MÉTODO DE DIAGNÓSTICO DEL CÁNCER DE MAMA.

La presente invención se refiere a métodos para detectar y diagnosticar el cáncer de mama así como métodos para tratar y prevenir el cáncer de mama y la metástasis del cáncer de mama. El cáncer de mama, una enfermedad genéticamente heterogénea, es la malignidad más habitual en mujeres. Se ha indicado un cálculo de aproximadamente de 800.000 nuevos casos cada año en todo el mundo (Parkin DM, Pisani, P, Ferlay J (1999). CA Cancer J Clin 49: 33-64). La mastectomía es la primera opción concurrente para el tratamiento de esta enfermedad. A pesar de la extracción quirúrgica de los tumores primarios, puede producirse la reincidencia en sitios locales o distantes debido a micrometástasis indetectable (Saphner T, Tommey DC, Gray R (1996). J Clin Oncol, 14, 2738-2749) en el momento del diagnóstico. Normalmente se administran agentes citotóxicos como terapia adyuvante después de cirugía con objeto de destruir estas células residuales o premalignas. El tratamiento con agentes quimioterapéuticos convencionales es con frecuencia empírico y se basa principalmente en parámetros tumorales histológicos y sin conocimiento del mecanismo específico. Por lo tanto los fármacos dirigidos a dianas se convierten en el tratamiento base para el cáncer de mama. Los inhibidores tamoxifen y aromatasa, dos representantes de este tipo, han demostrado tener enormes respuestas usados como adyuvantes o como quimioprevención en pacientes con cáncer de mama metastatizado (Fisher B, Costantino JP, Wickerham DL, Redmon CK, Kavanah M, Cronin WM, Vogel V, Robidoux A, Dimitrov N, Atkins J, Daly M, Wieand S, Tan-Chiu E, Ford L, Wolmark N (1998). J. Natl Cancer Inst, 90, 1371-1388; Cuzick J (2002). Lancet 360, 817-824). Sin embargo, el inconveniente es que solamente los pacientes que expresan receptores de estrógenos son sensibles a estos fármacos. Se plantearon incluso recientes cuestiones en cuanto a sus efectos secundarios particularmente sobre la posibilidad de producir cáncer endometrial durante el tratamiento prolongado de tamoxifen así como efectos perjudiciales de fracturas óseas en mujeres posmenopáusicas en pacientes a las que se prescribió aromatasa (Coleman RE (2004). Oncology 18 (5 Suppl. 3), 16-20). Debido a la aparición de efectos secundarios y resistencia a fármacos, obviamente es necesario buscar nuevas dianas moleculares para fármacos eficaces selectivos basándose en mecanismos de acción caracterizados. El cáncer de mama es una enfermedad compleja asociada con numerosos cambios genéticos. Se sabe poco acerca de si estas anomalías son la causa de tumorigénesis de mama, aunque se ha indicado que se producen por un proceso multietapa que puede equipararse ampliamente a la transformación de células normales, mediante las etapas de hiperplasia ductal atípica, carcinoma ductal in situ (DCIS) y carcinoma ductal invasivo (IDC). Existen pruebas de que sólo una parte de las lesiones premalignas progresan obligatoriamente hacia cáncer invasivo mientras que las otras lesiones experimentan regresión espontánea. Esta explicación de participación molecular, que conduce al desarrollo de cáncer de mama primario, su progresión, y su transformación de metástasis, es el enfoque principal para nuevas estrategias dirigidas a la prevención y tratamiento. Los perfiles de expresión de genes generados por análisis de micromatriz de ADNc pueden proporcionar bastantes más detalles acerca de la naturaleza de cánceres individuales que los métodos histopatológicos tradicionales son capaces de proporcionar. Lo prometedor de dicha información se basa en su potencial para mejorar estrategias clínicas para el tratamiento de enfermedades neoplásicas y desarrollo de nuevos fármacos (Petricoin, E. F., 3ª., Hackett, J. L., Lesko, L. J., Puri, R. K., Gutman, S.L., Chumakov, K., Woodcock, J., Feigal, D. W., Jr., Zoon, K. C., y Sistare, F. D. Medical applications of microarray Technologies: a regulatory science perspective. Nat Genet, 32 Suplem: 474-479, 2002). Para esto, los autores de la presente invención han analizado los perfiles de expresión de tumores o tumores procedentes de diferentes tejidos por micromatrices de ADNc (Okabe, H. et al., Genome-wide analysis of gene expression in human hepatocellular carcinomas using cDNA microarray: identification of genes envolved in viral carcinogenesis and tumor progression. Cancer Res, 61: 2129-2137, 2001; Hasegawa, S. et al., Genome-wide