Composiciones y métodos de uso de mutantes de condroitinasa ABCI.

Una enzima mutante condroitinasa ABCI elegida entre SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 2, SEC ID Nº: 5 y SEC ID Nº: 6.

Composiciones y mïtodos de uso de mutantes de condroitinasa ABCI

F. Fundamentos La mïdula espinal estï formada por fibras nerviosas. Un daïo al sistema nervioso central, incluyendo la mïdula espinal, tiene como resultado una pïrdida de la funciïn. Los tipos mïs comunes de lesiones de la mïdula espinal (SCI: Spinal Cord Injuries) incluyen contusiones (hematomas de la mïdula espinal) y lesiones por compresiïn (provocadas por una presiïn prolongada sobre la mïdula espinal) . Despuïs de una lesiïn de la mïdula espinal en un mamïfero adulto, la incapacidad de los axones para regenerarse puede dar lugar a pïrdida de la sensibilidad, pïrdida de la funciïn motriz y/o pïrdida de la funciïn autonïmica o neurovegetativa, asï como una parïlisis permanente. Una de las razones por las que las neuronas no se regeneran es su incapacidad para atravesar la cicatriz glial que se desarrolla despuïs de una lesiïn de la mïdula espinal. El daïo inducido por la lesiïn desarrollarï cicatrizaciïn glial, que contiene molïculas de la matriz extracelular que incluyen proteoglicanos de sulfato de condroitina (CSPGs) . Los CSPGs inhiben el crecimiento del tejido nervioso in vitro y la regeneraciïn de tejido nervioso en regiones ricas en CSPGs in vivo. Los CSPGs estïn implicados en otras diversas condiciones incluyendo, p. ej., la inflamaciïn.

Los documentos WO 2005/087920 y WO 2004/103299 describen cada uno de ellos la secuencia de aminoïcidos de la condroitinasa ABCI de tipo silvestre y su uso para el tratamiento de lesiones del sistema nervioso central.

G. Sumario de la invenciïn Una realizaciïn de la presente invenciïn proporciona una enzima condroitinasa ABCI mutante elegida entre SEC ID Nï: 1, SEC ID Nï: 2, SEC ID Nï: 5, SEC ID Nï: 6.

En realizaciones preferidas, tales enzimas mutantes condroitinasa ABCI muestran una actividad potenciada. En otras realizaciones preferidas, tales enzimas mutantes condroitinasa ABCI muestran una resistencia a la inactivaciïn mejorada, incluyendo la inactivaciïn por exposiciïn a UV o al calor. La enzima mutante condroitinasa ABCI de la invenciïn se selecciona a partir de 055D2-3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï:2) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 005B12-3 (SEC ID Nï: 6) .

La secuencia de nucleïtidos de condroitinasa ABCI de tipo silvestre de Proteus vulgaris se expone como SEC ID Nï: 7 y la secuencia de aminoïcidos de condroitinasa ABCI se expone como SEC ID Nï: 8.

La invenciïn incluye ïcidos nucleicos que codifican las enzimas mutantes condroitinasa ABCI de la invenciïn y mïtodos para su uso. En una forma de realizaciïn, la invenciïn incluye una secuencia de ïcidos nucleicos que codifica una enzima mutante condroitinasa ABCI elegida entre 055D2-3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 079D2-2 (SEC ID Nï: 3) , 057G1-1 (SEC ID Nï: 4) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 005B12-3 (SEC ID Nï: 6) . Se elige una secuencia de ïcidos nucleicos de la invenciïn a partir de ïcidos nucleicos de 055D2-3 (SEC ID Nï: 9) , ïcidos nucleicos de 079B6-2 (SEC ID Nï: 10) , ïcidos nucleicos de 023G6-4 (SEC ID Nï: 13) y ïcidos nucleicos de 005B123 (SEC ID Nï: 14) .

Otras realizaciones de la presente invenciïn se refieren al uso de una enzima de la invenciïn para el tratamiento de un paciente en necesidad de recuperaciïn neurolïgica funcional, incluyendo la funciïn sensorial, motriz y autonïmica o neurovegetativa, despuïs de, p. ej., una lesiïn o enfermedad del sistema nervioso central ("SNC") . Las enzimas mutantes ABCI de la invenciïn tambiïn pueden ser utilizadas para degradar CSPGs. En consecuencia, una realizaciïn de la invenciïn incluye el uso de una enzima de la invenciïn para la degradaciïn de uno o mïs CSPGs usando una composiciïn que comprende una enzima mutante ABCI de la invenciïn. Una composiciïn de la invenciïn eficaz para promover la recuperaciïn funcional neurolïgica comprende una enzima mutante condroitinasa ABCI elegida entre 055D2- 3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 005B12-3 (SEC ID Nï: 6) .

