COMPOSICIONES QUE COMPRENDEN CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES.

Una composición de MSC ó MSC y tenocitos derivados de las mismas en suspensión líquida de sobrenadante de médula ósea en donde la composición de MSC está enriquecida en comparación con una fuente natural de células

Composiciones que comprenden células madre mesenquimales.

La presente invención se refiere a una composición de MSC (células madre mesenquimales) o MSC y tenocitos derivados de las mismas en una suspensión líquida de sobrenadante de médula ósea en donde la composición de MSC está enriquecida en comparación con una fuente natural de células, y al uso de la misma.

Las lesiones del tendón flexor digital superficial son una causa común de desgaste entre caballos de competición, y van asociadas a un escaso éxito de retorno al nivel previo de rendimiento y a una elevada incidencia de que se vuelva a producir la lesión. Los regímenes de tratamiento actuales (revisados por Dowling y col., 2000) tienen sólo efectos marginales en la evolución de la tendinopatía, siendo la principal influencia en el pronóstico la gravedad de la lesión inicial. Estudios recientes que han investigado la eficacia del inhibidor de la lisil-oxidasa, el fumarato de beta-aminoproprionitilo, han puesto de manifiesto mejoras importantes en la evolución de la tendinopatía, de moderada a grave, de flexor digital superficial (Genovese, 1992), aunque esta evolución no ha sido tan favorable en ensayos clínicos posteriores (Reef y col., 1996, 1997), y un trabajo experimental reciente ha demostrado posibles efectos adversos de este tratamiento (Dahlgren y col., 2002). Además, aunque este tratamiento previene las reticulaciones de colágeno que se forman demasiado pronto, permitiendo así que un régimen de ejercicio controlado mejore la funcionalidad del tejido cicatricial, no regenera el tejido tendinoso. Ya que el tejido cicatricial nunca será tan funcional como el tejido tendinoso, un objetivo de un futuro tratamiento eficaz es el desarrollo de métodos para regenerar tejido tendinoso.

Recientemente ha habido un interés considerable en los beneficios terapéuticos potenciales de las células madre mesenquimales (MSC) para la curación de tendones y ligamentos (Woo y col., 1999; Caplan y Bruder, 2001; Hildebrand y col., 2002). Estas células residen en pequeñas cantidades en todos los tejidos y poseen capacidades multipotenciales para diferenciarse en diversos tejidos diferentes. Informes recientes han demostrado que las MSC se pueden implantar en tejido de tendones y ligamentos mediante el uso de armazones en animales experimentales (Young y col., 1998). Una de las fuentes de MSC ha sido la médula ósea, e informes recientes (Herthel, 2001) han descrito un éxito considerable con el uso de médula ósea aspirada de las esternebras e inyectada directamente en el tendón o ligamento dañado. En este informe, el pronóstico global para un retorno a trabajar a pleno rendimiento en 100 caballos con lesiones de ligamento suspensor, tratados con médula ósea, fue del 84%, mientras que un grupo comparativo de 66 caballos tratados de manera conservadora tuvo un pronóstico del 15%. Sin embargo, no existe documentación sobre el número de lesiones de extremidades anteriores y extremidades posteriores, ni sobre la región del ligamento suspensor dañado, todos los cuales se sabe que presentan pronósticos muy diferentes (Dyson, 1995, 2000). Además, esta técnica tiene muchas limitaciones. La inyección de volúmenes grandes de médula ósea (30 ml-50 ml) causaría potencialmente una alteración considerable en el tejido tendinoso intacto restante, incluiría otros componentes de la médula ósea tales como espículas de hueso, células de grasa, etc., deletéreos para la curación del tendón, y únicamente se esperaría que estuvieran presentes pequeñas cantidades de MSC. No se ha descrito ni validado ni la presencia ni el número de células madre mesenquimales en este método de tratamiento. Algunos especialistas han dudado por ello de la eficacia de esta técnica ya que los frotis de médula ósea aspirada se asemejan a los frotis de sangre periférica. Los autores de la invención han encontrado también una mineralización no conveniente usando esta técnica.

En una realización preferida de la presente invención, se ha desarrollado una técnica para el aislamiento, caracterización y expansión in vitro de MSC equinas, con la reimplantación de un número grande de MSC autólogas en un tendón flexor digital superficial dañado en un caballo. Las MSC poseen el potencial de diferenciarse en tenocitos y de regenerar la matriz del tendón después de ocurrida la lesión.

La invención no se limita al tratamiento de caballos ni, por supuesto, al tratamiento del tendón flexor digital superficial, ni al uso de células autólogas, aunque este uso se prefiere. Más bien, la invención tiene aplicaciones más amplias según se describe aquí con detalle.

Un primer aspecto de la invención proporciona una composición de MSC ó MSC y tenocitos derivados de las mismas en una suspensión líquida de sobrenadante de médula ósea en donde la composición de MSC está enriquecida en comparación con una fuente natural de células.

Un segundo aspecto de la invención proporciona un uso de una composición de MSC o MSC y tenocitos derivados de las mismas en una suspensión líquida de sobrenadante de médula ósea para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una lesión del tejido esquelético blando en un paciente.

El tejido esquelético blando incluye tendones, ligamentos, discos intervertebrales, que están asociados con el dolor o una lesión de columna vertebral, y los meniscos.

El tejido esquelético blando se puede lesionar de diferentes maneras, tales como mediante laceración quirúrgica, que es un tipo de lesión percutánea traumática. Esas lesiones quirúrgicas pueden ser consideradas "no naturales". Las lesiones adecuadas para ser tratadas por medio de la presente invención son lesiones "naturales", término que significa que la lesión típicamente se produce subcutáneamente, por ejemplo, por ser inducida por una distensión, que frecuentemente es una acumulación de daños a lo largo de un período de tiempo. Por lo tanto, las lesiones naturales son lesiones clínicas e incluyen lesiones traumáticas que se presentan al especialista, e incluyen laceraciones accidentales.

