Un método de identificación de si un individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave,

comprendiendo dicho método medir la proteína de unión a heparina (HBP) en una muestra de fluido tomada del individuo y de este modo determinar si el individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave.

Método de diagnóstico.

Campo de la invención La invención se refiere al diagnóstico de la susceptibilidad a y a la prevención del desarrollo de una septicemia grave.

Antecedentes de la invención

La septicemia es una respuesta inflamatoria sistémica a una infección, que causa insuficiencia orgánica y muerte en casos graves. Es una causa cada vez más común de morbilidad y mortalidad, particularmente en personas mayores, individuos inmunocomprometidos y críticamente enfermos. Se ha descrito que la septicemia es la causa más común de muerte en la unidad de cuidados intensivos no coronarios (Bone RC et al; Chest. 1992 Jun; 101 (6) : 1644-55) . Se produce en el 1-2% de todas las hospitalizaciones, y las tasas de mortalidad varían del 20% para septicemia al 40% para septicemia grave, hasta >60% para el choque séptico (una subcategoría de la septicemia grave) (Leibovici; Ann lntern Med 1991; 114 (8) : 703, Martin et al; N Engl J Med. 17 abr 2003; 348 (16) : 1546-54) .

La definición clínica de septicemia es la presencia de dos o más de las condiciones siguientes:

(1) fiebre (temperatura >38ºC) o hipotermia (temperatura <36ºC) ;

(2) frecuencia cardiaca >90 latidos por minuto;

(3) frecuencia respiratoria >20 respiraciones por minuto o PaCO2 <32 mm Hg; y

(4) recuento de glóbulos blancos >12 (x 109 células/l) o <4 (x 109 células/l) ,

al mismo tiempo que una enfermedad confirmada o sospechada.

Las condiciones (1) a (4) se conocen como los criterios del SIRS (Síndrome de Respuesta Inflamatoria Grave) (Bone RC et al; Chest. 1992 Jun; 101 (6) : 1644-55) y son una norma internacional reconocida para el diagnóstico de una inflamación grave. Un individuo que presente dos o más de los criterios del SIRS sin una infección confirmada o sospechada se clasifica como que tiene un SIRS no asociado a infección.

La definición clínica de septicemia grave es septicemia, como se ha definido anteriormente, asociada con una hipotensión inducida por septicemia, disfunción orgánica o anomalías de la perfusión. La hipotensión inducida por septicemia se define como una presión arterial sistólica de <90 mm Hg o una reducción de <40 mm Hg desde la medida basal en ausencia de otras causas de hipotensión. Las anomalías de la perfusión pueden incluir, pero sin limitación, hipoperfusión, acidosis láctica, oliguria o una alteración aguda en el estado mental. La septicemia grave incluye como subcategoría el estado de choque séptico. Este estado está definido específicamente por la presencia de hipotensión inducida por septicemia a pesar de una reanimación con fluidos adecuada, junto con la presencia de anomalías de la perfusión. Los individuos que están recibiendo agentes inotrópicos o vasopresores pueden no estar hipotensos en el momento en que se miden las anomalías de la perfusión.

Para el tratamiento de la septicemia grave, el diagnóstico antes del inicio de los síntomas más graves (hipotensión, disfunción orgánica o hipoperfusión) con la instauración de un tratamiento adecuado es de suma importancia para un desenlace exitoso (Rivers E et al. N Engl J Med 2001; 345 (19) : 1368-77) . Por ejemplo, Kumar et al demostraron que la mortalidad estaba correlacionada con el número de horas pasadas desde el inicio de la hipotensión inducida por septicemia antes de que se administrara el primer tratamiento (Kumar et al. Crit Care Med 2006; 34 (6) : 1589-96) . Es necesario un marcador biológico o clínico fiable para determinar tan pronto como sea posible si un individuo está en riesgo de desarrollar una septicemia grave para minimizar el retraso antes de la instauración del tratamiento.

Sumario de la invención

La proteína de unión a heparina (HBP, CAP37, Azurocidina) es un homólogo de serina proteasa inactivo de 37 kDa glicosilado, de cadena sencilla y cargado negativamente que presenta una identidad de secuencia del 44% con la elastasa de neutrófilos humana. La estructura tridimensional de la HBP se ha publicado (Iversen et al Nat Struct Biol. 1997 Abr; 4 (4) : 265-8) . Está contenida en los gránulos azurófilos de los neutrófilos humanos (Lindmark et al, J Leukoc Biol 1999; 66 (4) : 634-43) . Es una proteína multifuncional que se ha demostrado que induce filtraciones vasculares por alteración del equilibrio de Ca2+ del citoesqueleto de los vasos sanguíneos (Gautam et al, Nature Medicine 2001; 7 (10) : 1123-7) . La proteína M de los estreptococos de grupo A (GAS) en complejo con el fibrinógeno se ha demostrado que induce la liberación de HBP por estimulación del receptor de integrina B2 de los neutrófilos (Herwald et al, Cell 2004; 116 (3) : 367-79) . El LPS también puede inducir la liberación de HBP mediante un mecanismo desconocido (Rasmussen et al, FEBS Lett 1996; 390 (1) : 109 12) . La secuencia de HBP está disponible públicamente (por ejemplo, como nº de acceso del NCBI NP_001691 REGIÓN: 27..248) y se reproduce a continuación como SEC ID Nº: 1

SEC ID Nº: 1

Los niveles de HBP en individuos que presentan uno o más de los criterios del SIRS no se han investigado previamente. Los inventores han demostrado por primera vez que los niveles de HBP están aumentados en individuos que posteriormente desarrollan una septicemia grave. Los niveles de HBP están elevados hasta 12 horas antes de que se registre la hipotensión inducida por septicemia, pero disminuyen rápidamente si se instaura una terapia. Los inventores también han demostrado por primera vez que la proporción de HBP/recuento de glóbulos blancos (WBC) está elevada en individuos que posteriormente desarrollan una septicemia grave.

