mayores productores de piñón europeo del mundo, contando con aproximadamente el 75% de la extensión forestal mundial de Pinus pinea (unas 400.000 ha). La media anual de producción de piñón europeo con cáscara en España durante 1974-2000 se sitúa en 6.466 toneladas, con un rango de 3.201-10.360 toneladas dependiendo de la bondad de la cosecha (Barranco y Ortuño 2004 Estudios Agrosociales y Pesqueros). Sin embargo, debido a los menores costes de producción y al etiquetado ambiguo del producto, el mercado de piñón español se está viendo afectado por la presencia creciente de piñón chino en los últimos años, con los inconvenientes que este hecho conlleva, tanto para el mercado español como para los propios consumidores, ya que al no indicar la procedencia del piñón, se pueden comprar piñones de menor calidad sin tener conocimiento de ello.

En el estado de la técnica existen documentos que utilizan los marcadores genéticos del cloroplasto, Pt15169 y Pt30204, para el genotipado (estructura y diversidad genética) de diferentes especies de pinos (Vendramin GG et al. Molecular Ecology 1996), así como también para el estudio de la distribución de dichas especies en función de dicha diversidad genética (Young Hee Joung & Mark S. Roh Forest Genetics 2005). En ninguno de los documentos aludidos se menciona el estudio de los marcadores genéticos del cloroplasto, Pt15169 y Pt30204, en la especie P. koraiensis, productora del piñón chino, ni tampoco se indica el número de pb que presentan las variantes alélicas de dichos marcadores genéticos en esta especie. Por otro lado, en el estado de la técnica, no se conoce la existencia de ningún método para la identificación del piñón europeo frente al piñón chino, utilizando marcadores genéticos del cloroplasto, en los que se utilicen las variantes alélicas de cada marcador por presentar siempre un tamaño de pb determinado y diferente en el caso del piñón europeo frente al mayor y variable número de pb que presentan dichas variantes alélicas en el caso del piñón chino, haciendo dicha característica que se puedan diferenciar un tipo de piñón respecto del otro, y por lo tanto averiguar la especie de procedencia de los mismos.

Vendramin y cols. (2008) han mostrado la existencia de una baja diversidad genética en el cloroplasto de Pinus pinea a lo largo de su distribución mundial. En un estudio en el que han analizado 12 marcadores genéticos del cloroplasto en 34 poblaciones diferentes de P. pinea distribuidas a lo largo del mediterráneo (España, Portugal, Francia, Italia, Croacia, Grecia, Turquía, Líbano, Marruecos y Túnez), han concluido que dicha especie presenta una ausencia casi total de variación en cuanto a los marcadores genéticos del cloroplasto analizados, en toda la variedad de especies, una característica raramente encontrada en cualquier otra especie de plantas. Por este motivo podemos concluir que un método para la identificación del origen del piñón comercial, basado en la utilización de marcadores genéticos del cloroplasto, para diferenciar entre piñón europeo (P. pinea) y piñón chino (P. koraiensis), tal como el descrito en la presente invención, es un método muy fiable y preciso, al estar basado en la identificación de marcadores genéticos del cloroplasto que presentan una mínima variabilidad genética, debido al bajo grado de diversidad genética que presenta la especie, P. pinea, productora de piñón europeo.

La presente invención describe un método para la identificación del origen de procedencia del piñón comercial, siendo capaz de diferenciar entre el piñón europeo procedente de la especie Pinus pinea L, frente al piñón chino procedente de la especie Pinus koraiensis. Así, el problema técnico solventado por la presente invención se refiere a la identificación de la especie de origen del piñón comercial, teniendo en cuenta que dicho origen determina el tamaño, valor nutricional, valor medicinal y sabor de los piñones, ya que frecuentemente, bajo el nombre genérico de "piñón" se comercializan piñones de diferentes especies. En este sentido, conviene diferenciar entre el piñón europeo y piñón chino, ya que el primero es más apreciado por sus características organolépticas y llega a alcanzar mayores precios en el mercado, que el segundo. Por lo tanto, gracias a la presente invención se solventa el problema técnico mencionado, ya que mediante la utilización de marcadores genéticos invariantes del cloroplasto, Pt15169 y Pt30204, se consigue diferenciar entre los piñones europeos (Pinus pinea L.) y los piñones chinos (Pinus koraiensis), gracias al diferente número de pb que presentan las variantes alélicas de dichos marcadores genéticos del cloroplasto en los piñones de una especie frente a los de otra.

