DERIVADOS DE INDOL PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES RELACIONADAS CON EL PROCESO DE CORTE Y EMPALME.

Derivado de indol que corresponde a la fórmula I siguiente

Derivados de indol para el tratamiento de enfermedades relacionadas con el proceso de corte y empalme.

La presente invención se refiere a nuevos compuestos derivados de indol y a su utilización para la preparación de un medicamento útil para tratar enfermedades relacionadas con el proceso de corte y empalme.

Algunos compuestos derivados de indol tales como los derivados de elipticina y de azaelipticina ya son conocidos como moléculas intercalantes para corregir el mal funcionamiento de la expresión genética, a nivel de la replicación. Se describen más específicamente para el tratamiento de enfermedades tales como el cáncer, la leucemia y el SIDA (FR 2 627 493, FR 2 645 861, FR 2 436 786).

El proceso de corte y empalme intracelular consiste en eliminar los intrones de los ARN pre-mensajeros de manera que produzcan un ARN mensajero maduro explotable por la maquinaria de traducción de la célula (Sharp, P.A. (1994). Split gènes and RNA splicing. Cell 77. 805-815). En el caso de cortes y empalmes alternativos, un mismo precursor puede ser el origen de ARN mensajeros que codifican para unas proteínas que tienen unas funciones distintas (Black, D.L Mechanisms of Alternative Pre-Messenger RNA Splicing. Annu. Rev. Biochem. 2003. 72, 291-336). La selección precisa de los sitios de corte y empalme 5' y 3' es por lo tanto un mecanismo generador de diversidad y puede conducir a una regulación de la expresión de los genes en función del tipo de tejido o durante el desarrollo de un organismo. Entre los factores implicados en esta selección, se encuentra una familia de proteínas denominadas SR (Serine Arginine Rich protéine) caracterizadas por la presencia de uno o dos dominio(s) de unión al ARN de tipo RRM (RNA Recognation Motif) y un dominio rico en residuos de arginina y de serina denominado dominio RS (Argenine Serine) (Manley, J.L. y Tacke, R. (1996). SR proteins and splicing control. Genes Dev. 10, 1569-1579). Al fijarse sobre unas secuencias exónicas o intrónicas, cortas, del pre-mRNA, denominadas ESE (Exonic Splicing Enhancer) o ISE (Intronic Splicing Enhancer), las proteínas SR son capaces de activar, de manera dependiente de la dosis, unos sitios de corte y empalme suboptimales y permitir la inclusión de exones (Graveley, B.R. Sorting out the complexity of SR protein functions. RNA. 2000. 6, 1197-1211). La actividad de una proteína SR en el corte y empalme alternativo es específica en la medida en la que la desactivación del gen correspondiente es letal (Wang, H.Y. et al., SC35 plays a role in T cell development and alternative splicing of CD45. Mol. Cell 2001. 7, 31-342).

La secuenciación del genoma humano y el análisis de los bancos de EST (Expressed Sequence Tag) han mostrado que 35 a 65% de los genes se expresan en forma de variantes de corte y empalme alternativo (Ewing, B. y Green, P. Analysis of expressed sequence tags indicates 35.000 human genes. Nat. Genet. 2000. 25, 232-234). Este mecanismo es por lo tanto una diana privilegiada de alteraciones que pueden afectar a los factores implicados en la regulación del corte y empalme y de mutaciones que afectan a las secuencias necesarias para esta regulación. En la actualidad, se estima que aproximadamente el 50% de las mutaciones puntuales responsables de enfermedades genéticas inducen un corte y empalme aberrante. Estas mutaciones pueden interferir con el corte y empalme desactivando o creando unos sitios de corte y empalme, pero también modificando o generando unos elementos reguladores de tipo "Splicing Enhancer" o "Splicing Silencer" en un gen particular (Cartegni, L. et al., Listening to silence and understanding nonsense: exonic mutations that affect splicing. Nat. Rev. Genet. 2002. 3, 285-298).

Las estrategias desarrolladas actualmente para corregir estos fallos de corte y empalme se basan en la utilización de diferentes tipos de moléculas.

