Método de diagnóstico y/o pronóstico de cáncer de mama.

La presente invención se refiere a un método para el diagnóstico y/o pronóstico de cáncer de mama basado en la determinación del nivel de expresión del factor de transcripción Snail1 en una muestra biológica aislada de un sujeto y en la comparación de los resultados obtenidos con valores de referencia.

Asimismo, la invención contempla el empleo de oligonucleótidos interferentes de Snail1 en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de cáncer de mama, así como las composiciones farmacéuticas basadas en una cantidad terapéuticamente efectiva de dichos oligonucleótidos

Método de diagnóstico y/o pronóstico de cáncer de mama.

Campo de la invención

La presente invención tiene su campo de aplicación dentro del sector sanitario, principalmente aquel relacionado con el cáncer. En concreto está dirigida a métodos de diagnóstico y/o pronóstico del cáncer de mama basados en la determinación del factor de transcripción Snail1.

Antecedentes de la invención

La invasión tumoral local representa la primera etapa de la cascada metastásica de los carcinomas. La invasión de las células de carcinoma requiere cambios profundos en las propiedades migratorias, de polaridad y de adhesión celular de las células tumorales, conocidos colectivamente como transición epitelio-mesénquima (TEM).

La TEM es un proceso principal del desarrollo, que permite la remodelación tisular mediante la alteración de la adhesión celular y permitiendo la migración celular. Pero además, este proceso, esencial para la formación del mesodermo durante la embriogénesis, también lo pueden usar las células tumorales para escapar del entorno de alta presión encontrado en el tumor primario y que se extiende hacia los tejidos distantes formando metástasis (Thiery JP. Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progression. Nat. Rev. Cancer 2002; 2(6): 442-454; Mehlen P. et al. Metastasis: a question of life or death. Nat. Rev. Cancer 2006; 6(6): 449-458).

La pérdida de cadherina-E funcional es un acontecimiento esencial para la TEM, considerándose uno de sus sellos distintivos (Thiery JP. Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progresión. Nat. Rev. Cancer 2002; 2(6): 442-454; Thiery JP. Et al. Complex networks orchestrate epithelial-mesenchymal transitions. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2006; 7(2):131-142). Esta pérdida se detecta en la mayoría de los carcinomas invasivos y metastásicos y su estudio ha conducido a la caracterización de los dos mecanismos moleculares principales implicados en su regulación a la baja: los cambios epigenéticos y la represión de la transcripción (Peinado H. et al. Transcriptional regulation of cadherins during development and carcinogenesis. Int. J. Dev. Biol 2004; 48(5-6):365-375).

En los últimos años se han caracterizado varios represores de la transcripción del gen de cadherina-E. Entre éstos, dos miembros de la familia de dedos de zinc Snail, Snail1 (Snail) y Snail2 (Slug), han surgido como reguladores principales de la TEM durante el desarrollo y progresión tumoral (Thiery JP. et al. Complex networks orchestrate epithelial-mesenchymal transitions. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2006; 7(2):131-142; Peinado H. et al. Snail, Zeb and bHLH factors in tumour progression: an alliance against the epithelial phenotype? Nat Rev Cancer 2007; 7(6):415-428; Nieto MA. The snail superfamily of zinc-finger transcription factors. Nat Rev Mol Cell Biol 2002; 3(3):155-166; Peinado H. et al. Transcriptional regulation of cadherins during development and carcinogenesis. Int. J. Dev. Biol 2004; 48(5-6):365-375), así como en otras patologías, tales como la fibrosis renal (Boutet A. et al. Snail activation disrupts tissue homeostasis and induces fibrosis in the adult kidney. Embo J 2006). Los factores Snail también desempeñan papeles importantes en otros procesos biológicos significativos, incluyendo la regulación del ciclo celular (Vega S. et al. Snail blocks the cell cycle and confers resistance to cell death. Genes Dev 2004; 18(10):1131-1143), la inducción del movimiento y la supervivencia celular (Barrallo-Gimeno A. et al. The Snail genes as inducers of cell movement and survival: implications in development and cancer. Development 2005; 132(14):3151-3161).

