Un método para determinar un tamaño de un foco metastásico, que comprende las etapas de:

cuantificar ARNm de citoqueratina 19 en una muestra de ensayo preparada a partir de un ganglio linfático, yobtener un tamaño de un foco metastásico en el ganglio linfático en base al resultado de cuantificación del ARNm.

Método y aparato para determinar el tamaño de un foco metastásico

5 Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método y un aparato para determinar metástasis cancerosa contenida en un ganglio linfático.

Antecedentes

Para determinar en qué medida un cáncer ha metastatizado al tejido de un ganglio linfático, generalmente se realiza un diagnóstico tisular. En un diagnóstico tisular, el tejido de un ganglio linfático se corta finamente para preparar una sección, una célula cancerosa en la sección se tiñe usando un anticuerpo marcado que se une específicamente a

una célula cancerosa, y un grado de metástasis cancerosa se mide mediante microscopia de ésta. Sin embargo, dado que es necesaria mucha habilidad para un ensayo, el ensayo depende en gran medida de los conocimientos técnicos del operador del ensayo, y es difícil obtener un resultado de la determinación del objetivo.

Como método para determinar la metástasis de una célula cancerosa a un ganglio linfático, por ejemplo, se conoce el método descrito en el documento JP2006053113. El documento JP2006053113 describe un método para diagnosticar metástasis de adenocarcinoma pulmonar a un ganglio linfático. Específicamente, se preparan una sección de tejido de pulmón de un paciente con metástasis a los ganglios linfáticos y una sección de tejido de pulmón de un paciente sin metástasis a los ganglios linfáticos como muestras, y una molécula útil como marcador de diagnóstico de metástasis se identifica midiendo una cantidad de expresión de diversas moléculas. Además, existe

la descripción de que, usando esta molécula, es posible diagnosticar metástasis de un cáncer de pulmón a un ganglio linfático en un paciente con adenocarcinoma pulmonar. Sin embargo, esta técnica no puede determinar en qué medida ha metastatizado un cáncer a un ganglio linfático.

Se conocen métodos y aparatos para la amplificación de ácidos nucleicos, incluyendo, por ejemplo, la amplificación de ARNm de CK19, por ejemplo del documento EP 1 813 682. Dichos métodos y aparatos se describen en el contexto específico de metástasis de un tumor maligno, por ejemplo en el documento EP 1 867 735.

Resumen

El alcance de la presente invención se define exclusivamente mediante las reivindicaciones adjuntas, y no resulta afectado en ninguna medida por las afirmaciones en este resumen.

Un objeto de la presente invención es proporcionar un método que puede determinar objetivamente en qué medida ha metastatizado un cáncer a un ganglio linfático.

La presente invención proporciona un método para determinar un tamaño de un foco metastásico, que comprende una etapa de cuantificar un ARNm de citoqueratina 19 en una muestra de ensayo preparada a partir de un ganglio linfático sospechoso de metástasis de una célula cancerosa, y una etapa de obtener un tamaño de un foco metastásico en el ganglio linfático en base al resultado de cuantificación del ARNm.

45 Además, la presente invención proporciona un aparato para determinar metástasis cancerosa de acuerdo con el método proporcionado, que comprende una parte de cuantificación para cuantificar ARNm de citoqueratina 19 en una muestra de ensayo preparada a partir de un ganglio linfático sospechoso de metástasis de una célula cancerosa, una parte de comparación para comparar el resultado de cuantificación del ARNm con un primer umbral y un segundo umbral que es más alto que el primer umbral, y una parte de determinación para determinar si la metástasis cancerosa del ganglio linfático es negativa, débilmente positiva o fuertemente positiva, en base al resultado de la comparación.

