Una composición que comprende partículas que contienen una o más enzimas degradantes del oxalato incrustadas en un primer material polímero,

en donde la enzima incrustada retiene al menos dos veces la actividad de las una o más enzimas no incrustadas libres obtenidas del mismo lote después de incubación en fluido gástrico simulado USP a 37ºC durante al menos 60 minutos y en donde el primer material polímero está reticulado consigo mismo y con las una o más enzimas

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a una composición que comprende una o más enzimas degradantes del oxalato para suministrar las enzimas en forma activa al estómago, donde las una o más enzimas degradantes del oxalato ejercen su efecto. Así pues, la presente invención proporciona medios para reducción del oxalato en el estómago. Una composición de la invención comprende partículas que contienen una o más enzimas degradantes del oxalato incrustadas en un primer material polímero, en donde la enzima incrustada retiene al menos dos veces la actividad de la una o más enzimas no incrustadas libres obtenidas del mismo lote después de incubación en el jugo gástrico simulado USP a 37ºC durante al menos 60 min en condiciones similares.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La enfermedad de cálculos en el tracto renal/urinario (urolitiasis) es un problema sanitario muy importante en todo el mundo. La mayoría de los cálculos asociados con urolitiasis se componen de oxalato de calcio solo u oxalato de calcio más fosfato de calcio. Otros estados de enfermedad han sido asociados también con exceso de oxalato. Éstos incluyen vulvodinia, oxalosis asociada con enfermedad renal de etapa terminal, trastornos de conductancia cardiaca, enfermedad de Crohn y otros estados de enfermedad entérica.

El ácido oxálico, y/o su sal, oxalato, se encuentra en una gran diversidad de alimentos, y es por tanto un componente de muchos constituyentes en las dietas humana y animal. La absorción incrementada del oxalato puede ocurrir después de ingerir alimentos que contienen cantidades elevadas de ácido oxálico. Es bien sabido que alimentos tales como las espinacas y el ruibarbo contienen cantidades elevadas de oxalato, pero una multitud de otros alimentos y bebidas contienen también oxalato. Dado que el oxalato se encuentra en una diversidad tan grande de alimentos, dietas que sean bajas en oxalato y que sean también agradables al paladar son difíciles de formular. Adicionalmente, el cumplimiento con una dieta baja en oxalato es a menudo problemático.

El riesgo de formación de cálculos renales gira alrededor de cierto número de factores que no se conocen todavía por completo. La enfermedad de cálculos renales o en el tracto urinario se presenta en una proporción tan alta como 12% de la población en los países occidentales y aproximadamente el 70% de estos cálculos se componen de oxalato de calcio o de oxalato de calcio más fosfato de calcio. Algunos individuos (v.g. pacientes con enfermedad intestinal tal como la enfermedad de Crohn, enfermedad intestinal inflamatoria o esteatorrea así como los pacientes que han sufrido cirugía de derivación yeyunoileal) absorben una mayor proporción del oxalato de sus dietas que otras personas. Para estos individuos, la incidencia de la urolitiasis por oxalato aumenta acusadamente. El aumento de la incidencia de la enfermedad es debida a los niveles incrementados de oxalato en los riñones y la orina, y éste, el síndrome hiperoxalúrico más común en los humanos, se conoce como hiperoxaluria entérica. El oxalato es también un problema en pacientes con enfermedad renal de etapa terminal y se dispone de pruebas recientes de que el oxalato elevado en la orina está implicado también en la vestibulitis vulvar (vulvodinia).

