Inmunización contra el serogrupo y del meningococo usando proteínas.

Una composición que comprende uno o más polipéptidos inmunogénicos de Neisseria meningitidis serogrupo Bpara su uso en un método de inmunización de un sujeto contra infección por serogrupo Y de Neisseria meningitidis,

en la que los polipéptidos incluyen 1, 2, ó 3 de:

(i) una proteína NadA, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 2 o (b) comprende un fragmento de almenos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 1, donde el fragmento comprende un epítope;

(ii) una proteína "741", que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 3 o (b) comprende un fragmento de almenos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 3, donde el fragmento comprende un epítope;

y/o

(iii) una proteína "287", que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 6 o (b) comprende un fragmento de almenos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 6, donde el fragmento comprende un epítope;

Inmunización contra el serogrupo y del meningococo usando proteínas

CAMPO TÉCNICO

La presente invención está en los campos de inmunología y vacunología. En particular, se refiere a antígenos de Neisseria meningitidis (meningococo) y su uso en la inmunización.

TÉCNICA ANTERIOR

N. meningitidis es un patógeno humano Gram-negativo no móvil que coloniza la faringe y causa meningitis (y, ocasionalmente, septicemia en ausencia de meningitis) . Causa trastornos endémicos y epidémicos. Después de la introducción de la vacuna conjugada contra Haemophilus influenzae, N. meningitidis en la principal causa de meningitis bacteriana en los Estados Unidos de América.

En base al polisacárido capsular del organismo, se han identificado varios serogrupos de N. meningitidis. El serogrupo A es el patógeno que con más frecuencia está implicado en enfermedad epidémica en África subsahariana. Los serogrupos B y C son los responsables de la amplia variedad de casos en los Estados Unidos de América y en la mayoría de los países desarrollados. Los serogrupos W135 e Y son los responsables del resto de los casos en los Estados Unidos de América y países desarrollados. Después del serogrupo, la clasificación incluye el serotipo, serosubtipo y después el inmunotipo, y la nomenclatura estándar enumera el serogrupo, serotipo, serosubtipo e inmunotipo, cada uno separado por dos puntos, por ejemplo, B:4:P1.15:L3, 7, 9. Dentro del serogrupo B, algunos linajes causan a menudo enfermedad (hiperinvasivos) , algunos linajes causan formas más severas de enfermedad que otras (hipervirulentos) , y otros rara vez causan enfermedad. Se reconocen siete linajes hipervirulentos, concretamente los subgrupos I, II y IV-1, el complejo ET-5, el complejo ET-37, la agrupación A4 y el linaje 3. Estos se han reconocido por electroforesis de enzima multilocus (MLEE) , pero también se ha usado la tipificación de secuencia multilocus (MLST) para clasificar meningococos [ref. 1].

Hasta la fecha, las vacunas contra el serogrupo A, C, W135 e Y han usado sus sacáridos capsulares como antígenos. Una vacuna polisacárida humana autorizada contra estos cuatro serogrupos se ha conocido durante muchos años [2, 3]. Más recientemente, el enfoque ha permanecido sobre los sacáridos, pero la conjugación con proteínas portadoras. Las vacunas conjugadas contra el serogrupo C se han aprobado para uso humano, e incluyen Menjugate™ [4], Meningitec™ y NeisVac-C™. Las mezclas de conjugados de los serogrupos A+C son conocidos [5, 6] y de los serogrupos A+C+W135+Y se han presentado [7, 10].

El sacárido capsular del serogrupo B no puede usarse para vacunación porque es un autoantígeno en humanos. Los sacáridos del serogrupo químicamente modificado B se han presentado [11] pero no se han adoptado para uso clínico. Las vacunas basadas en las vesículas de membrana externa también se han probado [por ejemplo, véase la ref. 34], pero la protección proporcionada por estas vacunas típicamente se limita a la cepa usada para hacer la vacuna. Las secuencias del genoma para los serogrupos A [12] y B [13, 14] se han presentado, y la secuencia del serogrupo B se ha estudiado para identificar los antígenos de la vacuna [por ejemplo, refs. 15 a 20]. Los antígenos candidatos se han manipulado para mejorar la expresión heteróloga [refs. 21 a 23]

El dogma establecido para meningococo es por lo tanto que la inmunización contra los serogrupos A, C, W135 e Y se basará en cuatro sacáridos capsulares diferentes, y que la inmunización contra el serogrupo B no se basará en el sacárido capsular.

