Diferentes serotipos del virus de la estomatitis vesicular como vectores de expresión para regímenes de inmunización.

Una plataforma de inmunización para uso en una estrategia de inmunización por estimulación primaria y refuerzo,

en donde dicha plataforma de inmunización comprende:

a. una vacuna o composición inmunogénica que comprende un serotipo Indiana (rVSVInd) de virus recombinante de la estomatitis vesicular (rVSV) de longitud completa, y

b. otra vacuna o composición inmunogénica que comprende un serotipo New Jersey (rVSVNJ) de rVSV de longitud completa,

en donde el rVSVInd expresa una proteína M del serotipo Indiana que tiene una metionina de la posición 51 cambiada por una arginina (sustitución M51R), y el rVSVNJ incluye un gen M mutante que expresa una proteína M del serotipo New Jersey que tiene una metionina de la posición 48 cambiada por una arginina, y una metionina de la posición 51 cambiada por una arginina (sustitución M48R-M51R).

Diferentes serotipos del virus de la estomatitis vesicular como vectores de expresión para regímenes de inmunización Campo de la invención La presente invención se refiere a una nueva plataforma de vacunas o composiciones inmunogénicas que comprenden dos serotipos diferentes de virus de la estomatitis vesicular recombinantes y al uso de la nueva plataforma en composiciones y métodos para regímenes de vacunación profilácticos y terapéuticos contra agentes patógenos humanos.

Antecedentes de la invención A lo largo de esta solicitud se citan diversas referencias entre corchetes para describir con más detalle el estado de la técnica a la cual pertenece esta invención. La descripción de estas referencias se incorpora por referencia a la presente descripción.

El mejor modo de sensibilizar primariamente CTL CD8+ es sintetizar los antígenos diana mediante transfección o infección con DNA usando vectores víricos o bacterianos. Los requisitos como vectores víricos de vacunas son una gran variedad de huéspedes y una buena expresión de genes de interés. El virus de la estomatitis vesicular (VSV; del inglés, vesicular stomatitis virus) infecta a la mayoría de las células de mamífero y expresa proteínas víricas en las células infectadas en una cantidad de hasta el 60% de las proteínas totales [G. N. Kim y C. Y. Kang, Virology 357: 41, 2007]. En la naturaleza, el VSV infecta a cerdos, ganado vacuno y caballos y causa la enfermedad vesicular alrededor de la boca y el pie. Aunque se ha comunicado la infección de seres humanos por el VSV, el VSV no causa síntomas graves [B. N. Fields y K. Hawkins, N. Engl. J. Med. 277; 989, 1967; K. M. Johnson et al., Am. J. Trop. Med. Hyg. 15: 244, 1966].

El VSV es un virus de RNA de cadena negativa que codifica cinco proteínas: una proteína de la nucleocápsida (N) , una fosfoproteína (P) , una proteína matricial (M) , una glicoproteína superficial (G) y una RNA polimerasa (L) dependiente de RNA. Se requieren las proteínas N, P y L del VSV para la síntesis de RNAs genómicos de sentido positivo y sentido negativo y mRNA, que son necesarios para la síntesis de proteínas del VSV, así como genes de interés tales como proteínas del virus de la hepatitis C (HCV; del inglés, hepatitis C virus) humana.

Desde el desarrollo del sistema de genética inversa para el VSV [N. D. Lawson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 4477, 1995; S. P. Whelan et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 8388, 1995] para generar VSVs recombinantes a partir de cDNA, el VSV ha sido estudiado como un vector vírico de vacunas para la inmunización con diversos agentes patógenos [J. L. Brandsma et al., J. Virol. 81: 5749, 2007; K. M. Daddario-DiCaprio et al., J. Virol. 80: 9659, 2006; W. Kohl et al., J. Gen. Virol. 88: 157, 2007; S. Kuate et al., Virology 362: 26, 2007; A. Palin et al., Vaccine 25: 741, 2007; J. A. Schwartz et al., Virology 366: 166, 2007].