El documento de de TAZI J et al. (DNA topoisomerase I: customs office rat the border between DNA and RNA worlds?, Journal of Molecular Medecine (Berlin, Alemania) 1997 Nov-Dic, vol. 75, nº 11-12) describe que algunos derivados inhiben la ADN topoisomerasa I, la cual es una quinasa específica que fosforila los factores de corte y empalme SR.

El documento de PODDEVIN B et al. (Dual topoisomerase I and II inhibition by intoplicine (RP-60475), a new antitumor agent in early clinical trials, Molecular Pharmacology, Baltimore, MD, US, vol. 44. nº 4) describe que la intoplicina es una molécula que inhibe al mismo tiempo la topoisomerasa I y la topoisomerasa II, demostrando así que este compuesto puede ser activo contra los tumores.

El documento de Pilch B et al. (Specific inhibition of serine- and arginine-rich splicing factors phosphorylation, splicéosome assembly, and splicing by the antitumor drug NB-506, Cancer Research, 15 sep. 2001, US, vol. 61, nº 18) describe que unos medicamentos de tipo indolocarbazol inhiben la topoisomerasa I y pueden por lo tanto ser considerados como unos medicamentos anti-cancerígenos.

Una estrategia que prevé el desarrollo de nuevas moléculas que permiten corregir o eliminar los cortes y empalmes anormales se basa, por ejemplo, en la sobreexpresión de proteínas que interfieren con este tipo de corte y empalme (Nissim-Rafinia, M. et al., Cellular and viral splicing factors can modify the splicing pattern of CFTR transcrits canying splicing mutations. Hum. Mol. Genet. 2000. 9, 1771-1778; Hofmann, Y. et al., Htra2-beta 1 stimulates an exonic splicing enhancer and can restore full-length SMN expression to survival motor neuron 2 (SMN2). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2000. 97, 9618-9623).

Otra estrategia se basa en la utilización de oligonucleótidos antisentido (Sazani, P. et al., Systemically delivered antisense oligomers upregulate gene expression in mouse tissues. Nat. Biotechnol. 2002. 20, 1228-1233; Sazani, P. y Kole, R. Modulation of alternative splicing by antisense oligonucleotides. Prog. Mol. Subcell. Biol. 2003. 31, 217-239) o de PNA (Peptidic Nucleic Acid) (Cartegni, L. et al., Correction of disease-associated exon skipping by synthetic exon-specific activators. Nat. Struct. Biol. 2003. 10, 120-125) que permiten respectivamente inhibir o activar un acontecimiento de corte y empalme.

Otra estrategia se basa asimismo en la identificación de compuestos que influyen en la eficacia de corte y empalme del pre-ARNm de interés (Andreassi, C. et al. Aclarubicin treatment restores SMN levels to cells derived from type I spinal muscular atrophy patients. Hum. Mol. Genet. 2001, 10, 2841-2849).

Por último, se ha descrito una estrategia basada en la utilización del corte y empalme en trans para sustituir unos exones mutados (Liu, X. et al., Partial correction of endogenous DeltaF508 CFTR in human cystic fibrosis airway epithelia by spliceosome-mediated RNA trans-splicing. Nat. Biotechnol. 2002. 20, 47-52).

Uno de los inconvenientes de las estrategias desarrolladas y citadas anteriormente para corregir o eliminar los cortes y empalmes anormales es su coste de producción. En efecto, el coste de producción de los oligonucleótidos antisentido que deben ser modificados para mejorar su estabilidad o también el de las moléculas de tipo PNA es elevado.

Otro inconveniente de las estrategias desarrolladas y citadas anteriormente es que requieren la utilización de vectores de expresión, como por ejemplo para la estrategia basada en la utilización del corte y empalme en trans.

Los inventores se han fijado como objetivo encontrar una nueva estrategia y en particular mediante la utilización de moléculas que tienen la capacidad de inhibir los procesos de corte y empalme de los ARN pre-mensajeros, y que no adolezca de los inconvenientes de las moléculas de la técnica anterior.

