Evento de Maíz MIR162.

Una semilla transgénica del evento de maíz MIR162 tratada con un insecticida,

donde dicha semilla de maíz transgénica comprende la molécula de ácido nucleico constituida por la SEC ID NO: 49 y su complemento.

Evento de Maíz MIR162 Antecedentes

La presente invención se refiere generalmente al campo de la biología molecular de plantas, a la transformación de las plantas, y a la propagación de las plantas. De manera más especifica, la invención se refiere a plantas de maíz transgénicas resistentes a los insectos que comprenden un genotipo transgénico novedoso y a métodos para detectar la presencia de ácidos nucleicos que son únicos para las plantas de maíz transgénicas en una muestra y composiciones de estas.

Las plagas de las plantas constituyen un factor importante en la pérdida de los cultivos agrícolas importantes del mundo. Aproximadamente 8 mil millones de dólares estadounidenses se pierden por año solo en los Estados Unidos debido a infestaciones de plagas no mamíferas, que incluyen insectos. Además de estas pérdidas en los cultivos de los campos, las plagas de insectos también significan una carga para los cultivadores de vegetales y frutas, los productores de flores decorativas y para los jardineros hogareños.

Las plagas de insectos se controlan principalmente mediante aplicaciones intensivas de plaguicidas químicos, que actúan a través de la inhibición del crecimiento de los insectos, la prevención de la alimentación o reproducción de los insectos, o causan su muerte. El buen control de los insectos se puede lograr de ese modo pero estos productos químicos pueden afectar a veces a otros insectos beneficiosos. Otro problema que resulta del amplio uso de plaguicidas químicos es la aparición de variedades de insectos resistentes. Este hecho se alivió parcialmente mediante diversas prácticas de control de la resistencia, pero existe una creciente necesidad de agentes de control de plagas alternativos. Los agentes de control de plagas biológicos, como por ejemplo las cepas de Badllus thuringiensis (Bt) que expresan toxinas plaguicidas como 8-endotoxinas, también se han aplicado a las plantas de maíz con resultados satisfactorios, ofreciendo una alternativa o un complemento para los plaguicidas químicos. Los genes que codifican algunas de estas 8-endotoxinas se aislaron y se demostró que su expresión en huéspedes heterólogos proveía otra herramienta para el control de plagas de insectos importantes desde el punto de vista económico. En particular, la expresión de las 8-endotoxinas de Bt ha provisto una protección eficiente contra plagas de insectos seleccionadas, y las plantas transgénicas que expresan dichas toxinas se han comercializado, permitiendo a los granjeros reducir las aplicaciones de agentes químicos para el control de insectos.

También, se identificó otra familia de proteínas insecticidas producidas por la especie Bacillus durante la etapa de crecimiento vegetativo (proteínas insecticidas vegetativas (Vip, por sus siglas en inglés)). Las Patentes de Invención estadounidenses números 5.877.012, 6.107.279, y 6.137.033, describen una nueva clase de proteínas insecticidas denominadas Vip3. Otras descripciones, incluidas las de los documentos WO 98/18932, WO 98/33991, WO 98/00546, y WO 99/57282, ahora han identificado también homólogos de la clase Vip3 de proteínas. Las secuencias que codifican la Vip3 codifican proteínas de aproximadamente 88 kDa que poseen actividad insecticida contra un amplio espectro de plagas de lepidópteros, con inclusión, pero sin limitación, del gusano cortador negro (BCW, Agrotis Ípsilon), gusano cogollero (FAW, Spodoptera frugiperda), gusano de las yemas del tabaco (TBW, Heliothis virescens), gusano perforador de la caña de azúcar (SCB, Diatraea saccharalis), gusano saltarín perforador del tallo de maíz (LCB, Elasmopalpus lignosellus), e isoca del maíz (CEW, Helicoverpa zea), y cuando se expresan en plantas transgénicas, por ejemplo maíz (Zea mays), confieren protección a la planta contra el daño producido por la alimentación de los insectos.