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

A diferencia de este dogma, los inventores han descubierto que la inmunización contra los serogrupos A, C, W135 e Y (y contra el serogrupo Y en particular) puede conseguirse usando antígenos de polipéptido. Además, han descubierto que los polipétidos del serogrupo B pueden conseguir esta protección, permitiendo de este modo una única vacuna con base de polipéptido que se usará para la protección contra todos los serogrupos A, B, C, W135 e Y.

De este modo la invención proporciona un método de inmunización de un sujeto contra la infección por el serogrupo Y de Neisseria meningitidis, que comprende la administración al sujeto de la composición como la definida en las reivindicaciones. Similarmente, la invención proporciona el uso de uno o más polipéptidos inmunogénicos en la fabricación de un medicamento para inmunizar un sujeto contra la infección por el serogrupo Y de N.meningitidis.

Las composiciones y usos son preferentemente para inmunizar un sujeto contra la infección por el serogrupo Y y también contra al menos uno de los serogrupos A, B, C y W135. Cuando un sujeto se inmunizada contra un serogrupo dado de meningococo entonces la composición preferentemente no incluye un sacárido capsular de ese serogrupo (bien conjugado o no conjugado) . De este modo las composiciones preferentes no incluyen un sacárido capsular del serogrupo Y, y también pueden non incluir un sacárido capsular de los serogrupos A, B, C y/o W135.

Las composiciones para su uso de acuerdo con la invención pueden prepararse usando técnicas conocidas, tales como técnicas para preparar antígenos de polipéptidos meningocócicos desvelados en las referencias 15-24, o las técnicas conocidas para preparar OMVs desveladas en las referencias 34-38. El uso de antígenos de polipéptido purificado es preferente al uso de vesículas de membrana externa.

Las vacunas contra patógenos tales como el virus de la hepatitis B, difteria y tétano típicamente contienen un único antígeno de proteína (por ejemplo, el antígeno de proteína de VHB, o un toxoide tetánico) . Por el contrario, las vacunas de tos ferina acelular típicamente contienen al menos tres proteínas B.pertussis y la vacuna neumocócica Prevenar™ contiene siete antígenos sacáridos conjugados separados. Otras vacunas tales como las vacunas de tos ferina celulares, la vacuna del sarampión y la vacuna de polio inactivada (VPI) y las vacunas OMV meningocócicas son por su propia naturaleza mezclas complejas de un gran número de antígenos. Aunque la protección puede obtenerse por un único antígeno, un pequeño número de antígenos definidos, o una mezcla compleja de antígenos indefinidos, depende por lo tanto de un número de factores.

El (los) polipétido (s) inmunogénico (s)

La invención supone la administración de al menos un polipéptido inmunogénico a sujetos con el fin de proporcionar protección contra infección de Neisseria meningitidis. Estos polipéptidos inmunogénicos incluyen secuencias de aminoácido meningocócico, tales como secuencias de aminoácido encontradas en las cepas del serogrupo B, tales como la cepa secuenciada MC58 [13].

Puede usarse un pequeño número de antígenos definidos. Más que consistir en un único antígeno, es por lo tanto preferente que la composición de la invención comprenda una mezcla de 10 o menos (por ejemplo, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2) antígenos purificados, y es particularmente preferente que la composición no incluya mezclas complejas o indefinidas de antígenos, por ejemplo, es preferente no incluir vesículas de membrana externa en la composición.

Los polipéptidos inmunogénicos preferentes para su uso con la invención son aquellos desvelados en la referencia 24: (1) una proteína “NadA”; (2) una proteína “741”; (3) una proteína (936) ; (4) una proteína (953) ; y (5) una proteína “287”. Estos antígenos se refieren en el presente documento como los “cinco antígenos básicos”. La invención también puede usar 1, 2, 3, 4 o los 5 de estos antígenos, siempre y cuando al menos se use uno de NadA, “741” y “287”.

Proteína NadA

“NadA” (adhesina A de Neisseria) del serogrupo B de N. meningitidis se desvela como proteína “961” en la referencia 17 (SEC IDs 2943 & 2944) y como “NMB1994” en la referencia 13 (véase también los números de acceso de GenBank: 11352904 & 7227256) . Una descripción detallada de la proteína puede encontrarse en la referencia 25. No se vio proteína correspondiente en el genoma del serogrupo A [2, 25], pero se han presentado cepas del serogrupo A NadA+ desde [25].