Así, la presente invención se refiere a unos derivados de indol que corresponden a la fórmula I siguiente:

en la que:

R1 representa:

• un átomo de halógeno o un grupo -C=N-CH o -O-C(=O)(CH₃) o -C = N, o

• un grupo -N-R6R7,

en el que R6 y R7 representan independientemente entre sí:

1. Derivado de indol que corresponde a la fórmula I siguiente

en la que:

R1 representa:

• un átomo de halógeno o un grupo -C=N-CH o -O-C(=O)(CH₃) o -C = N, o

• un grupo -N-R6R7,

en el que R6 y R7 representan independientemente entre sí:

• un átomo de hidrógeno,

• un ciclo en C6, saturado o insaturado, que comprende eventualmente un átomo de nitrógeno, y eventualmente sustituido con uno o varios grupos alquilo en C1 a C3, o

• un grupo alquilo de C1 a C13 lineal o ramificado y/o insaturado, en el que uno o varios átomos de carbono pueden ser sustituidos con un átomo de nitrógeno, siendo dicho grupo alquilo eventualmente sustituido con uno o varios grupos -OH y/o =O y/o con un grupo tal como:

siendo dicho grupo eventualmente sustituido con un grupo alquilo en C1 a C3 eventualmente sustituido a su vez con un grupo amina,

• un grupo -NH-R8

en el que R8 representa un grupo alquilo -N-R9R10

en el que el grupo alquilo representa un grupo de C1 a C13 lineal o ramificado, eventualmente insaturado y/o sustituido con uno o varios grupos alquilo en C1 a C3 y/o grupos hidroxilo,

R9 y R10 representan cada uno independientemente entre sí un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo en C1 a C4 eventualmente sustituido con uno o varios grupos hidroxilo y/o oxo,

R2 representa un átomo de hidrógeno, un grupo metilo o un grupo -NH-(CH₂)₃-N(CH₃)₂,

R3 representa un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno o un grupo metilo, amina o metoximetilo o -NH-R8 tal como se ha definido anteriormente,

R4 representa un grupo alquilo en C1-C6, un grupo hidroxilo o un grupo metoxi eventualmente sustituido con un grupo fenilo,

R11 y R12 representan independientemente entre sí, un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo en C1-C3,

R13 representa un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, y

las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos, y/o sus mezclas.

2. Derivados de indol según la reivindicación 1, de fórmula I, en la que:

R1 representa un átomo de halógeno, un grupo amina, -N-R₆R₇ o -NH-R₈,

R2 representa un átomo de hidrógeno o un grupo metilo,

R3 representa un átomo de hidrógeno o un grupo NH-R8,

R4 representa un grupo metilo,

R11 representa un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, y

R6, R7, R8, R9, R10, R12 y R13 son tal como los definidos en la reivindicación 1.

3. Derivados según la reivindicación 1, en los que el compuesto I es el compuesto 10-cloro-2,6-dimetil-2H-pirido[3',4':4,5]pirrolo[2,3-g]isoquinolina:

4. Derivados según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su utilización como medicamento.

5. Derivados según la reivindicación 4, caracterizados porque el medicamento está destinado a tratar las enfermedades relacionadas con el proceso de corte y empalme de los ARN pre-mensajeros en la célula,

(a) en particular las enfermedades genéticas que resultan de la alteración de los procesos de corte y empalme, en particular el síndrome de Frasier, la demencia fronto-temporal relacionada con el cromosoma 17 (una forma de Parkinson), el síndrome de Leigh (un tipo de encepalopatía), la mucoviscidosis atípica, las neuropatologías incluyendo en particular el Alzheimer relacionado con una mutación de la proteína Tau, la amiotrofia que afecta al gen SMN (Survival of Motor Neuron), la depresión relacionada con un desajuste del corte y empalme de la serotonina,

(b) las enfermedades de origen viral y para las cuales unas secuencias ESE están identificadas par el corte y empalme, tales como el SIDA.

6. Derivados según la reivindicación 4 ó 5, caracterizados porque dicho medicamento comprende asimismo un excipiente que permite formular los compuestos según la fórmula I.

7. Derivados según una de las reivindicaciones 4 a 6, caracterizados porque dicho medicamento se presenta en forma sólida o líquida para ser preparado y administrado por vía intravenosa.