METODO DE AMPLIFICACION DE REPETICIONES TERMINALES.
LA INVENCION SE REFIERE A UN PROCESO PARA AMPLIFICAR UNA SECUENCIA ESPECIFICA DE ACIDO NUCLEICO O SU COMPLEMENTO A UNA TEMPERATURA RELATIVAMENTE CONSTANTE Y SIN ADICION EN SERIE DE REACTIVOS.
EL PROCESO REQUIERE AÑADIR A UN MEDIO DE REACCION UNICO UNA ARN POLIMERASA, UNA ADN POLIMERASA, UNA RIBONUCLEASA QUE HIDROLICE EL ARN DE UN HIBRIDO ARN-ADN SIN HIDROLIZAR ARN O ADN DE UNA O DOS HEBRAS, RIBONUCLEOSIDOS Y DESOXIRRIBONUCLEOSIDOS TRIFOSFATOS. EL PROCESO PROPORCIONA UNA PRIMERA PLANTILLA DE ARN EN EL MEDIO DE REACCION. ESTA PRIMERA PLANTILLA DE ARN CONTIENE UNA SECUENCIA COMPLEMENTARIA DE UNA SECUENCIA ESPECIFICA DE ACIDO NUCLEICO, LAS SECUENCIAS INVERTIDAS CORRESPONDIENTES AL PROMOTOR Y EL LUGAR DE INICIACION QUE SON REORGANIZADAS POR LA ARN POLIMERASA, Y UNA SECUENCIA 5 - TERMINAL QUE ES COMPLEMENTARIA DE AL MENOS LA SECUENCIA INVERTIDA DEL LUGAR DE INICIACION. ASI, LA PRIMERA PLANTILLA DE ARN TIENE UNA SECUENCIA REPETIDA INVERTIDA QUE PUEDE PLEGARSE PARA FORMAR UNA ESTRUCTURA DE BUCLE EN EL TERMINAL 5 . LA ADN POLIMERASA UTILIZA LA PRIMERA PLANTILLA DE ARN PARA SINTETIZAR UNA SEGUNDA PLANTILLA DE ADN QUE EN CONJUNTO FORMAN UN HIDRIDO ARN-ADN. LA SEGUNDA PLANTILLA DE ADN CONTIENE UNA SECUENCIA NORMAL DEL PROMOTOR Y DEL LUGAR DE INICIACION. LA RIBONUCLEASA HIDROLIZA EL ARN QUE CONTIENE EL HIBRIDO DE ARN-ADN, PERMITIENDO QUE LA SECUENCIA DE CEBADO EN EL TERMINAL 3 PUEDA HIBRIDARSE CON LA SECUENCIA NORMAL DEL LUGAR DE INICIACION EN LA SEGUNDA PLANTILLA DEL ADN. SEGUIDAMENTE, LA ADN POLIMERASA UTILIZA LA SEGUNDA PLANTILLA DE ADN PARA SINTETIZAR EL PROMOTOR AMPLIANDO LA SECUENCIA DE CEBADO DEL TERMINAL 3 ARCIALMENTE DE DOBLE HEBRA, TIENE UN PROMOTOR ORIENTADO HACIA EL EXTREMO DE LA ESTRUCTURA EN BUCLE. LA ARN POLIMERASA RECONOCE ENTONCES AL PROMOTOR Y TRANSCRIBE LA SEGUNDA PLANTILLA DE ADN, CREANDO ASI COPIAS DE LA PRIMERA PLANTILLA DE ARN. EL PROCESO A PARTIR DE AQUI MANTIENE LAS CONDICIONES DE REACCION DURANTE UN TIEMPO SUFICIENTE PARA CONSEGUIR LA AMPLIFICACION DESEADA DE LA SECUENCIA ESPECIFICA DE ACIDO NUCLEICO O SU COMPLEMENTO. ESTA INVENCION INCLUYE UN JUEGO DE REACTIVOS.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: AKZO NOBEL N.V..
Nacionalidad solicitante: Países Bajos.
Dirección: VELPERWEG 76,6824 BM.
Inventor/es: SOOKNANAN, ROY, MALEK, LAWRENCE.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 28 de Noviembre de 1995.
Fecha Concesión Europea: 4 de Octubre de 2001.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Mónaco, Irlanda, Oficina Europea de Patentes, Kenya, Lesotho, Malawi, Sudán, Uganda, Burkina Faso, Benin, República Centroafricana, Congo, Costa de Marfil, Camerún, Gabón, Guinea, Malí, Mauritania, Niger, Senegal, Chad, Togo, Organización Regional Africana de la Propiedad Industrial, Swazilandia, Organización Africana de la Propiedad Intelectual.
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