Líneas de células tumorales NM-F9 (DSM ACC2606) y NM-D4 (DSM ACC2605), usos de las mismas.

Una línea celular que expresa en la superficie celular TF, MUC1 y asialoglicoforina (AGPA).

Líneas de células tumorales NM-F9 (DSM ACC2606) y NM-D4 (DSM ACC2605) , usos de las mismas La presente invención se refiere a una línea celular seleccionada del grupo que consiste en (a) una línea celular denominada NM-F9 que tiene el número de registro de DSMZ, DSM ACC2606; (b) una línea celular denominada NM-D4 que tiene el número de registro de DSMZ, DSM ACC2605; y subclones de (a) o (b) . Adicionalmente, la presente invención proporciona un lisado de las líneas celulares o una molécula o mezcla de moléculas obtenido a partir de estas líneas celulares así como células dendríticas cargadas con dicho lisado, cultivadas conjuntamente o fusionadas con células de las líneas celulares, o una molécula o mezcla de moléculas obtenido a partir de estas líneas celulares de la presente invención. Además, se proporcionan composiciones, preferiblemente composiciones farmacéuticas o de vacuna que comprenden las líneas celulares, el lisado, las moléculas, la mezcla de moléculas o las células dendríticas de la presente invención. En otro aspecto, la presente invención se refiere a métodos para producir las composiciones mencionadas anteriormente. Además, la línea celular se usa en métodos y usos para la vacunación contra o el tratamiento o la prevención de cánceres y/o enfermedades tumorales.

El concepto de inmunidad del huésped frente a tumor se desarrolló por Ehrlich (Ehrlich P. Uber den jetzigen Stand der Karzinom-forschung. En: Himmelweit F., ed. The collected papers of Paul Ehrlich -Vol. II Immunology and cancer research. Londres: Pergamon Press, 1957:559) aproximadamente hace un siglo y se reforzó más tarde a principios de los años 1900 por varios laboratorios que estudiaron líneas celulares tumorales trasplantables en ratones. En 1910, Contamin (Cantamin MA. Immunización contre le cancer de la souris inoculec avec des tumours modifes par les rayons. Academie Des Sciences 1910; 150: 128) demostró el desarrollo de inmunidad protectora frente a células tumorales trasplantables en ratones inmunizados con las mismas células tumorales irradiadas. En 1935, Besredtka y Gross (Besredka A, Gross L. Du role dela peau dans la sarcomatose de la souris. Ann Inst Pasteur 1935;55:402-416) mostraron que algunos animales inoculados con homogeneizado de células tumorales experimentaron regresión tumoral, así como protección frente a exposiciones de reinoculación tumoral. Desde estos primeros tiempos, la vacunación antitumoral ha visto resultados alentadores así como inconvenientes decepcionantes. Recientemente, la teoría de inmunovigilancia frente a células cancerosas ha pasado por un resurgimiento. La heterogeneidad en la expresión de antígenos asociados a tumores (AAT) se ha documentado totalmente en diversos tumores (Natalie PG, Giacomini P, Bigotti A, et al. Heterogeneity in the expression of HLA and tumour-associated antigens by surgically removed and cultured mama carcinoma cell. Cancer Res 1983;43:660666; Houghton AN, Davis LJ, Fenotypic heterogeneity of melanoma. En: Bagnara JT, ed. Advances in pigment cell research, Nueva York: Alan R. Liss Inc. 1988:333-342) y desempeña claramente un papel en el escape de células tumorales de la inmunovigilancia (Jager E., Ringhoffer M, Altmannsberger M, et al. Immunoselection in vivo: independent loss of MHC class I and melanocyte differentiation antigen expression in metastatic melanoma. Int J Cancer 1997;71:142-147) . Por tanto, se ha realizado un enfoque sobre el desarrollo de vacunas de lisados celulares tumorales (TCLV, tumor cell lysate vaccines) y vacunas de células enteras (WCV, whole cell vaccines) con el fin de generar vacunas polivalentes. Hoy en día, se usan dos o más líneas celulares del mismo tipo histológico para el desarrollo de vacunas contra el cáncer con el fin de compensar cualquier antígeno perdido potencialmente. Éstas se usan para enfrentarse a tumores del mismo tipo tisular o de diferente tipo tisular. Las células tumorales autólogas o alogénicas son los componentes principales de TCLV o WCV.