Composiciones de recubrimiento entérico que comprenden bacterias degradantes del oxalato han sido propuestas para reducir las concentraciones de oxalato. Sin embargo, las composiciones con recubrimiento entérico pasan a través del estómago en forma intacta, es decir el recubrimiento se mantiene intacto y, de acuerdo con ello, no puede degradarse cantidad alguna de oxalato en el estómago. Por consiguiente, existe todavía necesidad de desarrollar composiciones que permitan la degradación del oxalato ya en el estómago a fin de degradar especialmente el oxalato dietético. Además, dichas composiciones son adecuadas para uso en el tratamiento de las hiperoxalurias entéricas y de absorción tales como las hiperoxalurias que causan enfermedad de cálculos recurrente. El objetivo DE dicho tratamiento es que los pacientes exhiban niveles normales de oxalato en la orina.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención comprende composiciones y métodos para tratar y prevenir las condiciones relacionadas con el oxalato. Las composiciones de la presente invención comprenden enzimas que reducen el oxalato. Los métodos de la presente invención comprenden administrar las composiciones para tratar o prevenir condiciones relacionadas con el oxalato, y métodos para fabricar y utilizar dichas composiciones. Las composiciones de la presente invención reducen el oxalato en condiciones gástricas, tales como pH bajo y en presencia de proteasas. Las composiciones de la presente invención reducen el oxalato en el estómago de humanos y otros animales. Las composiciones reducen el oxalato no sistémico, v.g. oxalato en el tracto gastrointestinal, particularmente en el estómago, y evitan que el oxalato exógeno (v.g. de la comida) entre en la circulación sistémica.

Una composición de acuerdo con la presente invención comprende partículas que contienen una o más enzimas incrustadas en un primer material polímero, en donde las enzimas incrustadas retienen al menos dos veces la actividad de las una o más enzimas no incrustadas del mismo lote, después de incubación de las enzimas tanto incrustadas como no incrustadas (libres) en fluidos gástrico simulado (84 mM de HCl y 3,2 mg/ml de pepsina a pH que fluctúa desde 1,0 a 4,0) a 37ºC durante al menos 60 minutos. Las composiciones comprenden partículas que pueden recubrirse ulteriormente con un segundo material polímero. Las composiciones comprenden materiales polímeros que están reticulados, y opcionalmente, las reticulaciones pueden reducirse. En realizaciones específicas, el primer material polímero es quitosano, alginato, pectina o ácido hialurónico. Además de las una o más enzimas y el primer material polímero, las composiciones particuladas pueden contener también uno o más aditivos tales como, v.g., agentes de ajuste del pH, agentes tampón, agentes solubilizantes, estabilizadores, conservantes, cofactores para las enzimas o uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, tales como, v.g., cargas, diluyentes, vehículos

o análogos.

Los métodos de la presente invención comprenden proporcionar composiciones para tratamiento no sistémico, por ejemplo, proporcionar una composición que permita reducir el oxalato en el estómago a fin de evitar la absorción del oxalato del tracto gastrointestinal. La composición protege las enzimas reductoras del oxalato incrustadas en ella contra el ambiente ácido y deteriorante de las enzimas en el estómago, y mantiene la actividad enzimática en dicho ambiente severo. Los métodos de tratamiento y prevención comprenden proporcionar las composiciones expuestas en esta memoria en las cuales una o más enzimas degradantes del oxalato están incrustadas en un primer material polímero, recubrir opcionalmente las partículas obtenidas con un segundo material polímero, reticular opcionalmente el primero y/o segundo material polímero y, opcionalmente, reducir las reticulaciones.

Las composiciones de la presente invención son adecuadas en métodos de tratamiento o prevención de condiciones relacionadas con el oxalato que incluyen, pero sin carácter limitante, hiperoxaluria, hiperoxaluria de absorción, hiperoxaluria entérica, hiperoxaluria primaria, enfermedad idiopática de cálculos renales de oxalato de calcio (urolitiasis), vulvodinia, oxalosis asociada con enfermedad renal de etapa terminal, trastornos de la conductancia cardiaca, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, y pacientes que han sido sometidos a cirugía gastrointestinal y cirugía bariátrica (cirugía por obesidad), y/o que han sufrido tratamiento con antibióticos. Un método de tratamiento o prevención comprende administrar por vía oral a un individuo una composición de la presente invención, en una cantidad eficaz, para reducir el oxalato en el estómago del individuo, y reducir así la carga global de oxalato del individuo de una manera eficiente y eficaz. Tales composiciones son farmacéuticamente aceptables para administración oral.

