Fracción de bajo peso molecular de un hidrolizado de lactoferrina para el tratamiento de la hipertensión.

La invención se refiere a un método para obtener la fracción de paso molecular inferior a 3000 Da de un hidrolizado de lactoferrina, el cual comprende diversos péptidos. La invención también engloba la fracción del hidrolizado de lactoferrina obtenible por dicho método y algunos de los péptidos que incluye, así como al uso de dicha fracción y péptidos para la elaboración de medicamentos para la prevención y/o el tratamiento de la hipertensión, así como alimentos o suplementos alimenticios.

Fraccion de bajo peso molecular de un hidrolizado de lactoferrina para el tratamiento de la hipertension.

La presente invencion se encuadra dentro del campo de la biotecnologia y la biomedicina. Especificamente, se refiere a un metodo para obtener la fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da de un hidrolizado de lactoferrina, que comprende diversos peptidos. Tambien se refiere a la fraccion obtenible por este metodo, asi como a algunos de los peptidos contenidos en dicha fraccion y al uso de esta fraccion o de los peptidos para la elaboracion de medicamentos para la prevencion y/o el tratamiento de la hipertension, alimentos o suplementos alimenticios.

ESTADO DE LA TECNICA ANTERIOR

La hipertension consiste en un aumento de la presion sanguinea por encima de unos niveles deseables, ya que este aumento conlleva riesgos para la salud. Esta hipertension lleva asociado un aumento de la mortalidad de forma prematura en los individuos que la padecen (Giles 2009. J G1in Hypertens 11 (11) :611-614) .

Uno de los mayores problemas generados por la hipertension son los accidentes cerebrovasculares. Dentro de estos, el accidente cerebrovascular agudo (o ictus) es el mas importante, ya que supone la tercera causa de mortalidad (tras el cancer y las enfermedades isquemicas cardiacas) y la primera de incapacidad permanente en las sociedades avanzadas. Este ictus puede ser producido fundamentalmente por un trombo (trombosis) o p or un embolo (embolia) en una arteria cerebral, lo que produce un descenso de la irrigacion sanguinea (isquemia) y por tanto la necrotizacion y muerte del tejido (infarto) que se queda sin irrigacion. Tambien puede ser producido por la rotura de un vaso sanguineo en el parenquima cerebral (hemorragia intracerebral) o en la superficie cerebral (hemorragia subaracnoidea) .

Otras posibles complicaciones producidas por la hipertension son por ejemplo hipertrofia ventricular, fibrosis miocardica, disfuncion sistolica ventricular, disfuncion diastolica ventricular, isquemia renal, fibrosis tubulo-intersticial del parenquima renal, glomeruloesclerosis focal, o aterosclerosis.

El tratamiento prolongado de disminucion de la presion sanguinea mediante cambios en el estilo de vida o mediante tratamientos farmacologicos esta asociado con reduccion en el riesgo de padecer infarto (30-40%) y sucesos coronarios (20%) y parece que tambien reduce la incidencia de otras complicaciones.

Dado que se han relacionado alteraciones en el sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRA) con la hipertension, se han desarrollado medicamentos antihipertensivos que utilizan como diana diferentes componentes de este sistema, como por ejemplo inhibidores de renina, inhibidores de la enzima conversora de angiotensina (EGA) , bloqueantes de los receptores de angiotensina o antagonistas del receptor de aldosterona (Williams B 2009. J Hypertens 27 (3) :S19-26) . Ejemplos de estos farmacos serian por ejemplo el captopril o el enalapril, los cuales son inhibidores de EGA. Estos farmacos pueden presentar efectos secundarios como tos seca, angioedema, cefaleas, sensacion de inestabilidad, fatiga, hipotension o astenia.

