Método para el diagnóstico de la fibrosis quística mediante el uso de los niveles de KL-6.

Un método para el diagnóstico de la fibrosis quística, y el método comprende:

medir una cantidad de KL-6 en una muestra de fluido corporal de un sujeto, y

determinar, basándose en la cantidad de KL-6 medida, la presencia o ausencia de fibrosis quística en el sujeto.

Mïtodo para el diagnïstico de la fibrosis quïstica mediante el uso de los niveles de KL-6

Campo tïcnico La presente invenciïn se refiere a un mïtodo para el diagnïstico de la fibrosis quïstica mediante el uso de los niveles de KL-6.

Tïcnica antecedente La fibrosis quïstica (FQ) es el trastorno genïtico que acorta la esperanza de vida mïs habitual entre individuos de raza blanca, con una frecuencia estimada de 1:3.400 nacidos vivos (por ejemplo, vïase Stat Med 1996; 15:449-462) . El factor patogïnico principal de FQ es una mutaciïn en el gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quïstica (por ejemplo, vïase Science 1989; 245:1066-1073) . A pesar de unos avances terapïuticos espectaculares, FQ continïa siendo progresiva, lo que da como resultado una infecciïn pulmonar crïnica y una esperanza de vida acortada. Los estudios previos han demostrado que la funciïn pulmonar deteriorada es el factor pronïstico mïs sensible para los pacientes de FQ (por ejemplo, vïase Am J Respir Crit Care Med 2006; 173:659666, Thorax 2001; 56:746-750, Jama 2001; 286:2683-2689, Eur Respir J 2000; 16:1056-1060, y N Engl J Med 1992; 326:1187-1191) . Los marcadores sïricos sensibles para predecir la funciïn pulmonar deteriorada y el pronïstico pueden ser, por tanto, ïtiles para monitorizar la progresiïn de la enfermedad. Aunque la especificidad de un anïlisis de sangre es limitada, en general, para estudiar la patologïa local en las vïas respiratorias pequeïas de los pacientes de FQ, todavïa puede ser beneficiosa porque la toma de muestras de sangre es mïnimamente invasiva y se puede repetir fïcilmente.

Descripciïn de la invenciïn La presente invenciïn se ha hecho en vista de las circunstancias anteriormente descritas. Proporciona un mïtodo para el diagnïstico de la fibrosis quïstica mediante el uso de un marcador ïtil no invasivo.

Segïn un primer aspecto de la invenciïn, se proporciona un mïtodo para el diagnïstico de la fibrosis quïstica que comprende: medir una cantidad de KL-6 en una muestra de fluido corporal de un sujeto, y determinar, basïndose en la cantidad de KL-6 medida, el grado de presencia de fibrosis quïstica en el sujeto. Es favorable medir la cantidad de KL-6 mediante un ensayo ELISA o un inmunoensayo de electroquimioluminiscencia.

Segïn un segundo aspecto de la invenciïn, se proporciona un mïtodo para determinar la eficacia de un tratamiento de la fibrosis quïstica en un sujeto, y el mïtodo comprende: medir una cantidad de KL-6 en una muestra de fluido corporal del sujeto, y determinar la eficacia del tratamiento en el sujeto basïndose en la cantidad de KL-6 medida.

Descripciïn breve de los dibujos La Figura 1 muestra un grïfico de dispersiïn que muestra una distribuciïn por sexos de los niveles de KL-6 sïrico en 80 sujetos sanos.

La Figura 2 muestra un grïfico de dispersiïn que muestra una distribuciïn por edades de los niveles de KL-6 sïrico en 80 sujetos sanos.

La Figura 3 muestra un grïfico de dispersiïn que muestra la distribuciïn de los niveles de KL-6 sïrico en pacientes con FQ, sujetos sanos no fumadores y sujetos sanos fumadores habituales (fumador hab.) .

La Figura 4 muestra las curvas de caracterïsticas operativas del receptor para KL-6, LDH y CRP para la detecciïn de la fibrosis quïstica.

La Figura 5 muestra diagramas de dispersiïn que muestran la correlaciïn de los niveles de KL-6 sïrico con el % VC predicho.

La Figura 6 muestra diagramas de dispersiïn que muestran la correlaciïn de los niveles de KL-6 sïrico con el % FEV1 predicho.

Descripciïn de la realizaciïn preferida La presente invenciïn se refiere a un mïtodo para el diagnïstico de la fibrosis quïstica mediante el uso de los niveles de KL-6. En particular, la invenciïn se refiere a un mïtodo para determinar la gravedad de la fibrosis quïstica despuïs de medir la cantidad de KL-6 en un fluido corporal de un paciente.

En la presente invenciïn, el tïrmino "etapa" se usa no solamente para una etapa especïfica, sino tambiïn para una etapa que es indistinguible de otras etapas, con tal de que el propïsito o los resultados deseados se puedan conseguir u obtener.

Una primera realizaciïn de la presente invenciïn proporciona un mïtodo para el diagnïstico de la fibrosis quïstica que comprende: medir una cantidad de KL-6 en una muestra de fluido corporal de un sujeto (etapa de mediciïn) ; y determinar, basïndose en la cantidad de KL-6 medida, el grado de presencia de fibrosis quïstica en el sujeto (etapa de determinaciïn) . Es favorable medir la cantidad de KL-6 mediante un ensayo ELISA o un inmunoensayo de electroquimioluminiscencia.