Cuando se usó de acuerdo con la presente invención, NadA puede tomar diferentes formas. Las formas preferentes de NadA son las variantes de truncamiento o supresión, tales como las desveladas en las referencias 21 a 23. En particular, NadA sin su ancla a la membrana de terminal C es preferente (por ejemplo, la supresión de residuos 351405 para la cepa 2996 (SEQ ID NO: 1) , que algunas veces se distingue en el presente... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende uno o más polipéptidos inmunogénicos de Neisseria meningitidis serogrupo B para su uso en un método de inmunización de un sujeto contra infección por serogrupo Y de Neisseria meningitidis, en la que los polipéptidos incluyen 1, 2, ó 3 de:

(i) una proteína NadA, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 2 o (b) comprende un fragmento de al menos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 1, donde el fragmento comprende un epítope;

(ii) una proteína “741”, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 3 o (b) comprende un fragmento de al menos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 3, donde el fragmento comprende un epítope;

y/o

(iii) una proteína “287”, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 6 o (b) comprende un fragmento de al menos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 6, donde el fragmento comprende un epítope;

2. La composición de la reivindicación 1 para su uso en la reivindicación 1, que comprende la proteína NadA, la proteína “741”, la proteína “287”, y:

(iv) una proteína “936”, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 4 o (b) comprende un fragmento de al menos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 4, donde el fragmento comprende un epítope; y

(v) una proteína “953”, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 5 o (b) comprende un fragmento de al menos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 5, donde el fragmento comprende un epítope;

3. La composición de la reivindicación 2 para su uso como en la reivindicación 2, que comprende una preparación de vesícula de membrana externa a partir de N. meingitidis serogrupo B.

4. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como en cualquier reivindicación precedente, donde la composición incluye un polipéptido que tiene secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 2.

5. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como en cualquier reivindicación precedente, donde la composición incluye un polipéptido que tiene secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 7.

6. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como en cualquier reivindicación precedente, donde la composición incluye un polipéptido que tiene secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 8.

7. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como en cualquier reivindicación precedente, donde la composición incluye más de una variante de proteína “741”.

8. La composición de la reivindicación 7 para su uso como en la reivindicación 7, que incluye al menos dos de: (a) una primera proteína, que comprende una secuencia de aminoácido que tiene al menos 85% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 10; (2) una segunda proteína, que comprende una secuencia de aminoácido que tiene al menos 85% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 11; y (3) una tercera proteína, que comprende una secuencia de aminoácido que tiene al menos 85% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 12.

9. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como en cualquier reivindicación precedente, donde la composición incluye un adyuvante de hidróxido de aluminio.

10. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como en cualquier reivindicación precedente, donde la composición incluye un adyuvante de fosfato de aluminio.

11. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como en cualquier reivindicación precedente y también para su uso en la inmunización de un sujeto contra infección de serogrupo A, B, C y/o W135 o N. meningitidis.

12. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como en cualquier reivindicación precedente, donde dicha composición no incluye un sacárido capsular del serogrupo Y.

13. El uso de uno o más polipéptidos inmunogénicos de Neisseria meningitidis serogrupo B en la fabricación de un medicamento para inmunizar un sujeto contra infección por serogrupo Y de Neisseria meningitidis, donde los polipéptidos incluyen 1, 2 ó 3 de:

(i) una proteína NadA, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 2 o (b) comprende un fragmento de al menos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 1, donde el fragmento comprende un epítope;

(ii) una proteína “741”, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 3 o (b) comprende un fragmento de al 5 menos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 3, donde el fragmento comprende un epítope;

y/o

(iii) una proteína “287”, que (a) tiene 80% o más identidad con SEQ ID NO: 6 o (b) comprende un fragmento de al 10 menos 20 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 6, donde el fragmento comprende un epítope.

14. El uso de la reivindicación 13, donde el medicamento es una composición como la definida en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 10.

15. El uso de la reivindicación 13 o reivindicación 14, en la fabricación de un medicamento para inmunizar un sujeto también contra infección por el serogrupo A, B, C y/o W135 o N. meningitidis.