FRACCION DE QUIL A CON BAJA TOXICIDAD Y SU USO.

Uso de la fracción A de Quil A integrada en una partícula iscom junto con al menos otro adyuvante con capacidad inmunomodulador en forma libre o integrado en otra partícula iscom distinta para la preparación de una composición adyuvante con efecto sinérgico que incluye el potenciamiento de las respuestas inmunes y la actividad inmunomoduladora,

facilitando el uso del otro adyuvante, que cuando se usa solo puede ser tóxico en dosis que son eficaces

Fracción de Quil A con baja toxicidad y su uso.

Campo de la invención

La presente invención se refiere al uso de la fracción A de Quil A integrada en una partícula iscom junto con al menos otro adyuvante para la preparación de una composición adyuvante con efectos sinérgicos que incluyen el nivel de respuestas inmunes y la actividad inmunomoduladora.

Técnica anterior

Existe una gran necesidad de sistemas de administración de adyuvantes y vacunas eficaces tanto para hombres como para animales a usar para inmunoprofilaxia o para inmunoterapia. Para las vacunas animales existen numerosos adyuvantes diferentes entre los que se incluyen vacunas adyuvadas con iscom y matriz de iscom. Sin embargo, únicamente los adyuvantes de hidróxido de aluminio y fosfato de calcio están comercialmente disponibles para vacunas humanas, y se ha registrado recientemente un adyuvante de emulsión en aceite (MF59) para una vacuna de gripe humana. De esta manera, existe una carencia de adyuvantes eficaces, particularmente para vacunas humanas. Los adyuvantes no son sólo importantes para potenciar el nivel de la respuesta inmune sino aún más para la calidad o tipo de respuesta inmune, que se debe corresponder con el tipo de infección contra la que se pretende que la vacuna proteja. Con respecto a los patógenos que se establecen por sí mismos en el interior de la célula al igual que los virus, pero también algunas bacterias y parásitos, se requiere una respuesta inmune del tipo denominado Th1 para una protección inmune óptima, y en muchos casos, una respuesta de tipo Th1 es un requisito previo para la protección inmune. Sin embargo, en la actualidad también se ha establecido, que un tipo de respuesta Th1 o Th2 puro puede producir efectos secundarios, debido a que se necesita un equilibrio entre los dos tipos de células T auxiliares para la regulación inmune. Es decir, la respuesta Th1 regula la respuesta Th2 por ejemplo mediante la producción de IFN-? y la respuesta Th1 está regulada por la respuesta Th2 por ejemplo mediante la producción de la citoquina IL10. De esta manera, el equilibrio Th1-Th2 es esencial para evitar efectos secundarios. Para ser capaces de inducir el tipo correcto de respuesta inmune para la protección contra los diversos patógenos se requerirán numerosos adyuvantes. Una respuesta Th1 se refleja una por la respuesta de los anticuerpos IgG2a, y por tanto se usa como marcador de la respuesta Th1 de la célula t auxiliar. Un aspecto importante de los adyuvantes es la seguridad que incluye el hecho de que la respuesta inmune evocada debería tener una calidad que evite efectos secundarios cuando se produce una infección posterior tras la vacunación. Aparecieron efectos secundarios graves en el caso del virus respiratorio sincitial cuando una vacuna del virus respiratorio (VRS) inactivado con formalina adyuvada con hidróxido de aluminio se ensayó en niños hace aproximadamente 30 años. Los niños vacunados enfermaron y se produjo entre ellos un índice de mortalidad mayor tras la infección natural con VRS que en los niños no vacunados.

Toxicidad aguda o efectos secundarios han sido los riesgos principales en el uso veterinario y particularmente humano de las saponinas de Quillaja en las preparaciones de vacunas. Estos objetivos fueron sólo parcialmente conseguidos con éxito, las fracciones purificadas, por ejemplo, QA-21 (documento EP 0 362 279 B2) y las combinaciones de las fracciones A y C (documento WO 96/11711, patente de Iscotec se definieron químicamente, de hecho, en comparación con la "Quillaja Saponaria Molina", pero siguen produciendo cierta alguna toxicidad y efectos secundarios.

Ha resultados ahora que la fracción A de Quil A tiene baja toxicidad, y en una dosis baja potencia el nivel de respuestas inmunes y la capacidad inmunomoduladora de otros adyuvantes en dosis subóptimas, que cuando se usan por sí mismos pueden ser tóxicos o producir efectos secundarios en dosis eficaces. De esta manera, esto facilita el uso de otros adyuvantes que, cuando se usan por sí mismos, pueden ser tóxicos en dosis que son eficaces.

Resumen de la invención

La presente invención es el uso de la fracción A de Quil A integrada en una partícula iscom junto con al menos otro adyuvante para la preparación de una composición adyuvante con efectos sinérgicos para potenciar el nivel de respuestas inmunes y actividad inmunomoduladora tal como se define en las reivindicaciones. (Esta invención se refiere especialmente al uso de la fracción A de Quil A en una composición que comprende partículas iscom en la que se integran diferentes fracciones de Quil A en diferentes partículas iscom y de matriz de iscom).

