Método de identificación genética de la anchoa europea y de su origen geográfico o población.

La invención pertenece al campo del análisis genético de la anchoa europea o Engraulis encrasicolus. Más concretamente, la invención consiste en unos marcadores moleculares del tipo SNP (Single Nucleotide Polymorphisms) y un método genético que utiliza dicho panel de marcadores SNP para identificar la anchoa europea (Engraulis encrasicolus) y su origen geográfico o población en productos derivados de la pesca. Asimismo, la invención consiste en un kit que comprende las sondas necesarias para la realización del método de la invención, y adicionalmente los cebadores necesarios para la realización de dicho método.

MÉTODO DE IDENTIFICACiÓN GENÉTICA DE LA ANCHOA EUROPEA Y DE SU ORIGEN GEOGRÁFICO O POBLACiÓN

CAMPO DE LA INVENCION

La invención pertenece al campo del análisis genético de la anchoa europea o Engraulis encrasicolus. Más concretamente, la invención consiste en unos marcadores moleculares del tipo SNP (Single Nucleotide Polymorphisms) y un método genético que utiliza dicho panel de marcadores SNP para identificar la anchoa europea (Engraulis encrasicolus) y su origen geográfico o población en productos derivados de la pesca. Asimismo, la invención consiste en un kit que comprende las sondas necesarias para la realización del método de la invención, y adicionalmente los cebadores necesarios para la realización de dicho método.

ANTECEDENTES DE LA INVENCiÓN

La anchoa europea (E. encrasicolus) es un pequeño pez pelágico que vive en las aguas del Atlántico Oriental y del Mediterráneo, hasta 150 metros de profundidad. En los últimos años se ha registrado un notable incremento en la demanda de pescados azules, apoyados por fuertes campañas publicitarias. Datos conjuntos de consumo de anchoa y sardina en España, las colocan como las segundas más consumidas, tras las merluzas, con más de

125.000 toneladas/año. Económicamente hablando, además de la gran cantidad de anchoa que es consumida fresca, la comercialización de semi conservas de anchoas tiene una gran importancia en España, con un consumo cercano a 15.000 toneladas/año, así como en otros países europeos como Italia y Francia.

Las características sensoriales de firmeza y sabor ligeramente amargo de la anchoa europea hacen que esta especie sea muy valorada culinariamente en comparación con otras especies de anchoas. Más aún, esta especie de anchoa, y en particular la proveniente del Cantábrico, está especialmente bien considerada por la industria conservera debido a su firmeza en el proceso de fileteado y especialmente al intenso sabor que caracteriza el producto final. Estas características hacen que su valor en el mercado sea muy alto y por lo tanto muy apreciada por los consumidores.

La creciente actividad pesquera registrada en Europa durante los últimos años está ocasionando una considerable merma en la captura de los peces comercialmente más importantes, incluida la anchoa. Sin embargo, el consumo de productos derivados de la anchoa, como las semiconservas, salazones u otros, no decrece sino todo lo contrario. Esta escasez de la anchoa europea, y en particular de la anchoa del cantábrico, está ocasionando una creciente importación de especies de anchoas procedentes de otros países. De hecho, las principales especies del género Engraulis que se aprovechan en otros países son, además de la anchoa europea, la anchoa japonesa, E. japonicus, la de Australia y Nueva Zelanda, E. australis, en África del Sur, E. capensis; en la costa pacífica de Panamá, E. clarki, en las costas de Argentina, Uruguay y sur de Brasil, E. anchoita y la presente principalmente en las costas chilenas y peruanas, E. ringens. Sin embargo, de entre todas estas especies, las procedentes de Sud américa son principalmente las que más rápida y ampliamente se están introduciendo en el mercado español y por extensión en el europeo.