Esas lesiones naturales son comunes en animales de competición o de carreras, incluyendo a seres humanos. Las lesiones naturales de tejido esquelético blando son fácilmente diagnosticadas por el médico o el veterinario usando técnicas muy conocidas, tales como el estudio del historial clínico del paciente, exploración física, palpación, ecografía, barrido de MRI y técnicas similares.

Se prefiere que la lesión a tratar sea una lesión por distensión.

Se prefiere que el tejido esquelético blando que se trata sea un tendón o un ligamento. Los tendones o ligamentos particularmente preferidos para tratar mediante las composiciones de la invención son los que comúnmente se lesionan en animales de competición o de carreras o animales que participan en competiciones deportivas, debido a distensiones o por una acumulación de daños, tal como daños producidos por distensión.

El paciente puede ser cualquier paciente adecuado. Típicamente, el paciente es un mamífero (que incluye seres humanos). Típicamente, el animal no humano, tal como un mamífero no humano, es un animal de importancia económica, tal como un animal de carreras o un animal de trabajo o un animal de compañía (tales como perros o gatos). Aún más típicamente, el animal es un mamífero que recibe entrenamiento para competiciones (es decir, para competiciones deportivas), tales como seres humanos, caballos, perros (tales como lebreles, galgos, perros de caza, sabuesos y perros esquimales) o camellos.

Se prefiere particularmente que el paciente sea un caballo que, debido a su uso en deportes (carreras, saltos, exhibiciones etc.), o como animales de trabajo, son particularmente susceptibles a una lesión natural en el tejido esquelético blando según se ha definido.

Aunque en estos mamíferos, toda lesión del tejido esquelético blando se puede tratar con las composiciones de la invención, algunas lesiones particulares se pueden tratar de manera más adecuada que otras. Así, cuando el paciente es un caballo o un camello, se prefiere si el tejido esquelético blando se selecciona entre el grupo que consiste en tendón flexor digital superficial (SDFT), ligamento suspensor y tendón flexor profundo (tanto de las extremidades anteriores como de las extremidades posteriores), ligamento accesorio del tendón flexor digital profundo (DDFT) (del inglés, "Deep Digital Elexor Tendon"), meniscos, y otros ligamentos tales... [Seguir leyendo]

1. Una composición de MSC ó MSC y tenocitos derivados de las mismas en suspensión líquida de sobrenadante de médula ósea en donde la composición de MSC está enriquecida en comparación con una fuente natural de células.

2. Una composición según la reivindicación 1, en donde el enriquecimiento de MSC es al menos 2 veces superior al contenido de la fuente natural que se ha enriquecido.

3. Una composición según cualquier reivindicación precedente, en donde el enriquecimiento de MSC es al menos 3 veces, 4 veces, 5 veces, 10 veces, 20 veces o al menos 30 ó 40 ó 50 ó 100 veces, o al menos 1000 veces o 10⁴ veces ó 10⁵ veces.

4. Uso de un composición de MSC o MSC y/o tenocitos derivados de las mismas en una suspensión líquida de sobrenadante de médula ósea para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de lesiones en el tejido esquelético blando de un paciente.

5. Un uso según la reivindicación 4, en donde la lesión es en un tendón, ligamento, disco intervertebral o menisco de un ser humano, caballo, camello o perro.

6. Un uso según la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en donde la lesión es subcutánea o una laceración accidental.

7. Un uso según una cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en donde el tejido esquelético blando se selecciona del grupo que consiste en: cuando el paciente es un caballo o un camello: tendón flexor digital superficial (SDFT), ligamento suspensor, tendón flexor profundo, ligamento accesorio del tendón flexor digital profundo (DDFT), menisco, ligamentos cruzados; cuando el paciente es un perro: tendón de Aquiles, ligamento cruzado, menisco y tendón flexor; y cuando el paciente es un ser humano: tendón de Aquiles, tendón del cuádriceps, manguito de los rotadores, epicondilitis lateral o media, disco intervertebral y menisco.

8. Una composición o uso según cualquier reivindicación precedente, en donde las células de la composición contienen al menos 10% de MSC, o al menos 50% de MSC, o al menos 60% de MSC, o al menos 70% de MSC, o al menos 90% de MSC, o al menos 95% de MSC, o al menos 99% de MSC.

9. Una composición o uso según cualquier reivindicación precedente, en donde la suspensión líquida es tal que gelifica in situ, o en donde la suspensión líquida comprende un agente gelificante.

10. Un uso según una cualquiera de las reivindicaciones 4-9, en donde el paciente es un ser humano.

11. Una composición o uso según cualquier reivindicación precedente, en donde la composición además comprende señales biológicas para estimular la deferenciación de MSC en tipos de células que son útiles para la regeneración de lesiones del tejido esquelético blando y no estimulan la diferenciación de MSC en tipos de células que no son útiles.

12. Una composición o uso según la reivindicación 11, en donde las señales biológicas comprenden uno o más factores de crecimiento, factores de diferenciación o factores de regeneración.

13. Una composición o uso según la reivindicación 12, en donde el o los factores de crecimiento, factores de deferenciación o factores de regeneración comprenden TGF beta, IGF 1, IGF 2, PDGF, FGF ó COMP.

14. Una composición o uso según cualquier reivindicación precedente, en donde las MSC y/o tenocitos son alogénicos o autólogos.

15. Una composición según cualquier reivindicación precedente, en donde las MSC se derivan o bien: i) de la médula ósea del individuo que se va tratar; o bien ii) de la sangre de cordón umbilical del individuo que se va a tratar, recuperada con anterioridad.