Descripción de la invención

Breve descripción de la invención

La presente invención describe un método para la determinación de la especie de origen del piñón comercial, principalmente diferenciar entre el piñón europeo (P. pinea) y el piñón chino (P. koraiensis), basado en la utilización de marcadores genéticos del cloroplasto, Pt30204 y Pt15169, útiles para distinguir entre ambos tipos de piñones, ya que presentan unas variantes alélicas de tamaño único y específico para cada marcador genético en el piñón europeo y en cambio, en el piñón chino, esas variantes alélicas de los marcadores genéticos son de un tamaño variable y mayor que en el caso del piñón europeo, lo que permite diferenciar uno del otro.

Por el término de "piñón comercial", se entiende en la presente invención, todo aquel piñón crudo procedente de lotes comerciales de fabricación (pudiendo encontrarse entero, en trozos, con cáscara, etc), así como también cualquier tipo de producto derivado de piñones, como pueden ser por ejemplo la salsa italiana "pesto", o cualquier otro tipo de producto o alimento, salsa, etc que utilice piñones en su composición.

Descripción de las figuras

Figura 1. Fotografías de geles de acrilamida/bisacrilamida en los que se han corrido diferentes muestras problema de piñones y dónde se muestran el diferente tamaño de pb de...

 


Reivindicaciones:

1. Método para la identificación de la especie de origen de los piñones comerciales que comprende los pasos de:

a) Extraer el ADN de una muestra de piñón comercial.

b) Amplificar los marcadores genéticos de cloroplasto de la muestra del ADN extraído.

c) Someter a electroforesis en un gel los fragmentos de ADN amplificados.

d) Visualizar los fragmentos de ADN amplificados.

e) Analizar y comparar el número de pares de bases obtenido en el proceso de visualización de la muestra problema con un patrón de pares de bases conocido.

2. Método según la reivindicación 1 caracterizado porque identifica preferentemente el piñón europeo, Pinus pinea, frente al piñón chino, Pinus koraiensis.

3. Método según las reivindicaciones 1 y 2 caracterizado porque los marcadores genéticos de cloroplasto utilizados preferentemente son: Pt15169 y Pt30204.

4. Método según la reivindicación 3 caracterizado porque el número de pares de bases del marcador genético Pt15169 en el piñón europeo es 115.

5. Método según la reivindicación 3 caracterizado porque el número de pares de bases del marcador genético Pt30204 en el piñón europeo es 145.

6. Método según la reivindicación 3 caracterizado porque el número de pares de bases del marcador genético Pt15169 en el piñón chino varía entre 133-148, con una diferencia de al menos 18 pares de bases frente al piñón europeo.

7. Método según la reivindicación 3 caracterizado porque el número de pares de bases del marcador genético Pt30204 en el piñón chino varía entre 158-168, con una diferencia de al menos 13 pares de bases frente al piñón europeo.

8. Método según las reivindicaciones 1 a 3 caracterizado porque en el paso b) los cebadores utilizados para la amplificación del marcador genético Pt15169 corresponden a las secuencias SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4.

9. Método según las reivindicaciones 1 a 3 caracterizado porque en el paso b) los cebadores utilizados para la amplificación del marcador genético Pt30204 corresponden a las secuencias SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

10. Método según las reivindicaciones 1 a 3 caracterizado porque en el paso d) la visualización se realiza en secuenciadores automáticos.


 

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