El Reglamento (CE) nO 2065/2001 de la Comisión de 22 de octubre de 2001 establece las disposiciones de aplicación del Reglamento (CE) nO 104/2000 del Consejo en lo relativo a la información del consumidor en el sector de los productos de la pesca y de la acuicultura. Dicho reglamento incluye la obligatoriedad de informar en la etiqueta sobre el nombre científico, el método de producción (acuicultura o pesca extractiva) y la zona de captura del producto de origen. La Unión Europea está haciendo un gran esfuerzo en asegurar que se está cumpliendo la ley en lo que respecta a la correcta comercialización de los productos derivados de la pesca, para evitar fraudes en el etiquetado de las muestras y sobre todo como medida de protección de denominaciones de origen de productos con un alto estándar de calidad no siempre asociado únicamente a una especie específica sino también a un área o región geográfica concreta dentro de nuestras fronteras.

La alternativa a los microsatélites son, sin ningún lugar a duda, los polimorfismos de un único nucleótido, comúnmente denominados como SNP. Los SNP representan la clase más abundante de polimorfismos en cualquier organismo, son adaptables a la automatización y revelan polimorfismos no detectados por otro tipo de marcadores y métodos. Además, la tasa de mutación de este tipo de marcador es significativamente menor a la de los microsatélites (Landegren et al., 1998; Nielsen 2000) . Esta estabilidad es ventajosa en estudios evolutivos, de genética de poblaciones y en estudios de pedigrís y asignación individual (Rengmark et al., 2005) . Por otro lado, y dada la naturaleza dialélica de este tipo de marcador, la información que aporta cada SN P es menor a la de los loei microsatélites, pero el contenido informativo puede aumentarse mediante la inclusión de un mayor número de SNP (Glaubitz et al., 2003) . En este sentido, Rengmark et al. (2006) , realizaron un estudio comparativo del poder y eficiencia de microsatélites y SNP para estudios de poblaciones, análisis de parentesco y la asignación individual en salmón. En él concluyeron que los SNP mostraban resultados semejantes a los microsatélites y que dado que posibilitan un genotipado de alto rendimiento podrían llegar a ser los marcadores de elección en un futuro próximo.

Hasta la fecha, no tenemos constancia de ningún método genético que utilice un panel de SNP específico para la identificación del origen geográfico o poblaciones de la anchoa europea (E. encrasicolus) en productos derivados de la pesca, ya sea fresco, congelado y mucho menos procesado. Por lo tanto, la invención aquí presentada es del todo novedosa y original.

OBJETO DE LA INVENCiÓN

La invención consiste en un panel de 18 marcadores de tipo SNP que permiten, en primer lugar, la identificación de la especie de anchoa europea (Engraulis... [Seguir leyendo]

1) Conjunto de las secuencias de ADN SEO ID NO 1 a SEO ID NO 15 caracterizadas por que comprenden los siguientes SNP: SNP1 y SNP2 (SEO ID NO 1) , SNP3 (SEO ID NO 2) , SNP4 y SNP14 (SEO ID NO 3) , SNP5 (SEO ID NO 4) , SNP6 (SEO ID NO 5) , SNP7 (SEO ID NO 6) , SNP15 (SEO ID NO 7) , SNP16 (SEO ID NO 8) , SNP17 (SEO ID NO 9) , SNP18 (SEO ID NO 10) , SNP8 y SNP9 (SEO ID NO 11) , SNP1 O (SEO ID NO 12) , SNP11 (SEO ID

2) Uso de las secuencias de acuerdo a la reivindicación 1 y de los SNP incluidos en ellas como marcadores para identificar la especie Engraulis encrasicolus y su origen geográfico o población.

3) Método de identificación genética del origen geográfico y poblaciones de la anchoa europea (Engraulis encrasicolus) que comprende:

a) Extracción del ADN de la muestra de un producto derivado de la anchoa

b) Identificación de la especie Engraulis encrasicolus frente al resto de especies de anchoas pertenecientes al género Engraulis que comprende la amplificación y genotipado de un fragmento que contenga el SNP1 y el SNP2 (SEO ID NO 01) , donde la presencia en las posiciones 468 y 474 del gen mitocondrial citocromo b de una G y una T, respectivamente, es indicativa de la especie E. encrasicolus

