Método para la identificación de muestras de mamíferos y juego para la aplicación de dicho método.

Método para el análisis de muestras biológicas de un mamífero para determinar la presencia de un componente que consta de los pasos siguientes:

(a) administración oral de una combinación de, como mínimo, dos marcadores a un mamífero; (b) espera del tiempo necesario para que la combinación de, como mínimo, dos marcadores alcance el punto de obtención de la muestra; (c) obtención de la muestra biológica del mamífero; (d) análisis de la muestra biológica para determinar la presencia o cantidad de la combinación de, como mínimo, dos marcadores o derivados de los mismos así como si la combinación de los, como mínimo, dos marcadores o derivados de éstos se puede detectar en la muestra biológica; (e) análisis de la muestra biológica para determinar la presencia de un analito, siendo la muestra biológica de un mamífero una muestra de orina obtenida mediante su recogida en un recipiente de recogida de muestras, y que se caracteriza porque los, como mínimo, dos marcadores se seleccionan de entre los isoprenoides, lípidos, sacáridos, polioles, polietilenglicoles o de entre los derivados de estas sustancias.

Método para la identificación de muestras de mamíferos y juego para la aplicación de dicho método

El presente invento hace referencia a un método por el que se puede identificar el origen de una muestra de tejido o muestra obtenida de un excremento o fluido corporal de un mamífero y, de este modo, atribuir inequívocamente dicha muestra al donante en cuestión. Posteriormente la citada muestra se puede analizar en busca de un analito. Asimismo, el objeto del invento también consiste en el juego que permite la aplicación de este método.

Los métodos diagnósticos, los métodos para supervisar la evolución de una medida terapéutica, los estudios profilácticos estándar y los análisis de la medicina forense aplicados a sujetos humanos suelen incluir estudios analíticos de muestras que se llevan a cabo en el laboratorio, como muestras sanguíneas o séricas obtenidas del sujeto, así como el análisis de productos eliminados por el organismo, por ejemplo la orina.

Habida cuenta de la existencia de múltiples pruebas diagnósticas y tratamientos veterinarios para animales, se puede afirmar que en la actualidad existe una gama muy amplia de métodos analíticos aplicados a muestras animales y que son una práctica habitual. Los problemas que han surgido especialmente en la ganadería intensiva, como los casos de encefalopatía espongiforme bovina (EEB) provocados por el engorde con piensos de origen animal o el uso de aditivos ilegales en forma de hormonas o preparados antibióticos en

el pienso del ganado, exigen una ampliación de los análisis de control regulares a los que se someten los rebaños.

En este contexto, resulta evidente que cualquier estudio analítico de una muestra sólo es significativo si los resultados obtenidos se pueden atribuir sin ningún tipo de duda al donante correspondiente para iniciar la

respuesta correcta en el análisis de los resultados del estudio.

Continuamente se desarrollan nuevos métodos analíticos y de prueba como parte de los avances técnicos y científicos. Así, por ejemplo, los avances logrados en biología molecular permiten llevar a cabo una serie de métodos de detección basados en el análisis de ADN que llevan a diagnosticar determinadas enfermedades

en personas o animales.

Muchos de estos nuevos métodos analíticos y de detección también tienen aplicaciones en la medicina forense o deben su desarrollo a esta especialidad, a causa de los retos cada vez más exigentes a los que se enfrenta, como las pruebas específicas para la detección de sustancias dopantes en atletas o drogas en

conductores.

Debido a la gran cantidad de métodos analíticos aplicados así como a su complejidad, se esperan unos elevados estándares del equipo técnico y del personal de laboratorio encargado de realizar estos estudios. Normalmente se deben analizar muchas muestras de forma simultánea con modernos equipos de análisis,

por lo que inevitablemente surge el problema de la confusión de muestras que, en última instancia, supone una atribución incorrecta de los resultados del análisis al donante de la muestra. Este problema no es nuevo, y todavía se agrava más especialmente como consecuencia del rápido desarrollo de nuevos métodos analíticos y de la necesidad de expansión de su uso que va asociada.