analysis of gene expression in intestinal-type gastric cancers using a complementary DNA microarray representing 23.040 genes. Cancer Res, 62: 7012-7017, 2002.; Kaneta, Y. et al., y Ohno, R. Prediction of Sensitivity to STI571 among Chronic Myeloid Leukemia Patiens by Genome-wide cDNA Microarray Analysis. Jpn J Cancer Res, 93: 849-856, 2002.; Kaneta, Y. et al., Genome-wide analysis of gene-expression profiles in chronic myeloid leukemia cells using a cDNA microarray. Int J Oncol, 23: 681-691, 2003.; Kitahara, O. et al., Alterations of gen expression during colorectal carinogenesis revealed by cDNA microarrays after laser-capture microdissection of tumor tissued and normal epithelia. Cancer Res, 61, 3544-3549, 2001.; Lin, Y. et al., Molecular diagnosis of colorectal tumors by expression profiles of 50 genes expressed differentially in adenomas and carcinomas. Oncogene, 21: 4120-4128, 2002; Nagayama, S. et al., Genome-wide analysis of gene expression in synovial sarcomas using a cDNA microarray. Cancer Res, 62: 5859-5866, 2002.; Okutsu, J. et al., Prediction of chemosensitivity for patients with acute myeloid leukemia, according to expression levels of 28 genes selected by genome-wide complementary DNA microarray analysis. Mol Cancer Ther, 1: 1035-1042, 2002; Kikuchi, T. et al., Expression profiles of non-small cell lung cancers on cDNA microarrays: identification of genes for prediction of lymph-node metastasis and sensitivity to anti-cancer drugs. Oncogen, 22: 2192-2205, 2003). Exámenes recientes en los niveles de expresión de miles de genes, mediante el uso de micromatrices de ADNc, han dado como resultado el descubrimiento de modelos diferentes en tipos diferentes de cáncer de mama (Sgroi, D. C. 2 ES 2 365 732 T3 et al., In vivo gene expression profile analysis of human breat cancer progresión. Cancer Res, 59: 5656-5661, 1999; Sorlie, T. et al., Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclases with clinical implications. Proc Natl Acad Sci U S A, 98: 10869-10874, 2001.; Kauraniemi, P. et al., New amplified and highly expressed genes discovered in the ERBB2 amplicon in breast cancer by cDNA microarrays. Cancer Res, 61: 8235-8240, 2001.; Gruvberger, S. et al., S. Estrogen receptor status in breast cancer is associated with remarkably distinct gene expression patterns. Cancer Res, 61: 5979-5984, 2001.; Dressman, M. et al., Gene expression profiling detects gene amplification and differentiates tumor types in breast cancer. Cancer Res, 63: 2194-2199, 2003). Estudios en perfiles de expresión de genes en cánceres de mama han dado como resultado la identificación de genes que pueden servir como candidatos para marcadores de diagnóstico o perfiles de pronóstico. Sin embargo, estos datos, derivados principalmente de masas tumorales, no pueden reflejar adecuadamente cambios de expresión durante la carcinogénesis de mama, porque las células del cáncer de mama existen como una masa sólida con una reacción altamente inflamatoria y contienen diversos componentes celulares. Por lo tanto, es probable que datos de micromatrices publicados anteriormente reflejen perfiles heterogéneos. Estudio diseñados para revelar mecanismos de carcinogénesis ya han facilitado la identificación de dianas moleculares para determinados agentes antitumorales. Por ejemplo, inhibidores de farnesiltransferasa (FTI) que se han desarrollado originalmente para inhibir la ruta de señalización del crecimiento relacionada con Ras, cuya activación depende de la farnesilación post-traduccional, han mostrado ser eficaces en el tratamiento de tumores dependientes de Ras en modelos animales (He et al, Cell 99: 335-45 (1999)). De manera similar, ensayos clínicos en seres humanos usando una combinación de fármacos anticancerosos y el anticuerpo monoclonal anti-HER2, trastuzumab, con el objetivo de antagonizar el receptor del protooncogén HER2/neu, han conseguido respuesta clínica mejorada y supervivencia global de pacientes con cáncer de mama (Lin et al., Cancer Res 61: 6345-9 (2001)). Por último, se ha desarrollado un inhibidor de tirosina quinasa, STI-571, que inactiva selectivamente proteínas de fusión bcr-abl, para tratar leucemias mielógenas crónicas en las que la activación constitutiva de la tirosina quinasa bcr-abl desempeña un papel crucial en la transformación de leucocitos. Agentes de estos tipos se diseñan para suprimir la actividad oncogénica de productos génicos específicos (Fujita et al., Cancer res 61: 7722-6... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento in vivo de diagnóstico de carcinoma ductal invasivo (IDC) o una predisposición para desarrollar IDC en un sujeto, que comprende determinar un nivel de expresión de un gen asociado al cáncer de mama en una muestra biológica derivada de un paciente, en el que un aumento en dicho nivel de expresión de la muestra en comparación con un nivel de control normal de dicho gen indica que dicho sujeto padece o está en riesgo de desarrollar IDC, en el que dicho gen asociado al cáncer de mama es BRC nº 456. 2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho nivel de expresión de la muestra es al menos un 10% superior a dicho nivel de control normal. 3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el nivel de expresión del gen se determina mediante un procedimiento seleccionado del grupo que consiste en: (a) detectar el ARNm de BRC nº 456, (b) detectar la proteína codificada por BRC nº 456, y (c) detectar una actividad quinasa de la proteína codificada por BRC nº 456. 4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que dicha detección se realiza en una matriz de ADN. 5. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicha muestra biológica derivada del paciente comprende (a) una célula epitelial; (b) una célula IDC; o (c) una célula epitelial de tejido que se sabe o se sospecha que es un IDC. 6. Un procedimiento para la exploración de un compuesto para el tratamiento o prevención de IDC, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de: (a) poner en contacto un compuesto de ensayo con el polipéptido codificado por BRC nº 456; y (b) detectar la actividad de unión entre dicho polipéptido y dicho compuesto de ensayo. 7. Un procedimiento para la exploración de un compuesto para el tratamiento o prevención de IDC, comprendiendo dicho método las etapas de: poner en contacto un compuesto candidato con una célula que exprese BRC nº 456; y determinar el nivel de expresión de BRC nº 456. ES 2 365 732 T3 8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que dicha célula es una célula IDC. 9. Un procedimiento para la exploración de un compuesto para el tratamiento o prevención de IDC, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de: (a) poner en contacto un compuesto de ensayo con el polipéptido codificado por BRC nº 456; (b) detectar la actividad quinasa del polipéptido de la etapa (a). 10. El uso de una secuencia de nucleótidos complementaria a la secuencia codificante de BRC nº 456 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de IDC en un sujeto. 11. El uso de una composición de ARNip, que reduzca la expresión de BRC nº 456 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de IDC en un sujeto. 12. El uso de la reivindicación 11, en el que el ARNip comprende la cadena con sentido que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de nucleótidos de la SEC ID Nº: 25, 28 y 31 como la secuencia diana. 13. Una composición farmacéutica que comprende el ARNip contra BRC nº 456, en el que dicho ARNip comprende la cadena con sentido que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de nucleótidos de la SEC ID Nº: 25, 28 y 31 como la secuencia diana para su uso en el tratamiento o prevención de IDC. 14. Una molécula bicatenaria que comprende una cadena con sentido y una cadena antisentido, en el que la cadena con sentido comprende una secuencia de ribonucleótidos correspondiente a una secuencia diana que consiste en la SEC ID Nº: 25, 28 y 31 y en el que la cadena antisentido comprende una secuencia de ribonucleótidos 74 ES 2 365 732 T3 que es complementaria a dicha cadena con sentido, en el que dicha cadena con sentido y dicha cadena antisentido hibridan entre sí para formar dicha molécula bicatenaria para su uso en el tratamiento o prevención de IDC. 15. La molécula bicatenaria de la reivindicación 14, que tiene la fórmula general seleccionada del grupo que consiste en: (a) gaacgauauaaagccagcc-[B]-ggcuggcuuuauaucguuc, (b) cuggaugaaucauaccaga-[B]-ucugguaugauucauccag, y (c) guguggcuugcguaaauaa-[B]-uuauuuacgcaagccacac, en el que [B] es una secuencia en bucle de ribonucleótidos que consiste en 3 a 23 nucleótidos. ES 2 365 732 T3 76 ES 2 365 732 T3 77 ES 2 365 732 T3 78 ES 2 365 732 T3 79 ES 2 365 732 T3 ES 2 365 732 T3 81 ES 2 365 732 T3 82 ES 2 365 732 T3 83 ES 2 365 732 T3 84 ES 2 365 732 T3 ES 2 365 732 T3 86 ES 2 365 732 T3 87 ES 2 365 732 T3 88