Los métodos presentes de transformación de plantas generalmente conducen a la integración aleatoria de trasgenes como vip3 en un genoma de planta huésped. Esta inserción aletoria de ADN introducido en el genoma de la planta puede ser letal si resulta que el ADN extraño se inserta en un gen nativo esencialmente importante y, de esa manera, hace mutar a dicho gen. Además, incluso si un evento de inserción aleatoria no perjudica el funcionamiento de un gen de célula huésped, la expresión de un gen extraño insertado puede ser influenciada por los "efectos de posición" causados por el ADN genómico circundante. En algunos casos, el gen se inserta en sitios en los que los efectos de la posición son lo suficientemente fuertes para evitar la síntesis de una cantidad efectiva de producto del gen introducido. Por ejemplo, se ha observado en las plantas que pueden existir amplias variaciones en los niveles de expresión de un gen heterólogo introducido en el cromosoma de una planta entre eventos individualmente seleccionados. Pueden existir también diferencias en los patrones de expresión espaciales o temporales, por ejemplo diferencias en la expresión relativa de un transgen en diversos tejidos vegetales, que pueden no corresponder a los patrones esperados de los elementos reguladores transcripcionales presentes en el constructo del gen introducido. En otros casos, la sobreproducción del producto génico posee efectos perjudiciales sobre la célula. Debido a estos problemas potenciales, es común producir cientos de diferentes eventos y cribar aquellos eventos para escoger un único evento que posee patrones de expresión de transgenes y niveles deseados para fines comerciales. Sin embargo, una vez identificado el sitio comercialmente viable dentro del genoma de una planta, sería ventajoso dirigir los genes de interés a ese sitio no perjudicial.

Se han descripto varios métodos para la inserción dirigida de una secuencia de nucleótidos de interés en un sitio cromosómico específico dentro de una célula vegetal. Los sistemas de recombinación de sitio específico se han

identificado en varios organismos procariotas y eucariotas inferiores. Dichos sistemas comprenden generalmente una o más proteínas que reconocen dos copias de una secuencia de nucleótidos específica, escinden y ligan aquellas secencias de nucleótidos y proveen así un intercambio de información genética de sitio especifico preciso. Varias recombinasas de sitio específico son conocidas en la técnica. Ellas incluyen, pero sin limitación, por ejemplo el sistema del bacteriófago P1 Cre/lox (Austin et al. (1981) Cell 25: 729-736), el sistema de recominasa R/RS del plásmido pSR1 de la levadura Zygosaccharomyces rouxii (Araki et al. (1985) J. Mol. Biol. 182: 191-203), el sistema Gin/gix del fago Mu (Maeser y Kahlmann (1991) Mol. Gen. Genet. 230: 170-176), el sistema de recombinasa FLP/FRT del plásmido 2.mu.m de la levadura Saccharomyces cerevisiae (Broach et al. (1982) Cell 29: 227-234), y la recombinasa Int del bacteriófago Lambda (Landy (1989) Annu. Rev. Biochem. 58: 912-949; Landy (1993) Curr. Opin. Genet. Dev. 3: 699-707; Lorbach et al. (2000) J. Mol. Biol. 296: 1175-1181; y WO 01/16345). Una estrategia dirigida de sitio especifico particularmente útil, descripta en la Publicación de la Solicitud de Patente de Invención estadounidense No. 2006/0130179, utiliza la recombinación mediada por la integrasa lambda. El método comprende introducir en una célula vegetal una secuencia de nucleótidos objetivo que comprende un primer Sitio de Reconocimiento de Integrasa; introducir en la célula vegetal una secuencia de nucleótidos donante que comprende un segundo Sitio de Reconocimiento de Integrasa; e introducir en la célula vegetal una integrasa o un complejo de integrasa. Otra estrategia dirigida de sitio específico útil se encuentra descripta en la Publicación de la Solicitud de Patente de Invención No. 2006/0253918, que utiliza la recombinación homologa para integrar uno o más genes (apilamiento de genes) en ubicaciones específicas en el genoma.

Un evento que posee niveles deseados o patrones de expresión de transgenes es útil para introgresionar el transgen en otros antecedentes genéticos mediante un cruce exogámico ("outcrossing") sexual con el uso de métodos de cultivo selectivo convencionales. La progenie de dichos cruces mantiene las características de la expresión del transgen del transformante original. Esta estrategia se utiliza para asegurar la expresión confiable del gen en una cantidad de variedades que está bien adaptada a las condiciones de cultivo locales. Asimismo, sería conveniente poder detectar la presencia de un evento particular a fin de determinar si la progenie de una cruza sexual contiene un transgen de interés. Además, un método para detectar un evento particular sería útil para cumplir con las normas que requieren la aprobación percomercial y el etiquetado de, por ejemplo, los... [Seguir leyendo]

1. Una semilla transgénlca del evento de maíz MIR162 tratada con un Insecticida, donde dicha semilla de maíz transgénica comprende la molécula de ácido nucleico constituida por la SEC ID NO: 49 y su complemento.

2. La semilla de maíz transgénica de la reivindicación 1, donde dicha semilla transgénlca del evento de maíz MIR162 es la semilla de maíz depositada en la American Type Culture Collection bajo el número de acceso PTA-8166.