Debido a la necesidad en muchos de los casos no solo de administrar un farmaco, sino de cambiar los habitos de vida de los pacientes, se ha tratado de buscar nuevos compuestos que sirvan para el tratamiento de la hipertension que tengan un mayor numero de a plicaciones, como por ejemplo que se encuentren incluidos en alimentos funcionales, a parte de su aplicacion directa como farmacos. En este sentido se han utilizado tanto peptidos antihipertensivos derivados de proteinas de plantas y animales tales como leche, soja o pescado, como peptidos sinteticos que mimetizan estos peptidos naturales o peptidos disenados de novo. Dichos peptidos pueden ser producidos, por ejemplo, mediante la hidrolisis enzimatica de las proteinas precursoras durante el procesamiento de los alimentos y la digestion. Estos peptidos pueden ser incorporados en alimentos para el desarrollo de productos funcionales beneficiosos para la salud. En la actualidad, existen en el mercado o en desarrollo diversos productos que contienen estos peptidos bioactivos. Sin embargo, a pesar de estos desarrollos, los ensayos clinicos realizados hasta el momento con varios peptidos no han indicado un claro efecto beneficioso en todos los pacientes hipertensos (Engberink MF et a1 2008. Hypertension 51 (2) :399-405; De Leo et a1 2009. Gurr Pharm Des 15 (31) :36223643) .

Dado que los farmacos utilizados en la actualidad pueden producir efectos secundarios y los ensayos clinicos realizados con peptidos hasta la fecha no demuestran un claro efecto antihipertensivo, se hace necesaria una mejora en los medicamentos para controlar la hipertension.

DESCRIPCION DE LA INVENCION

La presente invencion se refiere a un metodo de obtencion de la fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da de un hidrolizado de lactoferrina bovina (LF) , asi como a la propia fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da de un hidrolizado de lactoferrina obtenible por dicho metodo. La presente invencion tambien se refiere a algunos de los peptidos contenidos en dicha fraccion. Esta fraccion, al igual que los peptidos que comprende, puede ser utilizada para la elaboracion de medicamentos, preferiblemente para la prevencion y/o el tratamiento de la hipertension, asi como para la elaboracion de alimentos funcionales o suplementos alimenticios. La presente invencion tambien se refiere a alimentos o composiciones que comprenden la fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da de un

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hidrolizado de lactoferrina bovina (LF) o algunos de los peptidos que comprende.

En la presente invencion se demuestra que la fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da de un hidrolizado de lactoferrina bovina producido mediante hidrolisis con pepsina, presenta actividad antihipertensiva "in vivo". Gomo se observa en los ejemplos de la presente invencion, este efecto antihipertensivo no se produce en caso de utilizar un hidrolizado de l actoferrina co mpleto, si n se leccionar ni nguna de su s fracciones. E ste ef ecto pu ede se r deb ido fundamentalmente a la eliminacion de compuestos que interfieren o presentan un efecto antagonico a la capacidad hipotensora de peptidos de pequeno tamano, o a la mayor concentracion de estos peptidos de pequeno tamano con efecto antihipertensivo en la fraccion seleccionada. Por otro lado, en la presente invencion tambien se demuestra que dentro de esta fraccion de lactoferrina bovina producida mediante hidrolisis con pepsina, existen 3 peptidos (de secuencias SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 y SEQ ID NO:11) los cuales tambien presentan capacidad antihipertensiva por si mismos.

Un hidrolizado puede ser obtenido mediante hidrolisis enzimatica o hidrolisis quimica (hidrolisis acida o hidrolisis alcalina) . No obst ante, el m etodo seleccionado par a l a realizacion de la hi drolisis confiere al producto unas caracteristicas concretas que no pueden ser obtenidas por otro metodo ya que, por ejemplo, los distintos metodos utilizados darian lugar a una hidrolisis en diferentes enlaces peptidicos de la proteina, dando por tanto diferentes caracteristicas estructurales y funcionales al producto resultante. La hidrolisis enzimatica se produce en unas condiciones mas controladas y los hidrolizados producidos son mas reproducibles, por lo que el producto resultante presenta unas mejores caracteristicas que los hidrolizados obtenidos mediante metodos quimicos. Ademas, este hidrolizado enzimatico no presenta compuestos quimicos residuales en su composicion lo que presenta ventajas a la hora de su uso frente a los hidrolizados quimicos. En la presente invencion la hidrolisis ha de ser controlada por lo que se produce mediante metodos enzimaticos.

