LIGANDO DE CITOCINA PARA EL TRATAMIENTO DE ASMA E HIPER-SENSIBILIDAD DE LAS VÍAS RESPIRATORIAS.

Uso de un polipéptido para la fabricación de un medicamento para tratar el asma en un mamífero,

donde el polipéptido comprende una secuencia de residuos aminoácido que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de residuos aminoácido de un polipéptido seleccionado entre: (a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 38 (Val) hasta 152 (Leu), como se muestra en la SEC ID NO:2; (b) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 27 (Leu) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2; (c) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 24 (Ser) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2; y (d) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 1 (Met) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E08102636.

Solicitante: ZYMOGENETICS, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1201 EASTLAKE AVENUE EAST SEATTLE, WA 98102 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: GROSS, JANE, A., SPRECHER,CINDY,A, NOVAK,JULIA,E, GRANT,FRANCIS,J, DILLON,STACEY,R, HAMMOND,ANGELA,K, KUIJPER,JOSEPH,L, DASOVICH,MARIA M.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 21 de Enero de 2003.

Fecha Concesión Europea: 25 de Agosto de 2010.

Clasificación PCT:

  • A61K38/19 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Citoquinas; Linfoquinas; Interferones.
  • A61K39/395 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • C07K14/52 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Citoquinas; Linfoquinas; Interferones.
  • C07K14/54 C07K 14/00 […] › Interleuquinas (IL).
  • C07K16/24 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
  • C12N15/19 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Interferones; Linfoquinas; Citoquinas.
  • C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
  • C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
  • G01N33/53 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
  • G01N33/567 G01N 33/00 […] › utilizando un extracto de tejido o de órgano como agente de unión.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Chipre.


Fragmento de la descripción:

Ligando de citocina para el tratamiento de asma e hiper-sensibilidad de las vías respiratorias.

Antecedentes de la invención

La proliferación y diferenciación de células de organismos multicelulares son controladas por hormonas y factores de crecimiento polipeptídicos. Estas moléculas difundibles permiten que las células se comuniquen entre sí y actúen juntas para formar células, tejidos y órganos, y para reparar tejido dañado. Los ejemplos de hormonas y factores de crecimiento incluyen las hormonas esteroides (p. ej., estrógeno, testosterona), hormona paratiroidea, hormona estimulante de folículos, interleucinas, factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), eritropoyetina (EPO) y calcito-nina.

Las hormonas y los factores de crecimiento influyen en el metabolismo celular, uniéndose a receptores. Los receptores pueden ser proteínas de membranas integrales que se unen a vías de señalización dentro de la célula, tales como sistemas de segundos mensajeros. Otras clases de receptores son moléculas solubles, como los factores de transcripción.

Las citocinas en general estimulan la proliferación o diferenciación de células del linaje hematopoyético o participan en los mecanismos de respuestas inmunitarias e inflamatorias del organismo. Los ejemplos de citocinas que afectan la hematopoyesis son la eritropoyetina (EPO), que estimula el desarrollo de glóbulos rojos; la trombopoyetina (TPO), que estimula el desarrollo de células del linaje de megacariocitos; y el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), que estimula el desarrollo de neutrófilos. Estas citocinas son útiles para restaurar los niveles normales de células sanguíneas en pacientes que sufren de anemia, trombocitopenia y neutropenia, o que reciben quimioterapia para el cáncer.

Las interleucinas son una familia de citocinas que median las respuestas inmunológicas, incluyendo la inflamación. Las interleucinas median una diversidad de patologías inflamatorias. Las células T desempeñan una función central para una respuesta inmunitaria y producen muchas citocinas e inmunidad adaptativa a antígenos. Las citocinas producidas por las células T han sido clasificadas como de tipo 1 y de tipo 2 (Kelso, A. Immun. Cell BioL 76: 300-317, 1998). Las citocinas de tipo 1 incluyen IL-2, IFN-γ, LT-α, y están implicadas en respuestas inflamatorias, inmunidad vírica, inmunidad parasitaria intracelular y rechazo de aloinjertos. Las citocinas de tipo 2 incluyen IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 e IL-13, y están implicadas en respuestas humorales, inmunidad a helmintos y respuesta alérgica. Las citocinas compartidas entre los tipos 1 y 2 incluyen IL-3, GM-CSF y TNF-α. Existen algunos datos que indican que el tipo 1 y el tipo 2 que producen poblaciones de células T preferencialmente migran a diferentes tipos de tejido inflamado.

