Composición inmunogénica de nanopartículas que comprende el potenciador de la infectividad a macrófagos (MIP).

Composición inmunogénica de nanopartículas que comprende la proteína potenciadora de la infectividad a macrófagos (MIP).

La presente invención se refiere a composiciones novedosas, y en particular, a composiciones inmunogénicas novedosas, que comprenden la proteína (MIP), y al uso de dichas composiciones para provocar una respuesta inmune. En este sentido, los autores de la presente invención han encontrado que sorprendentemente las nanopartículas que principalmente comprenden ésteres de sorbitán son particularmente adecuadas como vehículo para composiciones vacunales que comprenden la proteína MIP para uso en la prevención de la infección causada por N. meningitidis.

Composición inmunogénica de nano partículas que comprende el potenciador de la infectividad a macrófagos (MIP)

Sector de la técnica La presente invención se refiere al campo médico, en particular a nuevas composiciones inmunogénicas, que comprenden la proteína potenciadora de la infectividad a macrófagos (MIP) , y el uso de dichas composiciones para provocar una respuesta inmune.

Antecedentes de la invención Un gen que codifica una proteína 29-kDa de Neisseria meningitidis serogrupo B cepa Me58 con homología con la proteína potenciadora de la ínfectívidad a macrófagos (MIP) de Legionella pneumophila se clonó y expresó en Escherichia coli, y la proteína recombinante soluble purificada (rMIP) se usó en estudios de inmunización. El análisis de las secuencias predichas de aminoácidos de MIP de 13 cepas meningocócicas bien caracterizadas, aisladas de pacientes o portadores y diferentes en el serogrupo, serotipo, y subtipo, mostró que la proteína estaba altamente conservada (98 a 100%) , y se encontraron sólo tres tipos distintos de secuencias (designadas 1, 11, Y 111) . El Western Blot mostró que la proteína MIP se expresó en niveles similares por todas estas cepas. La inmunización de ratones con el tipo 1 MC58 rMIP en micelas de detergente y liposomas que contienen monofosforillípido A (MPLA) indujo a altos niveles de anticuerpos de superficie reactiva con títulos de actividad bactericida del suero (SBA) 1 I 1.024 contra la cepa homóloga. Los anticuerpos bactericidas también se indujeron con la proteína en solución salina sola y liposomas solo (títulos, 1/128) , pero no después de la adsorción de Al (OH) 3. De manera significativa, los antisueros activos contra rMlP tipo I administrados en solución salina o liposomas mataron cepas de tipos de secuencias heterólogas 11 y 111 con títulos similares de la SBA (1/128 a 1/256) (Hung MC, Salim S, Williams JN, Heckels JE, Christodoulides M. The Neisseria meningitidis macrophage infectivity potentiator protein induces cross-strain serum bactericidal activity and is a potential serogroup B vaccine candidate. (Infect Immun 2011 ; 79 (9) :3784-91) .

Además, los autores de la presente invención (datos no publicados) realizaron una serie de experimentos de inmunización utilizando rMIP en liposomas L-a-fosfatidilcolina / colesterol:

(6:2 relación molar) , resultando en datos similares a los mostrados anteriormente, sin embargo, también se detectó actividad bactericida con proteoliposomas tras la adsorción a AI (OH) 3 (título, 1/512) . En estos experimentos la eficiencia de asociación de la rMIP a los

liposomas fue del 65%.

Además, resultados de un tercer estudio (Tsolakos N, Brookes e, Taylor S, Gorringe A, Tang CM, Feavers 1M, Wheeler JX. Identification of vaccine antigens using integrated proteomic analyses of surface immunogens from serogroup B Neisseria meningitidis. J Proteomics. 2014;101 :63-76.) mostraron que el suero específico anti-MIP reconoció al meningococo en ensayos ELlSA con células enteras y permitió la opsonofagocitosis y deposición de factores del complemento en la superficie de los aislados del meningococo de diferentes serosubtipos lo que difiere de los dos estudios comentados anteriormente. Este suero específico anti-Mip no produjo la muerte de la bacteria a diluciones 2:: 1/8. Las diferencias en las formulaciones empleadas entre los tres estudios arriba mencionados pueden explicar los diferentes resultados SBA. De hecho, en el tercer estudio comentado MIP se administró con MPLA (adyuvante) en salino. Así es posible que el uso de MPLA pudo haber afectado la conformación nativa de MIP y por tanto haber influido negativamente en el resultados mostrados.