Aunque el VSV es un virus de replicación rápida, se provocarán finalmente respuestas inmunes humorales y celulares contra el VSV en el huésped animal, como con cualesquier otros vectores virales [J. W. Yewdell et al., J. Exp. Med. 163: 1529-1538, 1986; L. Puddington et al., J. Virol. 60: 708-717, 1986; U. Kalinke et al., Immunity 5: 639652, 1996]. Los animales infectados con el VSV desarrollan respuestas inmunes en una o dos semanas, incluyendo un anticuerpo neutralizante [U. Kalinke et al., Immunity 5: 639-652, 1996] que impide la eficacia de las inmunizaciones de refuerzo para la vacunación con el mismo vector. El VSV es neutralizado por anticuerpos específicos del serotipo contra la glicoproteína G de la superficie vírica. Dos serotipos diferentes de VSV, VSV-Indiana (VSVInd) y VSV-New Jersey (VSVNJ) , muestran un 50% de identidad de aminoácidos en la glicoproteína [C.

J. Gallione y J. K. Rose, J. Virol. 46: 162-169, 1983]. Los anticuerpos generados contra un serotipo de VSV no neutralizan el otro serotipo de VSV [B. Cartwright y F. Brown, J. Gen. Virol. 16: 391-398, 1972]. Por lo tanto, otros han empleado VSVInd como un vector de vacuna en que la glicoproteína ha sido reemplazada por la de VSVNJ para minimizar los problemas que surgen de esta respuesta inmune contra los vectores víricos [N. F. Rose et al., J. Virol.

74: 10.903-10.910, 2000; N. F. Rose et al., Cell 106: 539-549, 2001].

Iyer et al. (Vaccine, 5 de febrero de 2009, 27 (6) : 893-903) utilizan la columna vertebral del serotipo Indiana de VSV para construir VSVs recombinantes (rVSVs) que especifican la glicoproteína G del virus Indiana o Chandipura y expresan la glicoproteína de la envoltura (E) del virus del Nilo Occidental. Se vacunaron intranasalmente ratones usando una estrategia de inmunización por estimulación primaria (Indiana) -refuerzo (Chandipura) . Sin embargo, Iyer et al. no describen la generación de dos rVSVs completamente diferentes.

Wu et al. [Journal of General Virology (2009) , 90, 1135-1140] describen experimentos in vitro sobre cómo construir un rVSV New Jersey.

En el Documento WO2004/093906 se describe el uso de un rVSV de un serotipo Indiana (rVSVInd) , para crear un

rVSVInd que tiene un gen G del serotipo New Jersey, y un rVSVInd que tiene un gen G del serotipo Chadipuri. Sin embargo, en el Documento WO2004/093906 no se describe la generación de dos rVSVs completamente diferentes.

Aunque el VSVInd con proteína G del serotipo VSVNJ es útil para evadir la respuesta inmune humoral, no evitará la respuesta inmune celular que puede ser desencadenada por otras proteínas del VSV, incluyendo las proteínas N, P, M y L. Las respuestas inmunes celulares contra proteínas del VSV distintas de la proteína G pueden dar lugar a respuestas inmunes incompletas contra el antígeno de interés. Por lo tanto, la generación de un VSV recombinante adicional de otro serotipo puede aumentar la eficacia del uso de VSV como un vector vírico vivo de vacuna.

Resulta interesante que se haya sugerido previamente que no se intentó la generación de un vector de serotipo rVSVNJ completo a causa de la posibilidad de respuestas de linfocitos T citotóxicos de reactividad cruzada entre los serotipos Indiana y New Jersey [Clarke et al., Springer Semin. Immun. 28: 239, 2006].

En consecuencia, no se ha sugerido en la técnica el empleo de un serotipo rVSVNJ completo junto con el rVSVInd, como se proporciona en las reivindicaciones adjuntas. En realidad, en ninguna de las referencias citadas de la técnica previa se intentó el uso del rVSVInd de longitud completa junto con el rVSVNJ de longitud completa en una vacunación por estimulación primaria-refuerzo.

A la vista de los antecedentes anteriores, sería ventajoso proporcionar una estrategia para inmunoprofilaxis e inmunoterapia utilizando sistemas inmunes tanto humorales como celulares. De este modo, el Solicitante ha desarrollado un sistema que comprende una combinación de vacunas que provoca una respuesta contra agentes infecciosos.

Sumario de la invención En un aspecto, la invención proporciona una plataforma de inmunización para uso en una estrategia de inmunización por estimulación primaria-refuerzo, en donde dicha plataforma de inmunización comprende:

a. Una vacuna o composición inmunogénica que comprende un serotipo Indiana (rVSVInd) del virus recombinante de la estomatitis vesicular (rVSV) de longitud completa, y

b. Otra vacuna o composición inmunogénica que comprende un serotipo New Jersey (rVSVNJ) de rVSV de longitud completa,

en donde el rVSVInd expresa una proteína M del serotipo Indiana que tiene una metionina de la posición 51 cambiada por una arginina (sustitución M51R) , y el rVSVNJ incluye un gen M mutante que expresa una proteína M del serotipo New Jersey que tiene una metionina de la posición 48 cambiada por una arginina, y una metionina de la posición 51 cambiada por una arginina (sustitución M48R-M51R) .