Las células T maduras pueden ser activadas, es decir, por un antígeno u otro estímulo, para producir, por ejemplo, citocinas, moléculas de señalización bioquímica o receptores que influyen también sobre el destino de la población de células T.

Las células B pueden activarse mediante receptores en su superficie celular, incluyendo receptores de células B y otras moléculas accesorias para desempeñar funciones celulares accesorias, como la producción de citocinas.

Los monocitos/macrófagos y las células T pueden ser activados por receptores en su superficie celular y desempeñan un papel central en la respuesta inmunitaria, presentando antígeno a los linfocitos, y también actúan como células accesorias para los linfocitos, segregando numerosas citocinas.

Los linfocitos citolíticos naturales (NK) tienen una célula progenitora común con las células T y las células B, y desempeñan una función en la vigilancia inmunitaria. Los linfocitos citolíticos naturales, que comprenden hasta 15% de los linfocitos de la sangre, no expresan receptores de antígenos y, por lo tanto, no usan reconocimiento MHC como requerimiento para unirse a una célula diana. Los linfocitos citolíticos naturales están implicados en el reconocimiento y la destrucción de determinadas células tumorales y células infectadas por virus. Se cree que, in vivo, los linfocitos citolíticos naturales requieren activación, no obstante, se ha demostrado que, in vitro, los linfocitos citolíticos naturales destruyen algunos tipos de células tumorales sin activación.

Las actividades demostradas in vivo de la familia de citocinas ilustran el enorme potencial clínico y la necesidad de otras citocinas, agonistas de citocinas y antagonistas de citocinas. La presente invención se dirige a estas necesidades, proporcionando una nueva citocina que estimula células del linaje de células hematopoyéticas, como también composiciones y métodos relacionados.

La presente invención proporciona tales polipéptidos para estos y otros usos que deben ser claros para los expertos en la técnica a partir de las enseñanzas de la presente.

La base de datos EMBL Nº de acceso AC048338 (EBI Acc. No. EM_HUM:AC048338) provee la secuencia completa Homo sapiens 12 BAC RP11-512M8 (Roswell Park Cancer Institute Human BAC library).

La base de datos EMBL Nº de acceso AK005939 (EBI Acc. No. EM_PRO:AK005939) provee el clon de cDNA de testículo masculino adulto Mus musculus RIKEN full-length enriched library: 1700013B14 producto: proteína hipotética, secuencia de inserción completa.

Dillon, Stacy R. et al., Nature Immunology, Julio 2004, Vol. 5(7), páginas 752-760, indica que la IL-31, una citocina producida por células T activadas, induce dermatitis en ratones.

Conti et al., Autoinmunity Reviews, Vol 6(3), 5 Febrero 2007, páginas 131-137, describe la modulación de autoinmunidad por las últimas interleucinas (con un énfasis especial en IL-32).

Sumario de la invención

La presente invención provee aplicaciones médicas para tratar asma e hiper-sensibilidad de las vías respiratorias en un mamífero, con péptidos de SEC ID NO:2 (Zcytor17lig) así como secuencias idénticas a ella en un 90%, y sus fragmentos seleccionados, como se recoge en las reivindicaciones.

Además, la presente invención provee métodos in vitro con dichos péptidos para la regulación al alza y la regulación a la baja de la expresión génica de IL-13RA a largo plazo de la actividad de señalización de IL-13 en ciertas líneas celulares epiteliales de pulmón humano, según se reivindica.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es una ilustración de una alineación múltiple de zcytorl7lig humano (SEC ID NO:2) (mzcytor17lig), zcytor17lig de ratón (SEC ID NO:11) (mzcytor17lig), IL-3 de ratón (mIL-3) (SEC ID NO:100) e IL-3 humana (hIL-3) (SEC ID NO: 102).

La Figura 2 es una ilustración de una alineación múltiple de zcytor17lig humano (SEC ID NO:2) (zcytor17lig), y zcytor17lig de ratón (SEC ID NO: 11) (mzcytor17lig).

La Figura 3 es un trazado de hidrofilicidad Hopp/Woods de zcytor17lig humano (SEC ID NO:2).