c) Identificación del origen geográfico o poblaciones de la anchoa europea (E. encrasicolus) que comprende:

i. amplificación y genotipado de los siguientes 11 SNP según la reivindicación

1: SNP3 a SNP13,

ii. análisis de los resultados obtenidos en la fase i) y asignación del genotipo problema con una población de referencia: población Atlántico Este o población Vizcaya/Mediterráneo

iii. amplificación y genotipado de los siguientes 9 SNP según la reivindicación 1: SNP7 y SNP11 a SNP18,

iv. análisis de los resultados obtenidos en la fase iii) y asignación de la muestra problema con una población de referencia: población Mediterráneo o población Vizcaya.

4) Método según la reivindicación 3, caracterizado por que el genotipado de los SNP1 y

SNP2 de la etapa b) del método de la invención se lleva a cabo con la sonda SNP1 , 2-FAM (SEO ID NO 72) .

5) Método según las reivindicaciones 3 ó 4, caracterizado por que la amplificación del SNP1 y del SN P2 de la etapa b) del método de la invención se lleva a cabo con los oligonucleótidos SNP1 , 2-F (SEO ID NO 38) Y SNP1 , 2-R (SEO ID NO 39) .

6) Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, donde el genotipado de los SNP3 a SNP13 de la fase i) de la etapa c) se lleva a cabo con las siguientes sondas; SNP3 con las sondas SNP3-VIC (SEO ID NO 73) Y SNP3-FAM (SEO ID NO 74) ; SNP4 con las sondas SNP4-VIC (SEO ID NO 75) Y SNP4-FAM (SEO ID NO 76) ; SNP5 con las sondas SNP5-VIC (SEO ID NO 83) Y SNP5-FAM (SEO ID NO 84) ; SNP6 con las sondas SNP6-VIC (SEO ID NO 89) Y SNP6-FAM (SEO ID NO 90) ; SNP7 con las sondas SNP7-VIC (SEO ID NO 93) Y SNP7-FAM (SEO ID NO 94) ; SNP8 con las sondas SNP8-VIC (SEO ID NO 77) Y SNP8FAM (SEO ID NO 78) ; SNP9 con las sondas SNP9-VIC (SEO ID NO 79) Y SNP9-FAM (SEO ID NO 80) ; SNP1 O con las sondas SNP1 O-VIC (SEO ID NO 91) Y SNP1 O-FAM (SEO ID NO 92) ; SNP11 con las sondas SNP11-VIC (SEO ID NO 81) Y SNP11-FAM (SEO ID NO 82) ; SNP12 con las sondas SNP12-VIC (SEO ID NO 85) Y SNP12-FAM (SEO ID NO 86) ; SNP13 con las sondas SNP13-VIC (SEO ID NO 87) Y SNP13-FAM (SEO ID NO 88) .

8) Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7, caracterizado por que los oligonucleótidos utilizados en las fases i) y iii) de la etapa c) del método de la invención son los siguientes: SNP3-F (SEO ID NO 40) Y SNP3-R (SEO ID NO 41) para el SNP3; SNP4-F (SEO ID NO 42) Y SNP4-R (SEO ID NO 43) para el SNP4; SNP5-F (SEO ID NO 50) Y SNP5-R (SEO ID NO 51) para el SNP5; SNP6-F (SEO ID NO 56) Y SNP6-R (SEO ID NO 57) para el SNP6; SNP7-F (SEO ID NO 60) Y SNP7-R (SEO ID NO 61) para el SNP7; SNP8-F (SEO ID NO 44) Y SNP8-R (SEO ID NO 45) para el SNP8; SNP9-F (SEO ID NO 46) Y SNP9-R (SEO ID NO 47) para el SNP9; SNP10-F (SEO ID NO 58) Y SNP1 O-R (SEO ID NO 59) para el SNP10; SNP11-F (SEO ID NO 48) Y SNP11-R (SEO ID NO 49) para el SNP11; SNP12-F (SEO ID NO 52) Y SNP12-R (SEO ID NO 53) para el SNP12; SNP13-F (SEO ID NO 54) Y SNP13-R (SEO ID NO 55) para el SNP13; SNP14-F (SEO ID NO 66) Y SNP14-R (SEO ID NO 67) para el SNP14; SNP15-F (SEO ID NO 62) Y SNP15-R (SEO ID NO 63) para el SNP15; SNP16-F (SEO ID NO 64) Y SNP16-R (SEO ID NO 65) para el SNP16; SNP17-F (SEO ID NO 70) Y SNP17-R (SEO ID NO 71) para el SNP17; SNP18-F (SEO ID NO 68) Y SNP18-R (SEO ID NO 69) para el SNP18.

10) Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9 caracterizado por que la fase ii) de la etapa c) se lleva a cabo eligiendo un score umbral de 70% y donde la asignación del genotipo problema con una de las poblaciones de referencia Atlántico Este o MediterráneoNizcaya con un score mayor o igual a 70% es indicativa de pertenencia a dicha población.

11) Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9 caracterizado por que la fase ii) de la etapa c) se lleva a cabo eligiendo un score umbral de 85% y donde la asignación del genotipo problema con una de las poblaciones de referencia Atlántico Este o MediterráneoNizcaya con un score mayor o igual a 85% es indicativa de pertenencia a dicha población.

12) Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9 caracterizado por que la fase ii) de la etapa c) se lleva a cabo eligiendo un score umbral de 95% y donde la asignación del genotipo problema con una de las poblaciones de referencia Atlántico Este o MediterráneoNizcaya con un score mayor o igual a 95% es indicativa de pertenencia a dicha población.

14) Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 12 caracterizado por que la fase iv) de la etapa c) se lleva a cabo eligiendo un score umbral de 80% y donde la asignación del genotipo problema con una de las poblaciones de referencia Mediterráneo o Vizcaya con un score mayor o igual a 80% es indicativa de pertenencia a dicha población.

15) Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 12 caracterizado por que la fase iv) de la etapa c) se lleva a cabo eligiendo un score umbral de 85% y donde la asignación del genotipo problema con una de las poblaciones de referencia Mediterráneo o Vizcaya con un score mayor o igual a 85% es indicativa de pertenencia a dicha población.

16) Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 15 caracterizado por que la muestra de ADN se obtiene de pescado fresco, congelado, salazones, semiconservas, procesado o de una mezcla de los mismos.

17) Kit para llevar a cabo el método según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 16 caracterizado por que comprende el set de sondas SEO ID NO 72 a SEO ID NO 104.

18) Kit según la reivindicación 17 caracterizado por que además comprende un set de cebadores SEO ID NO 16 a SEO ID NO 71 y/o microarrays con estos cebadores y las

<110> Universidad del País vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea Fundación AZTI/AZTI Fundazioa

<120> Método de identificación genética de la anchoa europea y de su origen geográfico o población.

<160> 108

<170> Patentin version 3.5

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<212> DNA

<213> Engraulis sp.

<400> 1 gccttcgttg ggtacgtact accctgagga caaatgtcct tctgaggagc aactgtcatt 60 actaacctta tgtctgcagt tccttacgtg ggcactgaat trgtscartg aatttgaggr 120 ggcttttcgg tcgacaacgc gactcttact cggttcttcg e 161

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<212> DNA

<213> Engraulis sp.

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<213> Engraulis sp.

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60 gcaatttagc acgctttttt gctacgcttt gctttgcttt gattgaaatt tgcttgatgg 120 cttttcgcgg cttttgaatt gctacaacac acgctggcat gcgacgcttc acaagtgtgt 180 gtattttttt tttttaaacc atgtgcatgc ttggctgtgc attggtgagt ggtgagtatg 240 ttggatgaga gtgagtatgt cgatcgtctc tttttctctc tgaacaacat taatgctgac 300 acggcgaagg tggtggtgaa tgtcttgtat gtcccccagg ttctggggcc cacccgctgg 360 tcgacccgct ggccgccgga ccgcacctgg cccgattccc ctacccgccc ggagccatcc 420

seqs 305_10_anchoa_ST25 ccaacgccct gctgggacag ccccacccyg agcatgagat gctgcggcac cctgtgttcg

480 gtaagcaccc accggactgg acccacacat ctcactgtac aggaggacac sttttagata 540 ttacaaatgt tgtgttgggt catggtctcc attggaccaa tacacagcac taatcaccca

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<213> Engraulis sp.