El inconveniente principal de estos enfoques es que ha de usarse una mezcla de diversas líneas celulares, lo que hace que la generación de estas vacunas sea laboriosa y cara. Una desventaja adicional es que las células de carcinoma no son, en un sentido biotecnológico, adecuadas debido a sus características y requerimientos de crecimiento y proliferación. En particular, los requerimientos de crecimiento y proliferación para tales células de carcinoma habitualmente son muy específicos y necesitan establecerse y mantenerse cuidadosamente, lo que conduce a un proceso de producción laborioso y costoso. Otro problema con las células de carcinoma usadas para la producción de TCLV y WCV es que a menudo tienen una carga viral endógena, es decir tales células pueden albergar virus (por ejemplo, retrovirus) que plantean problemas en la producción de vacunas autólogas o alogénicas y, de manera más importante cuando se usan células (o lisados de las mismas) que contienen virus para fines de vacunación. Adicionalmente, las células de carcinoma usadas hasta la fecha para la producción de TCLV o WCV crecen con una velocidad de duplicación comparativamente muy lenta y/o crecen como cultivo adherente, lo que no permite el crecimiento en densidades celulares elevadas así como una fácil recogida. Sin embargo se desea producir una gran cantidad del mismo lote de células con el fin de asegurarse de que las TCLV y WCV obtenidas tienen un nivel de calidad elevado y continuo.

Además de los problemas técnicos con las células usadas hasta la fecha para la producción de TCLV y WCV, también existen inconvenientes importantes con la inmunogenicidad de dichas células. Esto se debe a que dichas células a menudo albergan sólo antígenos muy específicos de tumores específicos. Por tanto, la generación de una TCLV o WCV pan-carcinómica multivalente que sea adecuada para diversos carcinomas con varios antígenos tumorales compartidos es una tarea impredecible y difícil. Adicionalmente, también se conoce que la mayoría de los antígenos tumorales altamente específicos que se expresan en la superficie de células tumorales y frente a los que es altamente deseable obtener una respuesta inmunitaria durante la inmunización son antígenos de hidrato de carbono. Debido a la naturaleza compleja de la maquinaria de glicosilación, especialmente en células de mamífero en las que están implicadas más de 200 enzimas en la glicosilación de moléculas de membrana, la generación de líneas celulares que expresen de manera estable altas cantidades de antígenos tumorales de hidrato de carbono

deseados es muy difícil y no puede predecirse debido a la interacción compleja de esta gran cantidad de factores diferentes que se desconoce ampliamente y puede esperarse que tengan además bucles de retroalimentación y requerimientos de sustratos complejos dependiendo de la interacción compleja. Esto es especialmente cierto cuando quieren combinarse varios antígenos tumorales de hidrato de carbono en una única célula como es el caso para una vacuna WCV o TCLV polivalente pan-carcinómica. En cambio, la modificación de una célula con antígenos proteicos es una tecnología sencilla conocida por los expertos en la técnica. El extraordinario antígeno tumoral de membrana en cuanto a especificidad es el denominado antígeno de Thomsen-Friedenreich (TF) , una estructura disacárida de hidrato de carbono que prácticamente sólo se produce en células tumorales y en casi todos los tipos de carcinoma (Goletz S., Cao Y, Danielczyk A., Ravn P., Schöber U., y Karsten U. Thomsen-Friedenreich antigen: the “hidden” tumour antigen. Adv. Exp. Med. Biol. 2003;535:147-62) 2003) . De ese modo, es el antígeno tumoral unido a membrana de mayor especificidad tumoral o al menos se encuentra entre aquéllos con la mayor especificidad tumoral. Otro antígeno tumoral de hidrato de carbono con especificidad tumoral muy alta es Tn, un antígeno relacionado con TF. Otro epítopo tumoral pan-carcinómico es un epítopo novedoso especial de MUC1 (mucina epitelial polimórfica) , que se denominará TA-MUC1 en el presente documento, y que es un epítopo conformacional en el que glicosilaciones particulares en la región PDTRP inducen una conformación que es específica de tumor tal como se describe, por ejemplo, en el documento WO 2004/009632. Además, la propia MUC1 es un marcador tumoral pan-carcinómico bien conocido con epítopos peptídicos. Sin embargo, la expresión de dichos antígenos de hidrato de carbono o relacionados con hidrato de carbono, a menudo no es estable cuando se cultivan células tumorales de pacientes. Además, se prefieren mayores cantidades de los antígenos con el fin de aumentar las respuestas inmunitarias que hacen que la generación sea incluso más problemática. En conclusión,... [Seguir leyendo]