En cualquier caso, tomados en su conjunto, estos datos sugieren que rMIP puede conferir una protección cruzada frente a meningococo y debería de ser considerado un antígeno potencial para inclusión en nuevas vacunas contra infección por meningococo.

Sin embargo, desafortunadamente la proteína potenciad ora de la infectividad a macrófagos (MIP) presenta una baja estabilidad bajo condiciones normales de almacenamiento (se degrada fácilmente en condiciones normales de almacenamiento debido a la baja termoestabilidad del antígeno aislado) . Además, no es posible lioflilizar el antígeno (MIP) con el fin de incrementar su estabilidad ya que la estructura del antígeno se desestabiliza durante el proceso de liofilización. En consecuencia, estas características impiden en gran medida la aplicación de este antígeno potencial para su inclusión en nuevas vacunas contra la infección meningocócica.

Además, de la evaluación de la asociación del vehículo-antígeno en estas composiciones de vacunas en las cuales MIP se administra usando liposomas como vehículo, se concluye que el antígeno se asocial al azar al vehículo en diferentes concentraciones.

Este hecho tiene un impacto directo en la eficacia terapéutica de dichas composiciones vacunales y también sobre la naturaleza tóxica de dichas composiciones. En particular, es difícil estandarizar tales composiciones. Además, esas composiciones vacunales en las que

se utiliza un vehículo de liposoma por lo general no son composiciones vacunales protectoras libres de adyuvante. En este sentido, el desarrollo de tales composiciones vacuna les protectoras libres de adyuvante reduciría en gran medida los costes de fabricación y proporcionaría composiciones farmacéuticas más seguras.

En consecuencia, existe la necesidad de proporcionar composiciones de vacunas MIP libres de adyuvante contra la infección por meningococo, las cuales al mismo tiempo sean fáciles de estandarizar y solucionen los problemas de estabilidad antes mencionados.

Breve descripción de la invención Los autores de la presente invención han encontrado que sorprendentemente las nanopartículas que comprenden principalmente ésteres de sorbitán son vehículos adecuados para ingredientes activos tales como una proteína como una porina (por ejemplo, la proteína rPorB) o la proteína MIP. De hecho, estas composiciones vacunales admiten una amplia gama de concentraciones de antígeno en el que la asociación y la integridad del antígeno permanecen después del almacenamiento a largo plazo en diferentes condiciones (en suspensión a 4º C, liofilizado a 4º C y liofilizado a temperatura ambiente) . Ademas, estas composiciones son composiciones libres de adyuvantes.

Las nanopartículas de las composiciones vacunales de la presente invención se han descrito en W02013068625 la cual está completamente incorporada por referencia.

Así, el primer aspecto de la invención se refiere a una composición inmunogénica, preferiblemente una composición libre de adyuvante, que comprende una nanopartícula que comprende un éster de sorbitán en una proporción en peso de entre 60% y 100% asociada a un ingrediente activo tal como una proteína como una porina (por ejemplo la proteína rPor8) o la proteína MIP. Preferiblemente, la nanopartícula está asociada a una secuencia de aminoácido que comprende la proteína potenciadora de la infectividad a macrófagos (MIP) o a una parte inmunogénica de la misma o de un análogo de la misma, donde dicha secuencia aminoacídica es capaz de provocar una respuesta inmune protectora cuando se administra a un ser humano.