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<213> Engraulis sp.

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<213> Engraulis sp.

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<213> Engraulis sp.

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<221> mise_feature

<222> (318) .. (318)

<223> n i s a, e, g,

<220>

<221> mise_feature

<222> (327) .. (327)

<223> n i s a, e, g,

<220>

<221> mise_feature

<222> (339) .. (339)

<223> n i s a, e, g,

<220>

<221> mise_feature

<222> (390) .. (390)

<223> n i s a, e, g,

<220>

<221> mise_feature

<222> (399) .. (399)

<223> n i s a, e, g,

<220>

<221> mise_feature

<222> (534) .. (535)

<223> n i s a, e, g,

<220>

<221> mise_feature

<222> (543) .. (543)

<223> n i s a, e, g,

seqs 305_10_anehoa_ST25

or t

or t

or t

or t

or t

or t

or t

or t

or t

or t

or t

or t

or t

or t

seqs 305_10_anehoa_ST25

<400> 13 geaggtgtta etateettea eettttattt ttaeaegaaa eagggtetaa eaaeeeagen

gggeteaatt etgaegeega taaaategea tteeaeeeat aettetetta naaagatetn 120

ttaggntteg eagtaatget getggeneta aeetenetgg eattnttnte neetaaetta 180

ttaggagaee etgataattt taeeeeaget aateeeettg teaeneeaee teatattaag 240

eetgantgnt aetteetett tgettaeget atteteegnt enateeenaa eaaaetaggn 300

ggngtaettg eeeteetntt ttetatneta gttettatng tegtaeetat ettgeaeaee 360

tetaaaeaae gaggaattae ttteegaeen attaegeant teetattetg aaeeettgtt 420

geegaegtea teattettae atgaategga ggtatgeeag tegaaeaeee atteattatt 480

attggteaag tageateget aetetaette tetatyttee ttgtaetage teenntggea 540

ggntgattag agaaeaaage eetaaaetga aaet 574

<210> 14

<211> 460

<212> DNA

<213> Engraulis sp.

<220>

<221> mise_feature

<222> (10) .. (10)

<223> n i s a, e, g, or t

<220>

<221> mise_feature

<222> (41) .. (41)

<223> n i s a, e, g, or t

<220>

<221> mise_feature

<222> (166) .. (166)

<223> n i s a, e, g, or t

<220>

<221> mise_feature

<222> (197) .. (197)

<223> n i s a, e, g, or t

<220>

<221> mise_feature

<222> (217) .. (217)

<223> n i s a, e, g, or t

<220>

<221> mise_feature

<222> (311) .. (311)

<223> n i s a, e, g, or t

<220>

<221> mise_feature

<222> (314) .. (314)