1. Una línea celular que expresa en la superficie celular TF, MUC1 y asialoglicoforina (AGPA) .

2. La línea celular según la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste en

(a) una línea celular denominada NM-F9 que tiene el número de registro de DSMZ, DSM ACC2606;

(b) una línea celular denominada NM-D4 que tiene el número de registro de DSMZ, DSM ACC2605; y

(c) subclones de (a) o (b) que expresan en la superficie celular TF, MUC1 y asialoglicoforina.

3. La línea celular según la reivindicación 1 ó 2, que comprende un vector que comprende una molécula de ácido nucleico.

4. La línea celular según la reivindicación 3, en la que dicha molécula de ácido nucleico codifica al menos un

polipéptido de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en una citocina, molécula de CMH de clase I, molécula de CMH de clase II y molécula coestimuladora, epítopo de células T o multímeros del mismo, antígeno tumoral, hormona, hormona sexual, adyuvante, anticuerpo u otras moléculas o fragmentos de los mismos que tienen actividad biológica o cualquier combinación de los mismos.

5. Un lisado de la línea celular según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una molécula o mezcla de 15 moléculas obtenido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

6. Células dendríticas cargadas con el lisado, una molécula o una mezcla de moléculas según la reivindicación 5 o células dendríticas incubadas conjuntamente o fusionadas con células según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

7. Una composición que comprende la línea celular según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, el

lisado, la molécula o mezcla de moléculas según la reivindicación 5, o las células dendríticas según la reivindicación 6.

8. La composición según la reivindicación 7, que es una composición farmacéutica o de vacuna.

9. Uso de la línea celular según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, el lisado, la molécula o mezcla de moléculas según la reivindicación 5, o las células dendríticas según la reivindicación 6, para la

preparación de una composición farmacéutica o de vacuna para el tratamiento o la prevención de cánceres y/o enfermedades tumorales.

10. La línea celular según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, el lisado, la molécula o mezcla de moléculas según la reivindicación 5, o las células dendríticas según la reivindicación 6, para su uso en el tratamiento o la prevención de cánceres y/o enfermedades tumorales.

11. El uso según la reivindicación 9, o línea celular según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, lisado, molécula o mezcla de moléculas según la reivindicación 5, o células dendríticas según la reivindicación 6 para el uso según la reivindicación 10, en el que dicho cáncer o enfermedad tumoral es un cáncer de cabeza y cuello, de pulmón, del mediastino, del tracto gastrointestinal, del sistema genitourinario, del sistema ginecológico, de mama, del sistema endocrino, de piel, infantil, un cáncer de localización primaria desconocida o metastásico, un sarcoma del tejido blando y el hueso, un mesotelioma, un melanoma, una neoplasia del sistema nervioso central, un linfoma, una leucemia, un síndrome paraneoplásico, una carcinomatosis peritoneal, un cáncer metastásico y/o tumor maligno relacionado con inmunosupresión.

12. Uso de la línea celular según la reivindicación 2 (a) o 2 (b) en un método de producción de un anticuerpo,

que comprende obtener dicho anticuerpo a partir de dicha línea celular o a partir del medio de dicha línea 40 celular.