De acuerdo con la invención, se proporciona por lo tanto un método de identificación de si un individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave, comprendiendo dicho método medir la HBP en una muestra de fluido tomada del individuo, y de este modo determinar si el individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave.

El método de la invención puede comprender además medir el WBC o el recuento de neutrófilos (NC) en un individuo, calcular la proporción de HBP/WBC o la proporción de HBP/NC, respectivamente, y de este modo determinar si el individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave.

El método de la invención puede comprender por lo tanto medir la HBP en un individuo y calcular el nivel de HBP/WBC o la proporción de HBP/NC en un individuo, y de este modo determinar si el individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave.

La invención proporcionar además:

- uso in vitro de un anticuerpo específico de HBP o fragmento del mismo capaz de unirse a HBP para determinar si un individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave;

- un kit de ensayo que comprende un anticuerpo específico de HBP o fragmento del mismo capaz de unirse a HBP y medios para la medición del WBC en un individuo.

También se describe un método de reducción del riesgo de que un individuo desarrolle una septicemia grave, que comprende:

(i) determinar si un individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave usando un método de la invención; y

(ii) administrar a un individuo identificado en (i) como en riesgo una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente adecuado para el tratamiento de una infección y/o de fluidos intravenosos.

Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra la concentración de HBP (Figura 1a) , las proporciones de HBP/WBC (Figura 1b) , los niveles de CRP (Figura 1c) , los niveles de IL-6 (Figura 1d) y los niveles de lactato (Figura 1e) en el grupo de septicemia grave (n = 51) , el grupo de septicemia (n = 95) , el grupo de infección sin SIRS (n = 44) y el grupo de SIRS sin infección (n = 12) . Línea dentro del recuadro: mediana; bordes del recuadro: cuartiles (Q1, Q3) ; patillas: intervalo de valores: x y o: valores atípicos identificados por número de paciente. Las líneas que representan los valores de corte para el nivel de HBP de 20 ng/ml y la proporción de HBP/WBC de 2 para las Figuras 1a y 1b, respectivamente.

La Figura 2 muestra una curva de ROC para el nivel de HBP y/o la proporción de HBP/WBC, el nivel de HBP, la proporción de HBP/WBC, el lactato, el recuento de glóbulos blancos, CRP e IL-6. La línea recta de 0, 0 a 1, 1 es una línea de referencia. Los segmentos diagonales están producidos por vínculos.

La Figura 3 muestra la proporción de HBP/WBC (Figura 3a) o la concentración de HBP (Figura 3b) para cada individuo (n =... [Seguir leyendo]

1. Un método de identificación de si un individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave, comprendiendo dicho método medir la proteína de unión a heparina (HBP) en una muestra de fluido tomada del individuo y de este modo determinar si el individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además medir el recuento de glóbulos blancos (WBC) o el recuentro de neutrófilos (NC) en una muestra de sangre tomada del individuo, calcular la proporción de HBP/WBC o la proporción de HBP/NC, respectivamente, y de este modo determinar si el individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que determinar si el individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave comprende determinar si la concentración de HBP es o no superior a 15 ng/ml o 20 ng/ml en la muestra de fluido.

4. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el nivel o concentración de HBP en la muestra de fluido está aumentado al menos 2, 5 veces respecto al nivel o concentración basal de HBP.

5. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, en el que cuando la concentración de HBP en una muestra de fluido se mide en ng/ml y el WBC en la muestra de sangre se mide en número de células x 109/l, determinar si el individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave comprende determinar si la proporción de HBP/WBC es o no superior a 2.

6. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la proporción de HBP/WBC o la proporción de HBP/NC en la muestra de sangre está aumentada al menos 2, 5 veces respecto a la proporción de HBP/WBC o la proporción de HPB/NC basal, respectivamente.

7. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el individuo es sospechoso de estar en riesgo de desarrollar una septicemia grave.

8. Un método de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el individuo tiene una infección confirmada o sospechada y/o presenta uno o más de los criterios del Síndrome de Respuesta Inflamatoria Grave (SIRS) .

9. Un método de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el individuo tiene una infección confirmada o sospechada y/o presenta dos o más de los criterios del SIRS.

10. Un método de acuerdo con la reivindicación 8 ó 9, en el que la infección confirmada o sospechada afecta a: los pulmones; el tracto respiratorio; el hígado; los riñones; el tracto urinario; la piel (cutánea y subcutánea) ; el corazón; el estómago; los intestinos; la sangre; los huesos; las articulaciones o cualquier combinación de los mismos.

11. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en el que el individuo: está inmunocomprometido; es diabético; es un paciente hospitalizado con una vía intravenosa, una herida quirúrgica, un drenaje quirúrgico o una escara de decúbito; o cualquier combinación de los mismos.

12. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el individuo es un mamífero.

13. El método de la reivindicación 12, en el que el mamífero es un ser humano.

14. Uso in vitro de un anticuerpo específico de HBP o fragmento del mismo capaz de unirse a HBP para determinar si un individuo está o no en riesgo de desarrollar una septicemia grave.