Formulación farmacéutica de anticuerpos anti-TNF-alfa.

Formulación farmacéutica acuosa líquida que tiene un pH de 4 a 8 y que comprende

(a) de 20 a 130 mg/ml de un anticuerpo anti-factor de necrosis tumoral alfa (TNFa) IgG1 humano que comprendeuna región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:

1 y una regiónvariable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2,

(b) 10-14 mg/ml de manitol,

(c) 0,1-5 mg/ml de polisorbato 80,

(d) 1-1,5 mg/ml de ácido cítrico monohidratado,

(e) 0,25-0,5 mg/ml de citrato de sodio,

(f) 1,25-1,75 mg/ml de fosfato de disodio dihidratado,

(g) 0,7-1,1 mg/ml de dihidrogenofosfato de sodio dihidratado, y

(h) 6,0-6,4 mg/ml de cloruro de sodio.

Formulación farmacéutica de anticuerpos anti-TNF-alfa

Antecedentes de la invención

El factor de necrosis tumoral α (TNFα) es una citocina producida por numerosos tipos de células, incluyendo monocitos y macrófagos, que se identificó originalmente basándose en su capacidad de inducir la necrosis de determinados tumores en ratón (véase por ejemplo, Old, L. (1985) Science 230:630-632) . Posteriormente, se demostró que un factor denominado caquectina, asociado con caquexia, era la misma molécula que TNFα. Se ha implicado a TNFα en la mediación del choque (véase por ejemplo, Beutler, B. y Cerami, A. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57:505-518; Beutler, B. y Cerami, A. (1989) Annu. Rev. Immunol. 7:625-655) . Además, se ha implicado a TNFα en la fisiopatología de una variedad de otras enfermedades y trastornos humanos, incluyendo septicemia, infecciones, enfermedades autoinmunitarias, rechazo de trasplantes y enfermedad de injerto contra huésped (véase por ejemplo, Moeller, A., et al. (1990) Cytokine 2:162-169; patente estadounidense n.º 5.231.024 de Moeller et al.; publicación de patente europea n.º 260 610 B1 de Moeller, A., et al. Vasilli, P. (1992) Annu. Rev. Immunol. 10:411452; Tracey, K.J. y Cerami, A. (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503) .

Debido al papel perjudicial del TNFα humano (hTNFα) en una variedad de trastornos humanos, se han diseñado estrategias terapéuticas para inhibir o contrarrestar la actividad de hTNFα. En particular, se han buscado anticuerpos que se unan a y neutralicen hTNFα como medio para inhibir la actividad de hTNFα. Algunos de los más tempranos de tales anticuerpos eran anticuerpos monoclonales de ratón (AcM) , secretados por hibridomas preparados a partir de linfocitos de ratones inmunizados con hTNFα (véase por ejemplo, Hahn T; et al., (1985) Proc Natl Acad Sci USA

82: 3814-3818; Liang, C-M., et al. (1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 137:847-854; Hirai, M., et al. (1987) J. Immunol. Methods 96:57-62; Fendly, B.M., et al. (1987) Hybridoma 6:359-370; Moeller, A., et al. (1990) Cytokine 2:162-169; patente estadounidense n.º 5.231.024 concedida a Moeller et al.; publicación de patente europea n.º 186 833 B1 por Wallach, D.; publicación de solicitud de patente europea n.º 218 868 A1 por Old et al.; publicación de patente europea n.º 260 610 B1 por Moeller, A., et al.) . Aunque estos anticuerpos anti-hTNFα de ratón presentaban a menudo alta afinidad por hTNFα (por ejemplo, Kd : 10-9 M) y podían neutralizar la actividad de hTNFα, su uso in vivo puede estar limitado por problemas asociados con la administración de anticuerpos de ratón a seres humanos, tales como semivida sérica corta, una incapacidad para desencadenar determinadas funciones efectoras humanas y la generación de una respuesta inmunitaria no deseada contra el anticuerpo de ratón en un ser humano (la reacción “anti-anticuerpo de ratón humana” (HAMA) ) .

En un intento de superar los problemas asociados con el uso de anticuerpos totalmente murinos en seres humanos, se han modificado por ingeniería genética anticuerpos anti-hTNFα murinos para que sean más “de tipo humano”. Por ejemplo, se han preparado anticuerpos quiméricos, en los que las regiones variables de las cadenas de anticuerpos se derivan de ratón y las regiones constantes de las cadenas de anticuerpos se derivan de ser humano, (Knight, D.M, et al. (1993) Mol. Immunol. 30:1443-1453; publicación PCT n.º WO 92/16553 por Daddona, P.E., et al.) . Adicionalmente, también se han preparado anticuerpos humanizados, en los que los dominios hipervariables de las regiones variables de anticuerpos se derivan de ratón pero el resto de las regiones variables y las regiones constantes de anticuerpos se derivan de ser humano (publicación PCT n.º WO 92/11383 por Adair, J.R., et al.) . Sin embargo, debido a que estos anticuerpos humanizados y quiméricos todavía conservan algunas secuencias murinas, todavía pueden provocar una reacción inmunitaria no deseada, la reacción anti-anticuerpo quimérico humana (HACA) , especialmente cuando se administra durante periodos prolongados, por ejemplo, para indicaciones crónicas, tales como artritis reumatoide (véase por ejemplo, Elliott, M.J., et al. (1994) Lancet 344:1125-1127; Elliot, M.J., et al. (1994) Lancet 344:1105-1110) .