Descripción de los dibujos

Fig 1-1

Una dosis elevada (50 µg) de QHC en la matriz es tóxica, mientras que una dosis elevada de QWT en la matriz no es tóxica cuando se suplementa a OVA para potenciar la respuesta del anticuerpo en ratones Balb/C (véase el texto). Ambas formulaciones potencian respuestas similares de anticuerpos específicos contra OVA tal como se midió mediante ELISA tres semanas después de la segunda inmunización para la respuesta de IgG total (A) y en el subtipo IgG2a (B).

Fig 1-2

Efectos sinérgicos de matriz-QWT y matriz-QHX cuando se suplementan a OVA para potenciar la respuesta del anticuerpo en ratones Balb/C (véase el texto). La dosis de matriz-QWT y matriz-QHC osciló como sigue en el grupo 1, sin QWT ni C; Gr. 2, 0,3 µg QWT sin C; Gr. 3, 0,3 µg QWT + 2 µg C; Gr. 4, 10 µg QWT sin C; Gr. 5, 10 µg QWT 2 µg C. La dosis de OVA fue de 10 µg. Hubo 8 ratones por grupo, que se inmunizaron dos veces con 4 semanas de separación s.c con la formulación respectiva. Se midieron los títulos de anticuerpo mediante ELISA contra OVA:

A IgG total 3 semanas después de la primera inmunización

B IgG2a 2 semanas después de la segunda inmunización

C IgG1 2 semanas después de la segunda inmunización

Fig 2-1

Toxicidad de QWT y AC (es decir, 703) de las iscom del virus respiratorio sincitial (VRS) medida mediante el índice de supervivencia en ratones recién nacidos (1 semana de edad) tras una inyección intraperitoneal con 1 µg de iscom (proteína). La relación proteína/saponina es 1/1.

Fig 3-1

Respuesta de anticuerpos en ratones recién nacidos (1 semana de edad) y adultos tras una inmunización intraperitoneal y un refuerzo posterior después de 3 semanas con 1 µg de iscom (proteína). La relación proteína/saponina es 1/1.

Fig 4-1

Respuesta de las células T citotóxicas (CTL) tras una inmunización intraperitoneal con 1 µg de iscom (proteína). La relación proteína/saponina es 1/1. Se recogieron las células de bazo 1 y 3 semanas después de la inmunización intraperitoneal.

Fig 5-1

La matriz QWT es menos tóxica en células VERO (una línea celular de mono) que la matriz 703 y la matriz C tras la exposición durante 72 h en cultivo medido mediante la velocidad de crecimiento proporcional (%) en cultivos no expuestos. La matriz QWT es bien tolerada a todas las concentraciones ensayadas, es decir, hasta 1300 µg. No se registró crecimiento en cultivos expuestos a 800 µg de matriz 703 o 45 µg de matriz QHC.

1. Uso de la fracción A de Quil A integrada en una partícula iscom junto con al menos otro adyuvante con capacidad inmunomodulador en forma libre o integrado en otra partícula iscom distinta para la preparación de una composición adyuvante con efecto sinérgico que incluye el potenciamiento de las respuestas inmunes y la actividad inmunomoduladora, facilitando el uso del otro adyuvante, que cuando se usa solo puede ser tóxico en dosis que son eficaces.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el que el al menos otro adyuvante se escoge entre saponinas, que se producen naturalmente, moléculas de saponina sintética o semisintética derivadas del extracto bruto de saponina de Quillaja saponaria Molina escogido entre las fracciones de C, el B B3, B4 y B4b y QA-1, QA-2, QA-3, QA-4, QA-5, QA-6, QA-7, QA-8, QA-9, QA-10, QA-11, QA-12, QA-13, QA-14, QA-15, QA-16, QA-17, QA-18, QA-19, QA-20 QA-22, el esqueleto de la pared celular, polímeros en bloque, por ejemplo, copolímeros en bloque hidrófilos, por ejemplo, CRL-1005, TDM (Dimicolato de trehalosa), lipopéptidos, LPS y derivados de LPS, el Lípido A de diferentes especies bacterianas y sus derivados, por ejemplo, monofosforil lípido A, variantes de CpG, variantes de Cp-GODN, inmunomoduladores animales humanos endógenos, por ejemplo, GM-CSF, IL-2, adyuvante de toxinas bacterianas activas, por ejemplo, la toxina del cólera TC, y sus subcomponente TCB y TCA1, toxina termolábil (TL) de E. coli, o toxina de Bordetella pertussis (BP) y el filamento de hemaglutinina de BP.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la fracción de saponina de Quil A se escoge a partir de la fracción C o B de Quil A.

4. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que al menos otro adyuvante se integra en una partícula iscom.

5. El uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el al menos otro adyuvante se integra en partículas iscom distintas.

6. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la fracción A de Quil A se integra en una partícula iscom y al menos otro adyuvante está libre y no integrado en ninguna partícula iscom.

7. Uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que al menos otro adyuvante que está libre y no integrado en ninguna partícula iscom es monofosforil lípido A y/o la toxina del cólera TC.

8. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que la partícula iscom es un complejo iscom.

9. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que la partícula iscom es un complejo de matriz de iscom.

10. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que la composición comprende además un vehículo, diluyente, excipiente o aditivo farmacéuticamente aceptable.