La expresión de Snail2 confiere resistencia a la muerte celular inducida por radiación a los progenitores hematopoyéticos (Inoue A. et al. Slug a highly conserved zinc finger transcriptional represor, protects hematopoietic progenitor cells from radiation-induced apoptosis in vivo. Cancer Cell 2002; 2(4):279-288; Perez-Losada J. et al. The radioresistance biological function of the SCF/kit signaling pathway is mediated by the zinc-finger transcription factor Slug. Oncogene 2003; 22(27):4205-4211) mediante la represión de la diana de p53, PUMA, un antagonista de Bcl-2 (Wu WS. et al. Slug antagonizes p53-mediated apoptosis of hematopoietic progenitors by repressing puma. Cell 2005; 123(4): 641-653).

Las células que expresan Snail1 sobreviven a la privación de suero y son resistentes a la apoptosis inducida por los estímulos pro-apoptóticos o mediante agentes genotóxicos (Vega S. et al. Snail blocks the cell cycle and confers resistance to cell death. Genes Dev 2004; 18(10):1131-1143; Kajita M. et al. Aberrant expresión of the transcription factors snail and slug alters the response to genotoxic stress. Molecular and cellular biology 2004; 24(17):7559-7566). La acción completa de Snail1 puede tener un efecto principal sobre el crecimiento, la supervivencia y/o el comportamiento invasivo de las células tumorales, así como en la progresión tumoral (Thiery JP et al. Complex networks orchestrate epithelial-mesenchymal transitions. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2006; 7(2):131-142; Peinado H. et al. Snail, Zeb and bHLH factors in tumour progresión: an alliance against the epithelial phenotype? Nat Rev Cancer 2007; 7(6):415-428; Barrallo-Gimeno A et al. The Snail genes as inducers of cell movement and survival: implications in development and cancer. Development 2005; 132(14):3151-3161).

En base a estos hallazgos, en los documentos ES2161612, ES2161655 y ES2234619 se describe el empleo del factor de transcripción Snail1 como marcador de diagnóstico y de progresión tumoral, mediante la determinación de la capacidad invasiva y metastásica de un tumor epitelial.

Recientemente, se han proporcionado pruebas a favor de un papel principal de Snail1 en la tumorigénesis, puesto que el silenciamiento estable de Snail1 en líneas de células de carcinoma epidérmico de la piel del ratón conduce a un fenotipo más diferenciado y menos invasivo, con una reducción drástica en el potencial del crecimiento tumoral in vivo (Olmeda D. et al. Snail silencing effectively suppresses tumour growth and invasiveness Oncogene 2007; 26(13):1862-1874).

En el caso concreto del cáncer de mama, la expresión de Snail1 y/o de su homólogo Snail2, (Slug) se ha asociado con la represión de cadherina-E en diferentes series de tumores. Sin embargo, no se ha determinado la contribución específica de cualquier factor al avance del cáncer de mama. Así, existen estudios que plantean que Snail2 es el represor esencial de la cadherina-E (Hajra, K.M. et al. The slug zinc-finger protein represses E-cadherin in breast cancer. Cancer. Res. 62, 1613-1618,2002). Estudios posteriores, en carcinomas de mama primarios y metástasis, apoyan el papel de Snail2, junto con Snail1 o por sí solo, en diferentes tipos de diseminación metastásica de carcinomas de mama (Martin TA. et al. Expression of the transcription factors snail, slug and twist and their clinical significance in human breast cancer. Ann Surg Oncol 2005; 12(6):488-496; Elloul S. et al. Snail, slug and Smad-interacting protein 1 as novel parameters of disease aggresiveness in metastatic ovarian and breast carcinoma. Cancer 2005; 103(8):1631-1643) así como la asociación entre la expresión de Snail2 y recurrencia de carcinomas de mama (Come C. et al. Snail and Slug play a distinct roles during breast carcinoma progresión.2006. p 5395-5402).

Asimismo, otros estudios han mostrado la expresión de otros represores de cadherina-E en carcinomas de mama y su asociación con progresión tumoral. El factor Twist, de la familia bHLH, en virtud de su actividad represora sobre cadherina-E, se ha asociado a la capacidad de intravasación y metástasis en un modelo de ratón de carcinoma de mama, y su expresión se ha asociado a carcinomas de mama lobulillares (Yang et al. Twist, a master regulador of morphogenesis, plays an essential role in tumor metastasis. Cell, 117, 927-939, 2004), así como a la capacidad de invasión y angiogénesis (Mironchik et al. Twist overexpression induces in vivo angiogenesis and correlates with chromosomal instability in breast cancer. Cancer Res, 65, 10808-10809,2005) y/o peor pronóstico de carcinomas ductales de mama (Martin TA. et al. Expression of the transcription factors snail, slug and twist and their clinical significance in human breast cancer. Ann Surg Oncol 2005; 12(6):488-496). Por consiguiente, las referencias anteriores evidencian la participación conjunta de Snail1 y otros represores de cadherina-E en la progresión...

1. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de cáncer de mama que comprende:

2. Método, según la reivindicación 1, donde la muestra biológica procede de un tejido tumoral de un paciente con cáncer de mama.

3. Método, según la reivindicación 2, para la evaluación de la capacidad de crecimiento del tumor.

4. Método, según la reivindicación 2, para la evaluación de la capacidad de recurrencia del tumor.

5. Método, según la reivindicación 2, para la evaluación de la capacidad de desarrollo de metástasis local del tumor.

6. Método, según la reivindicación 2, para la evaluación de la capacidad de desarrollo de metástasis a distancia del tumor.

7. Método, según la reivindicación 2, para la evaluación de la capacidad de respuesta del tumor a agentes quimioterapéuticos.

8. Uso de un oligonucleótido interferente de Snail1, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de cáncer de mama.

9. Uso de un oligonucleótido, según la reivindicación 8, donde dicho oligonucleótido es RNA interferente de Snail1.

10. Uso de un oligonucleótido, según la reivindicación 9, donde el RNA es de doble cadena con secuencias SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 2.

11. Uso de un oligonucleótido, según la reivindicación 8, donde dicho oligonucleótido es DNA.

12. Uso de un oligonucleótido, según la reivindicación 11, donde el DNA presenta la secuencia SEQ ID NO 3.

13. Uso de un oligonucleótido, según cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en la preparación de un medicamento destinado a la disminución de la formación de tumores primarios en cáncer de mama.

14. Uso de un oligonucleótido, según cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en la preparación de un medicamento destinado a la disminución de la recurrencia de tumores primarios en cáncer de mama.

15. Uso de un oligonucleótido, según cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en la preparación de un medicamento destinado a la disminución de la capacidad invasiva del tumor en cáncer de mama.

16. Uso de un oligonucleótido, según cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en la preparación de un medicamento destinado a la disminución de la formación de metástasis local en cáncer de mama.

17. Uso de un oligonucleótido, según cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en la preparación de un medicamento destinado a la disminución de la formación de metástasis a distancia en cáncer de mama.

18. Uso de un oligonucleótido, según cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en la preparación de un medicamento destinado al aumento de la sensibilidad a agentes quimioterapéuticos.

19. Uso de un oligonucleótido, según la reivindicación 18, donde los agentes quimioterapéuticos son gemcitabina y docetaxel.

20. Composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un oligonucleótido interferente de Snail1 para su uso en el tratamiento del cáncer de mama.

21. Composición farmacéutica, según la reivindicación 20, donde el oligonucleótido es RNA interferente de Snail1.

22. Composición farmacéutica, según la reivindicación 21, donde el RNA es de doble cadena con secuencias SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 2.

23. Composición farmacéutica, según las reivindicaciones 21 ó 22, donde el oligonucleótido presenta modificaciones que favorecen su estabilidad.

24. Composición farmacéutica, según cualquiera de las reivindicaciones 21-23, que comprende adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.

25. Composición farmacéutica, según la reivindicación 24, donde el vehículo se selecciona entre liposomas, nanopartículas o complejos peptídicos.

26. Composición farmacéutica, según la reivindicación 25, donde las nanopartículas se seleccionan entre quitosanos, polietilenglicol y oligodendrómeros.

27. Composición farmacéutica, según la reivindicación 20, que comprende una secuencia de DNA plasmídico o lineal que comprende la secuencia codificante de la secuencia de un RNA de interferencia de Snail1.

28. Composición farmacéutica, según la reivindicación 27, donde la secuencia de DNA comprende la secuencia SEQ ID NO 3.

29. Composición farmacéutica, según cualquiera de las reivindicaciones 27-28, que comprende adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.

30. Composición farmacéutica, según la reivindicación 29, donde el vehículo se selecciona entre liposomas, nanopartículas, complejos peptídicos o virus.

31. Composición farmacéutica, según la reivindicación 30, donde las nanopartículas se seleccionan entre quitosanos, polietilenglicol y oligodendrómeros.

32. Composición farmacéutica, según la reivindicación 30, donde los virus se seleccionan entre retrovirus, lentivirus, adenovirus, virus asociados a adenovirus o baculovirus.

33. Composición farmacéutica, según la reivindicación 30 donde los complejos peptídicos contienen secuencias de péptidos reconocibles por receptores de células de mama.