KL-6 es una glicoproteïna similar a mucina con un peso molecular de 200 kd, y se ha clasificado como mucina MUC1 humana (por ejemplo, vïase Int J Cancer, Supl. 1994; 8:6-26) . Se ha informado que KL-6 es un marcador sensible para diversas enfermedades pulmonares intersticiales, que incluyen fibrosis pulmonar idiopïtica (FPI) , neumonitis por radiaciïn, neumonitis inducida por fïrmacos, neumonitis intersticial asociada a enfermedad vascular del colïgeno, alveolitis alïrgica extrïnseca, sarcoidosis pulmonar y proteinosis alveolar pulmonar (por ejemplo, vïase Chest 1989; 96:68-73, Thorax 2003; 58:872-875, Chest 1996; 109:1276-1282, y Am J Respir Crit Care Med 1998; 158:1294-1298) . Ademïs, la importancia pronïstica de KL-6 tambiïn se ha demostrado en pacientes con FPI y neumonitis inducida por fïrmacos con daïo alveolar difuso o patrïn de neumonïa intersticial crïnica (por ejemplo, Thorax 2003; 58:872-875 y Respirology 2006; 11:164-168) . Sin embargo, no se ha investigado la importancia de KL6 sïrico en los pacientes de FQ.

En la etapa de mediciïn del mïtodo de diagnïstico de fibrosis quïstica de la presente invenciïn, se mide la cantidad de KL-6 en una muestra de fluido corporal de un sujeto.

La muestra de fluido corporal es preferiblemente, pero sin limitaciïn, al menos una seleccionada de sangre, plasma, lïquido linfïtico y suero. La preparaciïn de la muestra de fluido corporal no estï limitada en particular, y se puede llevar a cabo mediante mïtodos convencionales.

El mïtodo para medir el KL-6 no estï limitado, con tal de que se pueda medir la cantidad de KL-6 en una muestra de fluido corporal. Se pueden usar los mïtodos habituales para detectar proteïnas, tales como un mïtodo que usa anticuerpos anti-KL-6, cromatografïa de intercambio iïnico, espectrometrïa de masas y similares. Es preferible un mïtodo de mediciïn que use anticuerpos anti-KL-6 en vista de la sensibilidad de detecciïn, especificidad de detecciïn y comodidad de detecciïn. Los anticuerpos anti-KL-6 estïn disponibles comercialmente como componente de equipos para ensayo por inmunoabsorciïn ligado a enzimas (ELISA) o inmunoensayo de electroquimioluminiscencia (ECL) para detectar KL-6, tales como Picolumi KL-6 o Eitest KL-6, fabricados por Sanko Junyaku, Tokio, Japïn.

En una realizaciïn preferida de la presente invenciïn, la mediciïn del nivel de KL-6 se puede llevar a cabo mediante un inmunoensayo que incluye el uso de anticuerpos anti-KL-6 y anticuerpos marcados.

El inmunoensayo se puede llevar a cabo mediante cualquier ensayo convencional sin ninguna limitaciïn particular. Los ejemplos del inmunoensayo incluyen el ensayo por inmunoabsorciïn ligado a enzimas (ELISA) , inmunoensayo de quimioluminiscencia, inmunoensayo de electroquimioluminiscencia (ECL) , ensayo de absorciïn, una tïcnica con anticuerpos fluorescentes, radioinmunoensayo (RIA) , resonancia de plasmones superficiales, transferencia de Western, transferencia puntual y similares. En la presente invenciïn, son preferibles el ensayo por inmunoabsorciïn ligado a enzimas (ELISA) o el inmunoensayo de electroquimioluminiscencia (ECL) en vista de la sensibilidad de detecciïn, especificidad de detecciïn y comodidad de detecciïn. Los equipos para ELISA o ECL para detectar KL-6 estïn disponibles comercialmente, por ejemplo, como Picolumi KL-6 o Eitest KL-6, fabricados por Sanko Junyaku, Tokio, Japïn.

Se puede usar cualquier agente marcador conocido ("un marcador") para marcar anticuerpos y materiales en las realizaciones de la presente invenciïn sin ninguna limitaciïn particular. Los ejemplos del marcador incluyen enzimas, materiales quimioluminiscentes, materiales electroquimioluminiscentes, materiales radiactivos y similares. En la presente invenciïn, las enzimas son preferibles como marcador en vista de la sensibilidad de detecciïn y comodidad de detecciïn.

Las enzimas se pueden usar sin ninguna limitaciïn particular, con tal de que se pueda llevar a cabo una detecciïn cuantitativa mediante un procedimiento fïsico o quïmico. Los ejemplos de las enzimas... [Seguir leyendo]

1. Un mïtodo para el diagnïstico de la fibrosis quïstica, y el mïtodo comprende: medir una cantidad de KL-6 en una muestra de fluido corporal de un sujeto, y determinar, basïndose en la cantidad de KL-6 medida, la presencia o ausencia de fibrosis quïstica en el sujeto.

2. El mïtodo segïn la reivindicaciïn 1, en el que la cantidad de KL-6 se mide mediante un ensayo ELISA o un inmunoensayo de electroquimioluminiscencia.

3. El mïtodo segïn la reivindicaciïn 1, que comprende ademïs determinar el grado de gravedad de la fibrosis quïstica en el sujeto basïndose en la cantidad de KL-6 medida.

4. Un mïtodo para determinar la eficacia de un tratamiento de fibrosis quïstica en un sujeto, y el mïtodo 10 comprende:

medir una cantidad de KL-6 en una muestra de fluido corporal del sujeto tratado, y determinar la eficacia del tratamiento en el sujeto basïndose en la cantidad de KL-6 medida.

Figura 1

Grupos de edad (aïos)

Figura 3

1. Especificidad (%)

Figura 5