45 Puesto que las consecuencias de la confusión o intercambio de muestras para analizar son distintas pero suelen ser inconvenientes, ya se ha formulado un conjunto de sugerencias para resolver este problema.

Estos intentos de buscar soluciones se centran principalmente en una mejor organización del flujo de trabajo de un laboratorio de análisis, mientras que algunas reglas de comportamiento que se citan a continuación

50 tienen como objetivo minimizar el peligro de confusión de muestras. Sin embargo, puesto que el propio personal del laboratorio se encarga de muchos de los pasos de los protocolos de estos métodos analíticos, las confusiones atribuibles a errores humanos no se pueden descartar por completo.

Habida cuenta de estas consideraciones, la supervisión informática de cada uno de los pasos del protocolo a

55 los que se debe someter la prueba es una práctica muy extendida, por ejemplo por medio del etiquetado de los recipientes que contienen las muestras con un código informatizado para poder seguir la evolución de cada muestra durante el conjunto del proceso de análisis, desde el registro de la muestra hasta el almacenamiento de los resultados analíticos pasando por el procesado. Estos análisis supervisados y controlados informáticamente permiten un mayor número de determinaciones paralelas de muestras

60 diferentes sin un peligro significativo de confusión.

Sin embargo, para los expertos en la técnica resultará evidente que incluso utilizando el sistema más inteligente de supervisión de muestras para analizar en el laboratorio y de atribución de los resultados a las correspondientes muestras, para luego atribuirlas a los respectivos donantes, no se puede excluir por completo una confusión o intercambio de muestras, puesto que para ello basta con un etiquetado incorrecto de las muestras o de los resultados.

El problema descrito de confusión o intercambio de muestras se ve especialmente agravado en aquellos

ámbitos de aplicación en los que los resultados de los análisis se pueden utilizar como pruebas que incriminen al donante o, en el caso de una muestra de una cabeza de ganado, al dueño del animal. En estos casos, el sujeto o el dueño están especialmente interesados en alterar las muestras que se deben analizar para evitar que se conviertan en pruebas que les incriminen.

Sin embargo, es especialmente en estos casos cuando una atribución inequívoca de los resultados al donante resulta particularmente importante, puesto que con frecuencia determinadas normativas sólo se pueden hacer cumplir de este modo.

Las soluciones de la técnica anterior para evitar la alteración de las muestras se basan principalmente en

supervisar la obtención de la muestra. Por ejemplo, es una práctica habitual el supervisar la obtención de muestras de orina de sujetos que participan en tratamientos con metadona.

Sin embargo, incluso la supervisión y el control más exhaustivos de los sujetos durante la obtención de muestras de orina no evita por completo el intercambio de muestras. En Alemania, 20.000 de los entre

120.000 y 140.000 drogodependientes ya se tratan con metadona, y se ha previsto un gran incremento de esta cifra en el futuro. Puesto que los pacientes tratados con metadona a menudo también toman otros narcóticos, como barbitúricos y tranquilizantes, el tratamiento terapéutico requiere un control de las sustancias que han tomado los pacientes.

De conformidad con las pautas para un tratamiento con metadona, la orina se debe analizar como mínimo una vez por semana o, en determinadas circunstancias, incluso con mayor frecuencia. Normalmente, no se pueden obtener muestras de orina bajo observación en las consultas normales de los doctores puesto que, por lo general, se dispone de unos pequeños aseos y el personal médico masculino no suele mostrar la predisposición necesaria para acompañar a los pacientes varones en tratamiento con metadona. La

construcción de aseos adecuados para la obtención de muestras bajo observación requiere un gran desembolso financiero. Sólo los costes de esta inversión en las instalaciones sanitarias de Dusseldorf ascendieron a 50.000 marcos alemanes.