La hidrolisis enzimatica de las proteinas puede llevarse a cabo mediante diversas enzimas activas en diferentes condiciones. Dentro d e l as enzimas proteoliticas existen diversas opciones como l as pr oteasas especificas de residuo o aquellas que degradan las proteinas inespecificamente. Entre estas enzimas, una de las mas utilizadas es la pepsina, enzima digestiva que degrada las proteinas en el estomago y que actua rompiendo de forma preferencial los enlaces peptidicos de aminoacidos hidrofobicos y aromaticos.

Posteriormente a la hidrolisis es necesario seleccionar la fraccion que presenta la actividad antihipertensivapara eliminar los posibles elementos que presenten accion contraria a la deseada o bien que interfieren con dicha accion. Esta seleccion se puede realizar por diversos metodos conocidos en el estado de la... [Seguir leyendo]

1. Metodo de obtencion de una fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da de un hidrolizado de lactoferrina bovina que comprende:

a) hidrolizar la lactoferrina bovina mediante hidrolisis con pepsina, y b) seleccionar la fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da del hidrolizado del paso (a) .

2. Metodo segun la reivindicacion 1 donde la pepsina del paso (a) es pepsina A.

3. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 donde la hidrolisis del paso (a) se realiza durante al menos 1 hora.

4. Metodo segun la reivindicacion 3 donde la hidrolisis se realiza durante entre 3 y 5 horas.

5. Metodo segun la reivindicacion 4 donde la hidrolisis se realiza durante 4 horas.

6. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde la hidrolisis del paso (a) se realiza a un pH inferior a 7.

7. Metodo segun la reivindicacion 6 donde la hidrolisis del paso (a) se realiza a un pH de entre 2 y 4.

8. Metodo segun la reivindicacion 7 donde la hidrolisis del paso (a) se realiza a un pH de 3.

9. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 donde la hidrolisis del paso (a) se realiza a una temperatura de entre 25 y 45 °G.

10. Metodo segun la reivindicacion 9 donde la hidrolisis del paso (a) se realiza a una temperatura de entre 30 y 40 °G.

11. Metodo segun la reivindicacion 10 donde la hidrolisis del paso (a) se realiza a una temperatura de 37 °G.

12. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 donde la seleccion de la fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da del paso (b) se realiza mediante ultrafiltracion.

13. Fraccion de peso molecular inferior a 3000 Da de un hidrolizado de lactoferrina obtenible por un metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.

14. Fraccion segun la reivindicacion 13 que comprende al menos uno de los peptidos de secuencia SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 o SEQ ID NO:11.

15. Fraccion segun la reivindicacion14que comprende los peptidos de secuenciaSEQID NO:9, SEQ ID NO:10, y SEQ ID NO:11.

16. Peptido de secuencia SEQ ID NO:9.

17. Peptido de secuencia SEQ ID NO:10.

18. Peptido de secuencia SEQ ID NO:11.

19. Uso de una fraccion segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 o de un peptido segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 en la elaboracion de un medicamento.

20. Uso de una fraccion segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 o de un peptido segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 en la elaboracion de un medicamento para la prevencion y/o el tratamiento de la hipertension.

21. Uso de una fraccion segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 o de un peptido segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 para la elaboracion de un alimento.

22. Uso segun la reivindicacion 21 donde el alimento es un alimento funcional.

23. Uso de una fraccion segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 o de un peptido segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 para la elaboracion de un suplemento alimenticio.

24. Gomposicion que comprende una fraccion segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 o al menos un peptido segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18.

25. Gomposicion segun la reivindicacion 24 donde la composicion es una composicion farmaceutica.

26. Alimento que comprende una fraccion segun cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 o al menos un peptido segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18.

27. Alimento segun la reivindicacion 26 donde el alimento es un alimento funcional.

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FIG. 1

FIG. 2A

2, 50 2, 00 1, 50 1, 00 0, 50 0, 00

0, 00 10, 0 20, 0 30, 00 40, 00 50, 00 60, 00 70, 00 80, 0

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FIG. 2º

F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10F11F12F13

FIG. 3