Descripción detallada de la invención

Antes de exponer la invención en detalle, tal vez resulte útil para entenderla, definir los siguientes términos y expresiones:

La expresión "marcador de afinidad" se usa en la presente memoria para indicar un segmento de polipéptido que puede estar unido a un segundo polipéptido para proporcionar la purificación o detección del segundo polipéptido o para proveer sitios de unión del segundo polipéptido a un sustrato. En principio, como marcador de afinidad, se puede utilizar cualquier péptido o proteína para el o la cual esté disponible un anticuerpo u otro agente de unión específico. Los marcadores de afinidad incluyen una extensión de polihistidina, proteína A (Nilsson et al., EMBOJ. 4:1075, 1985; Nilsson et al., Methods Enzymol 198: 3, 1991), glutatión S transferasa (Smith y Johnson, Gene 67: 31, I998), marcador de afinidad Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc. Natl. Acad. Sci, USA 82:7952-4, 1985), sustancia P, péptido FlagTM (Hopp et al., Biotechnology 6:1204-10, 1988), péptido de unión a estreptavidina u otro epítopo antigénico o dominio de unión. Véase, en general, Ford et al., Protein Expression and Purification 2:...

 


Reivindicaciones:

1. Uso de un polipéptido para la fabricación de un medicamento para tratar el asma en un mamífero, donde el polipéptido comprende una secuencia de residuos aminoácido que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de residuos aminoácido de un polipéptido seleccionado entre:

(a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 38 (Val) hasta 152 (Leu), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(b) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 27 (Leu) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(c) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 24 (Ser) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2; y

(d) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 1 (Met) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que el asma es asma alérgico.

3. Uso de un polipéptido para la fabricación de un medicamento para tratar la hiper-sensibilidad de las vías respiratorias en un mamífero, donde el polipéptido comprende una secuencia de residuos aminoácido que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de residuos aminoácido de un polipéptido seleccionado entre:

(a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 38 (Val) hasta 152 (Leu), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(b) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 27 (Leu) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(c) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 24 (Ser) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2; y

(d) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 1 (Met) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que dicho medicamento disminuye la incorporación de eosinófilos mediada por IL13 o la producción mucosa.

5. Uso según cualquier reivindicación anterior, en el que el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 27 (Leu) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2.

6. Un polipéptido para tratar el asma en un mamífero, donde el polipéptido comprende una secuencia de residuos aminoácido que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de residuos aminoácido de un polipéptido seleccionado entre:

(a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 38 (Val) hasta 152 (Leu), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(b) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 27 (Leu) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(c) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 24 (Ser) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2; y

(d) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 1 (Met) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2.

7. Un polipéptido para tratar la hiper-sensibilidad de las vías respiratorias en un mamífero, donde el polipéptido comprende una secuencia de residuos aminoácido que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de residuos aminoácido de un polipéptido seleccionado entre:

(a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 38 (Val) hasta 152 (Leu), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(b) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 27 (Leu) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(c) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 24 (Ser) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2; y

(d) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 1 (Met) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2.

8. Un método in vitro para el incremento a largo plazo de la expresión del gen IL-13RA2 en una línea celular epitelial de pulmón humano, que comprende administrar un polipéptido a dicha línea celular; donde el polipéptido comprende una secuencia de residuos aminoácido que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de residuos aminoácido de un polipéptido seleccionado entre:

(a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 38 (Val) hasta 152 (Leu), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(b) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 27 (Leu) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(c) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 24 (Ser) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2; y

(d) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 1 (Met) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2;

donde dicha línea celular se selecciona entre una línea celular A549 y una línea celular SK-LU-1.

9. Un método in vitro para la disminución de la actividad de señalización de IL-13 en una línea celular epitelial de pulmón humano, que comprende administrar un polipéptido a dicha línea celular; donde el polipéptido comprende una secuencia de residuos aminoácido que es por lo menos 90% idéntica a la secuencia de residuos aminoácido de un polipéptido seleccionado entre:

(a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 38 (Val) hasta 152 (Leu), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(b) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 27 (Leu) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2;

(c) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 24 (Ser) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2; y

(d) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos desde los residuos 1 (Met) hasta 164 (Thr), como se muestra en la SEC ID NO:2;

donde dicha línea celular se selecciona entre una línea celular A549 y una línea celular SK-LU-1.


 

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