En un aspecto preferido del primer aspecto de la invención, la composición es capaz de provocar una respuesta inmune contra una ó más cepas de N. meningitidis serogrupo 8 , cepas de N. meningitidis serogrupo A, cepas de N. meningitidis serogrupo X, cepas de N.

lOEn otro aspecto preferido del primer aspecto de la invención o de cualquiera de los aspectos meningitidis serogrupo e, cepas de N. meningitidis serogrupo W135, cepas de N. meningitidis serogrupo Y y cepas de N. gonorrhoeae. En otro aspecto preferido del primer aspecto de la invención o de cualquiera de los aspectos preferidos del mismo, la respuesta inmune protectora producida afecta a la capacidad de N. meningitidis para infectar un animal inmunizado.

En otro aspecto preferido del primer aspecto de la invención o de cualquiera de los aspectos preferidos del mismo, la proteína MIP es una proteína recombinante.

preferidos del mismo, la proteína MIP tiene una secuencia con al menos el 50% de identidad con la secuencia SEQ ID No: 1, preferiblemente 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad con la secuencia de SEQ ID No:1. En otro aspecto preferido del primer aspecto de la invención, la proteína MIP consiste en la secuencia SEO ID No: 1.

En otro aspecto preferido del primer aspecto de la invención o de cualquiera de los aspectos preferidos del mismo, la composición además comprende uno o más antígenos además de... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunogénica que comprende una nanopartícula que comprende un éster de sorbitán en una proporción en peso de entre 60% y 100% asociada a una secuencia de aminoácidos que comprende la proteína potenciadora de la infectividad a maerólagos (MIP) .

2. La composición según la reivindicación anterior donde la proteína MIP es una proteína recombinante. 10

3. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde la proteína MIP tiene una secuencia con al menos el 50% de identidad con la secuencia Seq ID No: 1.

4. La composición según cualquiera de las revindicaciones 1-4 donde la proteína MIP tiene una secuencia con al menos el 90% de identidad con la Secuencia ID No:1.

5. La composición según cualquiera de las revindicaciones 1-2 donde la proteína MIP consiste en la secuencia de Secuencia ID No:1.

6. La composición según cualquiera de las revindicaciones anteriores que además comprende uno o más antígenos además de la proteína MIP.

7. La composición según cualquiera de las revindicaciones anteriores donde las

nanopartículas están caracterizadas por ser una matriz homogénea, el tamaño medio de las cuales está comprendido entre 50 y 600 nm.

8. La composición según cualquiera de las revindicaciones 1-7, donde el ester de sorbitán se selecciona del grupo que consiste en mono-, di-, tri-o sesqui-oleato de sorbitán, mono-, di-, tri-o sesqui-Iaurato de sorbitán, mono-, di-, tri-o sesquipalmitato de sorbitán, mono-, di-, tri-o sesqui-estearato de sorbitán; y mono-, di-, tri

o sesqui-isoestearato de sorbitán, y sus combinaciones.

9. La composición según cualquiera de las revindicaciones anteriores, donde la 35 nanopartícula además comprende una sustancia catiónica.

10. La composición según la reivindicación 9, donde la sustancia catiónica se selecciona de sales amónicas, polímeros catiónicos y aminas grasas o lipofílicas.

. La composición según la revindicación 9, donde la sustancia catiónica se selecciona de entre betaína, protamina, ácido poliglutámico, dextrano cationizado, pullulan cationizado, poliaminoácidos, proteínas cationizadas, polisacáridos cationizados, una combinación de los mismos y sus sales.

12. La composición según la revindicación 9, donde la sustancia catiónica es oleilamina.

13. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde dicha composición está en forma liofilizada.

14. Una composición farmacéutica que comprende la composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores y un vehículo o excipiente farmacéutica mente aceptable.

15. Una composición vacunal que comprende la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-13.

16. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-13 para la fabricación de una composición vacunal para tratar o prevenir una infección de N. meningitidis y/o Neisseria gonorrhoeae.

17. El uso según la reivindicación 16, donde la composición vacunal se usa para la prevención de una infección de N. meningitidis serogrupo B y/o serogrupo A y/o serogrupo e y/o serogrupo W135 y/o serogrupo Y.

18. Un kit para uso en la inducción de una respuesta inmune en un organismo, que comprende una composición inmunogénica o vacunal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 y opcionalmente instrucciones relacionadas con la administración.