Debido a que se ha observado que, con frecuencia, las muestras de orina obtenidas se alteran, cada vez se

dedican más esfuerzos a los métodos analíticos para la detección de drogas en la secreción salival. Incluso aunque, en contraposición al uso de muestras de sangre, plasma u orina para los análisis, se puede obtener una muestra de saliva sin una acción invasiva que provoque lesiones o sin violar la privacidad del sujeto, el peligro de una confusión de las muestras por negligencia o una alteración intencionada de las mismas sigue sin poderse evitar.

La patente US-5.179.027 proporciona un método para verificar el origen y la integridad de las muestras de orina que consta de: el consumo de una cantidad de un primer y un segundo marcador químico por parte...

1. Método para el análisis de muestras biológicas de un mamífero para determinar la presencia de un componente que consta de los pasos siguientes: (a) administración oral de una combinación de, como 5 mínimo, dos marcadores a un mamífero; (b) espera del tiempo necesario para que la combinación de, como mínimo, dos marcadores alcance el punto de obtención de la muestra; (c) obtención de la muestra biológica del mamífero; (d) análisis de la muestra biológica para determinar la presencia o cantidad de la combinación de, como mínimo, dos marcadores o derivados de los mismos así como si la combinación de los, como mínimo, dos marcadores o derivados de éstos se puede detectar en la muestra biológica; (e) análisis de la

muestra biológica para determinar la presencia de un analito, siendo la muestra biológica de un mamífero una muestra de orina obtenida mediante su recogida en un recipiente de recogida de muestras, y que se caracteriza porque los, como mínimo, dos marcadores no se metabolizan tras su consumo por parte del sujeto y se seleccionan de entre los isoprenoides, lípidos, sacáridos, polioles, polietilenglicoles o de entre los derivados de estas sustancias.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, en el que la citada combinación de, como mínimo, dos marcadores incluye, por lo menos, tres marcadores y, preferiblemente, cinco marcadores.

3. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se utilizan como 20 mínimo dos polietilenglicoles con distintos pesos moleculares como marcadores.

4. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el marcador o marcadores se detectan por medio de cromatografía de gases, cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas, cromatografía líquida de alto rendimiento o cromatografía líquida de alto

rendimiento acoplada a espectrometría de masas.

5. El método de conformidad con la reivindicación 1, en el que las muestras de orina de los pacientes tratados con metadona se analizan en busca de tóxicos, y que consta de los siguientes pasos: (a) administración oral de una combinación de 2n–1 polietilenglicoles con distintos pesos moleculares a un paciente tratado con

metadona, siendo n un número entero mayor que cero, preferiblemente por lo menos 2, de forma todavía más preferente 3, y en una forma de realización ideal, 5; (b) espera durante un periodo de tiempo de, como mínimo, 30 minutos y, como máximo, 4 horas; (c) obtención de una muestra de orina de la orina miccionada por el paciente; (d) análisis de la muestra de orina para detectar la presencia de los polietilenglicoles administrados y, según el caso; (e) análisis de la muestra de orina en busca de tóxicos.

6. El juego para la aplicación del método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que incluye, en un envase, una combinación de como mínimo dos o, preferentemente, tres, y de forma todavía más preferente, cinco marcadores, que se seleccionan de entre los isoprenoides, lípidos, sacáridos, polioles, polietilenglicoles o de entre los derivados de estas sustancias, en el que los marcadores no se

metabolizan tras su consumo por parte del sujeto.

7. El juego de conformidad con la reivindicación 6, que contiene una combinación de 2n–1 polietilenglicoles con distintos pesos moleculares en uno o varios recipientes, siendo n un número entero mayor que cero, preferiblemente por lo menos 2, de forma todavía más preferente 3, y en una forma de realización ideal, 5.

8. El juego de conformidad con la reivindicación 6 u 7, que además incluye medios para administrar, como mínimo, un marcador.

9. El juego de conformidad con la reivindicación 8, que además incluye medios para la detección de los, como 50 mínimo, dos marcadores en la muestra obtenida del mamífero.

10. El juego de conformidad con la reivindicación 9, que además incluye sustancias de referencia para la detección de, como mínimo, dos marcadores.