De acuerdo con la presente invención, puede determinarse en que medida una célula cancerosa ha metastatizado a 55 un ganglio linfático.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es una vista en perspectiva que muestra una construcción completa de un aparato 1 de acuerdo con una realización de la presente invención; La figura 2 es una vista en perspectiva que muestra una construcción completa de una parte de cuantificación de ácido nucleico 101; La figura 3 una vista en planta esquemática de la parte de cuantificación de ácido nucleico 101; La figura 4 es una vista en diagrama de bloques que muestra una construcción de una parte de control 102d;

65 La figura 5 es un diagrama de flujo del proceso con la parte de control 102d; La figura 6 es un ejemplo de una pantalla para mostrar el resultado de la determinación en la parte de

visualización 102c; La figura 7 es un gráfico que muestra una relación entre un tamaño de un foco metastásico de un cáncer de mama y el resultado de cuantificación de un ARNm de CK19; La figura 8 es un gráfico que muestra una relación entre un tamaño de un foco metastásico de un cáncer de

intestino grueso y el resultado de cuantificación de un ARNm de CK19; La figura 9 es un gráfico que muestra una relación entre una cantidad de expresión de un ARNm en un ganglio linfático al que una célula cancerosa derivada de carcinoma tubulopapilar ha metastatizado, y el número de células cancerosas contenidas en un foco metastásico; La figura 10 es un gráfico que muestra una relación entre una cantidad de expresión de un ARNm en un ganglio linfático al que una célula cancerosa derivada de carcinoma tubular sólido ha metastatizado, y el número de células cancerosas contenidas en un foco metastásico; La figura 11 es un valor supuesto de una cantidad de expresión de un ARNm de CK19 en un ganglio linfático que tiene un foco metastásico de un volumen particular; La figura 12 es un gráfico que muestra el resultado de cuantificación de un ARNm de CK19 cuando se usa un

ganglio linfático tomado de un paciente con cáncer de mama; y La figura 13 es un gráfico que muestra el resultado de cuantificación de un ARNm de CK19 cuando se usa un ganglio linfático tomado de un paciente con cáncer de intestino grueso.

Descripción detallada de la invención

Una realización de la presente invención es un método para determinar metástasis cancerosa contenida en un ganglio linfático tomado de un organismo vivo. De acuerdo con este método, puede obtenerse un tamaño de un foco metastásico de un cáncer en un ganglio linfático (en lo sucesivo en este documento, también denominado simplemente como foco metastásico) .

En este documento, un tamaño de un foco metastásico es un concepto que incluye un eje principal y un área de un foco metastásico preparada durante la preparación de una sección tisular de un ganglio linfático, un volumen de un foco metastásico calculado a partir de este eje principal, una masa de un foco metastásico, y el número de células cancerosas contenidas en un foco metastásico.

El cáncer, tal como se usa en este documento, es un tumor que se ha vuelto maligno, y tiene el mismo significado que el de un tumor maligno. El cáncer incluye carcinoma, sarcoma, y un cáncer derivado de un órgano hematopoyético. Los ejemplos del carcinoma incluyen un cáncer derivado de una célula epitelial tal como un cáncer de mama, un cáncer de estómago, un cáncer de intestino grueso, un cáncer de próstata, un cáncer de cuello del

útero y un cáncer de cuerpo uterino. Los ejemplos del sarcoma incluyen osteosarcoma y sarcoma de tejido blando. Los ejemplos del cáncer derivado de un órgano hematopoyético incluyen leucemia y linfoma maligno.

Para obtener un tamaño de un foco metastásico, en primer lugar, se cuantifica un ARNm marcador tumoral (en lo sucesivo en este documento, también denominado simplemente como ARNm) contenido en un ganglio linfático. El ARNm marcador tumoral es un ARNm transcrito a partir de un gen marcador tumoral. El gen marcador tumoral se refiere a un gen tal que una cantidad de expresión en una célula cancerosa y una cantidad de expresión en una célula normal son significativamente diferentes, tal como se ha descrito anteriormente. Los ejemplos del gen marcador tumoral incluyen genes que codifican CK (citoqueratinas) tales como CK18, CK19 y CK20, CEA (antígeno carcinoembrionario) , MUC1, MMG (mamoglobina) , PSA (antígeno específico de la próstata) , CA15-3, EpCAM

45 (molécula de adhesión a célula epitelial) y similares.