<223> n i s a, e, g, or t

<400> 14 eeaegeeatn gggggtgttg eetteteetg gateatggee netgettgtg eegtgeetee

eetggtegge tggteeegtt aeateeeega gggeatgeag tgetegtgeg gaategaeta 120

etaeaeregt geegaggget teaaeaaega gteetttgte atetanatgt tegtggtgea 180

seqs 305_10_anchoa_ST25

<221> misc_feature

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clon491-F

<400> 20 gccacccatc agaagtacag

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clon491-R

<400> 21 cattgcctca cagtcaaagg

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clonM3EK-F

<400> 22 aatcgaccag acgtgatgtg

<210> 23

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clonM3EK-R

<400> 23 cagagggttt catgtatttc agg

<210> 24

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clon289-F

<400> 24 gcacaatctg tcttttgctt tg

<210> 25

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clon289-R

<400> 25 accaggcttt ccctcagtc

seqs 305_10_anchoa_ST25

seqs 305_10_anchoa_ST25

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clon470-F

<400> 26 atcagcggct cacttcttgt

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clon470-R

<400> 27 gcgattaggg cgtcagactt

<210> 28

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clon357-F

<400> 28 tggggtacat ggggtgtaac

<210> 29

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clon357-R

<400> 29 gcagcatcat cagtaaagca g

<210> 30

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clonM4-F

<400> 30 atggtacggt tgacattagg

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador clonM4-R

seqs 305_10_anchoa_5T25

<400> 31 ccttgttcag gcttgagaac

<210> 32

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial 5equence

<220>

<223> cebador clon483-F

<400> 32 gccccagaaa tatggataag e

<210> 33

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial 5equence

<220>

<223> cebador clon483-R

<400> 33 ccgagccaaa ggaaggtc

<210> 34

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial 5equence

<220>

<223> cebador MT-125-F

<400> 34 cggtaaaact cgtgccag

<210> 35

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial 5equence

<220>

<223> cebador MT-125-R

<400> 35 gcaccttccg gtacactta

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial 5equence

<220>

<223> cebador CATL7-F

<400> 36 ctatggcttt gagggtgagg

<210> 37

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial 5equence

seqs 305_10_anchoa_ST25

<220>

<223> cebador CATL7-R

<400> 37 gagcgagcca gtgagacg 18

<210> 38

<211> 28

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP1, 2-F

<400> 38 tgtcattact aaccttatgt ctgcagtt

<210> 39

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP1, 2-R

<400> 39 ccgaaaagcc ycctcaaatt e

<210> 40

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP3-F

<400> 40 gcccatcaat cttgcagtct gt

<210> 41

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP3-R

<400> 41 ggaaatgatc acatgccaag ca

<210> 42

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP4-F

<400> 42 ggacccacac atctcactgt ac

<210> 43

seqs 305_10_anchoa_ST25

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP4-R

<400> 43 gaccatgacc caacacaaca tttg 24

<210> 44

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP8-F

<400> 44 accctaaagc agaaaacctc tcaaa 25

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP8-R

<400> 45 agctttcgtg ggttctggta 20

<210> 46

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP9-F

<400> 46 ctaccagaac ccacgaaagc t 21

<210> 47

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP9-R

<400> 47 ggttttaagc tggtgctcgt agt

<210> 48

<211> 29

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP11-F

<400> 48 acccattcat tattattggt caagtagca

seqs 305_10_anchoa_ST25

<210> 49

<211> 26

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP11-R

<400> 49 agtttcagtt tagggctttg ttctct

<210> 50

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP5-F

<400> 50 tggtggtctg gtctggtga

<210> 51

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP5-R

<400> 51 ggagacagca caggatgatg ag

<210> 52

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP12-F

<400> 52 gctcgtgcgg aatcgacta

<210> 53

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP12-R

<400> 53 acatgaagtg caccacgaac at

<210> 54

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP13-F

seqs 305_10_anchoa_ST25

<400> 54 tgctgttaaa ttccaaggct tccat

<210> 55

<211> 29

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP13-R

<400> 55 cagaaaaggt tgggaatttc aatatacct

<210> 56

<211> 17

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP6-F

<400> 56 tcagctggcc gattgct

<210> 57

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP6-R

<400> 57 ggttcacaag tggttgagct aca

<210> 58

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP10-F

<400> 58 tggatcgtca agaacaggta atgg

<210> 59

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP10-R

<400> 59 gcactgtgtt gcaattca