En otro aspecto de la presente invención, la plataforma de inmunización se caracteriza por que un serotipo incluye un gen de glicoproteína superficial (G) del otro serotipo.

En otro aspecto de la presente invención, la plataforma de inmunización se caracteriza por que los dos serotipos de rVSV son capaces de expresar una o más proteínas de interés.

En otro aspecto de la presente invención, la plataforma de inmunización se caracteriza por que los dos serotipos de rVSV son capaces de expresar una o más proteínas del virus de la hepatitis C (HCV) .

En un aspecto más, la plataforma de inmunización es para uso en una estrategia de inmunización por estimulación primaria-refuerzo, en donde dicha estrategia de inmunización comprende administrar a un sujeto una dosis de estimulación primaria de una vacuna o composición inmunogénica que comprende un rVSV de un primer... [Seguir leyendo]

1. Una plataforma de inmunización para uso en una estrategia de inmunización por estimulación primaria y refuerzo, en donde dicha plataforma de inmunización comprende:

a. una vacuna o composición inmunogénica que comprende un serotipo Indiana (rVSVInd) de virus recombinante de la estomatitis vesicular (rVSV) de longitud completa, y

b. otra vacuna o composición inmunogénica que comprende un serotipo New Jersey (rVSVNJ) de rVSV de longitud completa,

en donde el rVSVInd expresa una proteína M del serotipo Indiana que tiene una metionina de la posición 51 cambiada por una arginina (sustitución M51R) , y el rVSVNJ incluye un gen M mutante que expresa una proteína M del serotipo New Jersey que tiene una metionina de la posición 48 cambiada por una arginina, y una metionina de la posición 51 cambiada por una arginina (sustitución M48R-M51R) .

2. La plataforma de inmunización para uso según la Reivindicación 1, en donde los dos serotipos de rVSV expresan una o más proteínas de interés.

3. La plataforma de inmunización para uso según la Reivindicación 1, en donde los dos serotipos de rVSV expresan una o más proteínas del virus de la hepatitis C (HCV) .

4. La plataforma de inmunización para uso según la Reivindicación 1, en donde la vacuna que comprende el serotipo Indiana de rVSV se usa como una vacuna de estimulación primaria y la vacuna que comprende el serotipo New Jersey de rVSV se utiliza como una vacuna de refuerzo, o viceversa.

5. La plataforma de inmunización para uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4, en donde las vacunas o composiciones inmunogénicas incluyen además un diluyente adecuado, un agente adyuvante, un vehículo farmacéuticamente aceptable o una combinación de los mismos.

6. La plataforma de inmunización para uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, en donde dicha plataforma de inmunización es para uso en la prevención o el tratamiento de una infección causada por un agente patógeno.

7. La plataforma de inmunización para uso según la Reivindicación 6, en donde el agente patógeno es seleccionado de entre el virus de la hepatitis C humana, el virus de la inmunodeficiencia humana, el virus del Nilo Occidental, hantavirus, influenzavirus, el virus Ébola, el virus de la fiebre hemorrágica por dengue, el virus de la encefalitis japonesa, y el coronavirus del SARS.

8. La plataforma de inmunización para uso según la Reivindicación 3, en donde dicha plataforma de inmunización es para prevenir o tratar la hepatitis C.

9. Un kit que comprende: (a) al menos una dosis de una cantidad eficaz de una vacuna que comprende un virus recombinante de la estomatitis vesicular (rVSV) de longitud completa de un serotipo, y (b) al menos una dosis de una cantidad eficaz de una vacuna que comprende un rVSV de longitud completa de otro serotipo,

en donde un serotipo es Indiana (rVSVInd) y el otro serotipo es New Jersey (rVSVNJ) , y en donde el rVSVInd expresa una proteína M del serotipo Indiana que tiene una metionina de la posición 51 cambiada por una arginina (sustitución M51R) , y el rVSVNJ incluye un gen M mutante que expresa una proteína M del serotipo New Jersey que tiene una metionina de la posición 48 cambiada por una arginina, y una metionina de la posición 51 cambiada por una arginina (sustitución M48R-M51R) .