Las enzimas utilizadas en las composiciones y métodos de la presente invención son enzimas reductoras del oxalato, e incluyen, pero sin carácter limitante, oxalato-oxidasa, oxalato-descarboxilasa (abreviada en el presente contexto OxDc), oxalil-CoA-descarboxilasa, o formil-CoA-transferasa, o combinaciones... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende partículas que contienen una o más enzimas degradantes del oxalato incrustadas en un primer material polímero, en donde la enzima incrustada retiene al menos dos veces la actividad de las una o más enzimas no incrustadas libres obtenidas del mismo lote después de incubación en fluido gástrico simulado USP a 37ºC durante al menos 60 minutos y en donde el primer material polímero está reticulado consigo mismo y con las una o más enzimas.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la actividad de las una o más enzimas degradantes del oxalato disminuye como máximo hasta aproximadamente 30% cuando se incuba en una solución tampón acuosa que tiene un pH comprendido en el intervalo que va desde aproximadamente 1,0 a aproximadamente 4,5 durante 60 minutos y ajustándose la actividad inicial a 100%.

3. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la actividad de una

o más enzimas degradantes del oxalato disminuye como máximo hasta aproximadamente 20% cuando se incuba en una solución tampón acuosa que tiene un pH comprendido en el intervalo que va desde aproximadamente 1 a aproximadamente 4,5 durante 2 horas, y ajustándose la actividad inicial a 100%.

4. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el tampón contiene adicionalmente una proteasa.

5. Una composición de acuerdo con la reivindicación 4, en donde la concentración de la proteasa está comprendida en un intervalo que va desde aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml.

6. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde las una o más enzimas degradantes del oxalato son enzimas aisladas/purificadas.

7. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde las una o más enzimas degradantes del oxalato se seleccionan del grupo constituido por oxalato-descarboxilasa, oxalil-CoAdescarboxilasa, o una combinación de oxalato-oxidasa y formil-CoA-transferasa, o una combinación de las mismas.

8. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la una o más enzimas degradantes del oxalato es oxalato-descarboxilasa.

9. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde las una o más enzimas degradantes del oxalato incrustadas retienen al menos dos veces la actividad de las una o más enzimas no incrustadas libres obtenidas del mismo lote después de incubación en 84 mM de HCl y 3,2 mg/ml de pepsina a pH > 2 a 37ºC durante al menos 60 minutos.

10. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para la cual el nivel de actividad enzimática retenido después de incubación en 84 mM de HCl y 3,2 mg/ml de pepsina a pH > 2 se incrementa por un factor de al menos 2 en comparación con las composiciones del mismo lote de enzimas incrustadas en el primer material polímero pero que carecen de reticulaciones.

11. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde las partículas están recubiertas de un segundo material polímero.

12. Una composición de acuerdo con la reivindicación 11, para la cual el nivel de actividad enzimática retenida después de incubación en 84 mM de HCl y 3,2 mg/ml de pepsina a pH > 2 se incrementa por un factor de al menos 2 en comparación con composiciones del mismo lote pero de enzimas incrustadas en el primer material polímero pero que carecen de un recubrimiento con un segundo material polímero.

13. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 ó 12, en donde los materiales polímeros primero y/o segundo están reticulados consigo mismos o uno con otro o con las una o más enzimas.

14. Una composición de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el nivel de actividad enzimática retenida después de incubación en 84 mM de HCl y 3,2 mg/ml de pepsina a pH > 1 a 37ºC durante al menos 60 minutos se incrementa por un factor de al menos 2 en comparación con composiciones del mismo lote de enzimas incrustadas en el primer material polímero pero que carecen de reticulaciones y de una segunda capa de material polímero.