<210> 60

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

18 seqs 305_10_anchoa_ST25

<220>

<223> cebador SNP7-F 18

<400> 60 aagccacagg tgcagtca

seqs 305_10_anchoa_ST25

<211> 16

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP14-F

<400> 66 caacgccctg ctggga

<210> 67

<211> 16

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP14-R

<400> 67 ggtgccgcag catete 16

<210> 68

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP18-F

<400> 68 gctgctgaaa agaatggcat ct 22

<210> 69

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP18-R

<400> 69 cttgttcagg cttgagaacg 20

<210> 70

<211> 26

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP17-F

<400> 70 caacaacatg aacatcagca agagat

<210> 71

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador SNP17-R

<400> 71 gcacagtgtg tatctcgatc ca

seqs 305_10_anchoa_ST25

<210> 72

<211> 17

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP1, 2-FAM

<400> 72 ccttacatgg gcactga

<210> 73

<211> 17

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP3-VIC

<400> 73 tggctgtcgt taaccat

<210> 74

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP3-FAM

<400> 74 atggctgtcg ttcaccat

<210> 75

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP4-VIC

<400> 75 aggaggacac gttttaga

<210> 76

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP4-FAM

<400> 76 aggaggacac cttttaga

<210> 77

<211> 14

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP8-VIC

18 seqs 305_10_anchoa_ST25

<400> 77 agaggttgaa accc

<210> 78

<211> 14

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP8-FAM

<400> 78 agaggttaaa accc

<210> 79

<211> 15

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP9-VIC

<400> 79 cctagccgta aactt

<210> 80

<211> 15

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP9-FAM

<400> 80 cctagccata aactt

<210> 81

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP11-VIC

<400> 81 ctagtacaag gaagatagag

<210> 82

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP11-FAM

<400> 82 tagtacaagg aaaatagag

<210> 83

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

seqs 305_10_anchoa_ST25

<220>

<223> Sonda SNP5-VIC

<400> 83 ccttatgccc tcgaactg

<210> 84

<211> 17

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP5-FAM

<400> 84 cttatgcccc cgaactg

<210> 85

<211> 15

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP12-VIC

<400> 85 tcggcacgcg tgtag

<210> 86

<211> 16

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP12-FAM

<400> 86 ctcggcacgt gtgtag

<210> 87

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP13-VIC

<400> 87 aattgctaac tgtataccc

<210> 88

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP13-FAM

<400> 88 aattgctaac tatataccc

<210> 89

18

seqs 305_10_anchoa_ST25

<211> 16

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP6-VIC

<400> 89 cactcactgg ccttag

<210> 90

<211> 17

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP6-FAM

<400> 90 acactcacta gccttag

<210> 91

<211> 16

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP10-VIC

<400> 91 atggcacgaa agcgaa

<210> 92

<211> 16

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP10-FAM

<400> 92 atggcacgaa agtgaa

<210> 93

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP7-VIC

<400> 93 caaattgtga aagagaacc

<210> 94

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP7-FAM

<400> 94 aaattgtgaa aaagaacc

16

seqs 305_10_anchoa_ST25

<210> 95

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP16-VIC

<400> 95 tagagcactg gataatga

<210> 96

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP16-FAM

<400> 96 tagagcactg gttaatga

<210> 97

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP15-VIC

<400> 97 cattgaagaa gtctcatatt a

<210> 98

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP15-FAM

<400> 98 attgaagaag tgtcatatta

<210> 99

<211> 16

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP14-VIC

<400> 99 agccccaccc tgagca

<210> 100

<211> 16

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP14-FAM

16 seqs 305_10_anchoa_ST25

<400> 100 agccccaccc cgagca

<210> 101

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP18-VIC

<400> 101 ttttaaaagg tgcactgaat

<210> 102

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP18-FAM

<400> 102 ttaaaaggtg cactaaat

<210> 103

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP17-VIC

<400> 103 aggagaggct gttttaca

<210> 104

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Sonda SNP17-FAM

<400> 104 aggagaggct attttaca

<210> 105

<211> 29

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> cebador CytBI-7F (Jerome

<400> 105 ctaacccgat tctttgcctt ccacttcct

<210> 106

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

et al., 2003b)

seqs 305_10_anchoa_ST25

<220>

<223> cebador Trucytb-R (Jerome et al., 2003b) 23

<400> 106 ccgacttccg gattacaaga ccg