Un agente inhibidor de hTNFα preferido para AcM murinos o derivados de los mismos (por ejemplo, anticuerpos humanizados o quiméricos) podría ser un anticuerpo anti-hTNFα completamente humano, ya que un agente de ese tipo no debe provocar la reacción HAMA, incluso si se usa durante periodos prolongados. Se han preparado autoanticuerpos monoclonales humanos contra hTNFα usando técnicas de hibridoma humano (Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:556-568; Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152: 569-581; publicación de solicitud de patente europea n.º 614 984 A2 por Boyle, et al.) . Sin embargo, se notificó que estos autoanticuerpos monoclonales derivados de hibridoma tenían una afinidad por hTNFα que era demasiado baja como para calcularse mediante métodos convencionales, no podían unirse a hTNFα soluble y no podían neutralizar la citotoxicidad inducida por hTNFα (véase Boyle, et al.; citado anteriormente) . Además, el éxito de la técnica de hibridoma humano depende de la presencia natural en la sangre periférica humana de linfocitos que producen autoanticuerpos específicos para hTNFα. Determinados estudios han detectado autoanticuerpos séricos contra hTNFα en sujetos humanos (Fomsgaard, A., et al. (1989) Scand. J. Immunol. 30:219-223; Bendtzen, K., et al. (1990) Prog. Leukocyte Biol. 10B:447-452) , mientras que otros no (Leusch, H-G., et al. (1991) J. Immunol. Methods 139:145-147) .

Una alternativa a los anticuerpos anti-hTNFα humanos que se producen de manera natural sería un anticuerpo

frente a hTNFα recombinante. Se han descrito anticuerpos humanos recombinantes que se unen a hTNFα con afinidad relativamente baja (es decir, Kd ~10-7 M) y una velocidad de disociación rápida (es decir, Kdisociación ~ 10-2 s-1) (Griffiths, A.D., et al. (1993) EMBO J. 12:725-734) . Sin embargo, debido a su cinética de disociación relativamente rápida, estos anticuerpos pueden no ser adecuados para uso terapéutico. Adicionalmente, se ha descrito un anticuerpo anti-hTNFα humano recombinante no neutraliza la actividad de hTNFα, sino que más bien potencia la unión de hTNFα a la superficie de células y potencia la internalización de hTNFα (Lidbur y , A., et al. (1994) Biotechnol. Ther. 5:27-45; publicación PCT n.º WO 92/03145 por Aston, R. et al.)

También se han descrito anticuerpos humanos recombinantes que se unen a hTNFα soluble con afinidad alta y cinética de disociación lenta y que tienen la capacidad de neutralizar la actividad de hTNFα, incluyendo citotoxicidad inducida por hTNFα (in vitro e in vivo) y activación celular inducida por hTNFα (véase la patente estadounidense n.º 6.090.382) .

Sumario de la invención

El alcance de la presente invención se define mediante las reivindicaciones y cualquier información que no se encuentre dentro de las reivindicaciones se proporciona sólo para información. Hay una necesidad de una formulación farmacéutica acuosa estable con una vida útil prolongada, que comprenda un anticuerpo que es adecuado para uso terapéutico para inhibir o contrarrestar la actividad de hTNFα perjudicial. También hay una necesidad de una formulación farmacéutica acuosa estable con una vida útil prolongada, que comprenda un anticuerpo adecuado para uso terapéutico que se administre fácilmente y contenga una alta concentración de proteína.

En particular, la invención proporciona una formulación farmacéutica acuosa líquida que tiene un pH de 4 a 8 y que comprende

(a) de 20 a 130 mg/ml de un anticuerpo anti-factor de necrosis tumoral alfa (TNFα) IgG 1 humano que comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2,

(b) 10-14 mg/ml de manitol,

(c) 0, 1-5 mg/ml de polisorbato 80,

(d) 1-1, 5 mg/ml de ácido cítrico monohidratado,

(e) 0, 25-0, 5 mg/ml de citrato de sodio,

(f) 1, 25-1, 75 mg/ml de fosfato... [Seguir leyendo]

1. Formulación farmacéutica acuosa líquida que tiene un pH de 4 a 8 y que comprende

(a) de 20 a 130 mg/ml de un anticuerpo anti-factor de necrosis tumoral alfa (TNFα) IgG1 humano que comprende

una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una región 5 variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2,

(b) 10-14 mg/ml de manitol,

(c) 0, 1-5 mg/ml de polisorbato 80,

(d) 1-1, 5 mg/ml de ácido cítrico monohidratado,

(e) 0, 25-0, 5 mg/ml de citrato de sodio, 10 (f) 1, 25-1, 75 mg/ml de fosfato de disodio dihidratado,

(g) 0, 7-1, 1 mg/ml de dihidrogenofosfato de sodio dihidratado, y

(h) 6, 0-6, 4 mg/ml de cloruro de sodio.

2. Formulación según la reivindicación 1, en la que el pH se selecciona del grupo que consiste en entre

aproximadamente 4, 5 y aproximadamente 6, 0, entre aproximadamente 4, 8 y aproximadamente 5, 5 y entre 15 aproximadamente 5, 0 y aproximadamente 5, 2.

3. Formulación farmacéutica acuosa líquida según la reivindicación 1, que contiene

(a) aproximadamente 50 mg/ml de anticuerpo,

(b) aproximadamente 12 mg/ml de manitol, y

(c) aproximadamente 1 mg/ml de polisorbato 80.

4. Formulación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que además es adecuada para inyección subcutánea de uso único.

5. Uso de la formulación según las reivindicaciones 1 a 4, en la preparación de un medicamento para tratar un trastorno en el que la actividad de TNFα es perjudicial.