Durante la cuantificación de un ARNm, es preferible que una muestra de ensayo se prepare a partir... [Seguir leyendo]

1. Un método para determinar un tamaño de un foco metastásico, que comprende las etapas de:

cuantificar ARNm de citoqueratina 19 en una muestra de ensayo preparada a partir de un ganglio linfático, y 5 obtener un tamaño de un foco metastásico en el ganglio linfático en base al resultado de cuantificación del ARNm.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el resultado de cuantificación del ARNm es una cantidad absoluta del ARNm en la muestra de ensayo.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además una etapa de comparar el resultado de cuantificación del ARNm con un umbral, y la etapa de obtener un tamaño de un foco metastásico se realiza cuando el resultado de cuantificación del ARNm es el umbral o superior.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el umbral se establece a de 50 a 3000 copias/µl • lisado.

5. Un método para determinar metástasis cancerosa, que comprende las etapas de:

cuantificar ARNm de citoqueratina 19 en una muestra de ensayo preparada a partir de un ganglio linfático, comparar el resultado de cuantificación del ARNm con un umbral, determinar si la metástasis cancerosa del ganglio linfático es negativa o positiva, en base al resultado de la comparación, y emitir información que indica que la metástasis cancerosa del ganglio linfático es negativa o positiva, en base al resultado de la determinación,

en el que la etapa de emisión se realiza para emitir, además, un tamaño de un foco metastásico, cuando el resultado de la determinación es positivo.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en el que la etapa de comparación se realiza para comparar el resultado de cuantificación del ARNm con el umbral y un segundo umbral que es superior al umbral, y la etapa de determinación se realiza para determinar si la metástasis cancerosa del ganglio linfático es negativa, débilmente positiva o fuertemente positiva, en base al resultado de comparación con el umbral y el segundo umbral.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende, además, una etapa de emitir información que

indica si la metástasis cancerosa del ganglio linfático es negativa, débilmente positiva, o fuertemente positiva, en 35 base al resultado de la determinación.

8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en el que la etapa de emisión se realiza para emitir, además, información que indica que un foco metastásico es micrometástasis, cuando el resultado de la determinación es débilmente positivo.

9. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en el que la etapa de emisión se realiza para emitir, además, información que indica que un foco metastásico es macrometástasis, cuando el resultado de la determinación es fuertemente positivo.

45 10. El método de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el segundo umbral se establece a de 2000 a 20000 copias/µl • lisado.

11. Un aparato para determinar el tamaño de un foco metastásico, que comprende:

una parte de cuantificación para cuantificar ARNm de citoqueratina 19 en una muestra de ensayo preparada a partir de un ganglio linfático, una parte de comparación para comparar el resultado de cuantificación del ARNm con un umbral y un segundo umbral que es superior al umbral, una parte de determinación para determinar si la metástasis cancerosa del ganglio linfático es negativa,

55 débilmente positiva o fuertemente positiva, en base al resultado de comparación con el umbral y el segundo umbral, determinando de este modo el tamaño de un foco metastásico, y una parte de visualización para emitir información que indica si la metástasis cancerosa del ganglio linfático es negativa o positiva, en base al resultado de la determinación, en el que la parte de visualización es, además, para emitir el tamaño del foco metastásico, cuando el resultado de la determinación es positivo, y en el que el aparato está adaptado adecuadamente para realizar un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

12. El aparato de acuerdo con la reivindicación 11, que comprende, además, una parte de visualización para emitir

información que indica si la metástasis cancerosa del ganglio linfático es negativa, débilmente positiva o fuertemente 65 positiva, en base al resultado de la determinación.

13. El aparato de acuerdo con la reivindicación 12, en el que la parte de visualización es, además, para emitir información que indica que un foco metastásico es micrometástasis, cuando el resultado de la determinación es débilmente positivo.

14. El aparato de acuerdo con la reivindicación 12, en el que la parte de visualización es, además, para emitir información que indica que un foco metastásico es macrometástasis, cuando el resultado de la determinación es fuertemente positivo.