Se contempla el uso de una enzima de la invenciïn para modificar el acceso de las cïlulas a los espacios y regiones extravasculares, que comprende administrar a un paciente una composiciïn que comprende una enzima de la invenciïn. En consecuencia, la presente invenciïn se refiere al uso de una enzima de la invenciïn para facilitar la difusiïn de un agente en el sistema nervioso central o para potenciar la absorciïn de un agente en el sistema nervioso central. Se contempla el uso de una enzima de la invenciïn para reducir la penetraciïn de las cïlulas asociadas con la inflamaciïn en el tejido de un paciente. La enzima se elige entre 055D2-3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 005B12 - 3 (SEC ID Nï: 6) .

Otra realizaciïn de la presente invenciïn es el uso de una enzima de la invenciïn para inhibir la extravasaciïn de cïlulas asociadas con la inflamaciïn de los vasos sanguïneos, en donde es administrada a un paciente una composiciïn que comprende una enzima que segmenta proteoglicanos de sulfato de condroitina. En una realizaciïn, una enzima de la invenciïn evita que las cïlulas elegidas entre el grupo que consiste en glïbulos blancos, leucocitos, neutrïfilos, eosinïfilos, basïfilos, linfocitos, cïlulas B, cïlulas T, monocitos y macrïfagos, salgan de la corriente sanguïnea. La enzima se elige entre 055D2-3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 023C6-4 (SEC ID Nï: 5) , y 005B12 - 3 (SEC ID Nï: 6) .

Otra realizaciïn de la invenciïn es el uso de una enzima de la invenciïn para tratar la inflamaciïn en un paciente, en donde una enzima que segmenta proteoglicanos de sulfato de condroitina es administrada al paciente. La enzima se elige entre 055D2-3 (SEC ID ΝΟ: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 005B12-3 (SEC ID Nï: 6) . En diversas realizaciones de la presente invenciïn, la inflamaciïn estï asociada con una enfermedad o lesiïn, tales como la enfermedad inflamatoria crïnica y la enfermedad del sistema nervioso central.

Otra realizaciïn de la invenciïn es el uso de una enzima de la invenciïn para prevenir la inflamaciïn en un paciente, en donde una composiciïn que comprende una enzima que segmenta proteoglicanos de sulfato de condroitina es administrada al paciente. La enzima se elige entre 055D2-3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 005B12-3 (SEC ID Nï: 6) .

Otra realizaciïn de la presente invenciïn es el uso de una enzima de la invenciïn para tratar la inflamaciïn en un paciente, en donde cïlulas asociadas con la inflamaciïn extraïdas de un paciente son sometidas a una enzima que segmenta proteoglicanos de sulfato de condroitina ex vivo para modificar las cïlulas. La enzima se elige entre 055D2-3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 005B12-3 (SEC ID Nï: 6) .

En una realizaciïn, se usa una enzima de la presente invenciïn para tratar a un paciente en necesidad de regeneraciïn de tejido neurolïgico daïado. En otra realizaciïn, se usa una enzima de la invenciïn para facilitar la difusiïn y el transporte de molïculas terapïuticas capaces de bloquear y/o superar la actividad de las molïculas inhibidoras del crecimiento neuronal en el tejido daïado o enfermo. Las realizaciones de la presente invenciïn incluyen composiciones que comprenden enzimas mutantes condroitinasa ABCI de la invenciïn y mïtodos para su uso para facilitar el suministro y la difusiïn de agentes terapïuticos o agentes de diagnïstico, y agentes que favorecen la regeneraciïn de los nervios y los axones, en cïlulas o tejidos. Preferiblemente una composiciïn de la invenciïn es eficaz en la regeneraciïn de tejido neurolïgico daïado o para facilitar la difusiïn o el transporte. Una composiciïn de la invenciïn comprende una enzima mutante condroitinasa ABCI elegida entre 055D2-3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 5B12-3 (SEC ID Nï: 6) .

Otras realizaciones se refieren a mïtodos para favorecer la exytensiïn o crecimiento neuronal y uso en el tratamiento de lesiones de la mïdula espinal y trastornos relacionados del SNC mediante la administraciïn de tal enzima mutante condroitinasa ABCI. Una composiciïn de la invenciïn comprende una enzima mutante condroitinasa ABCI elegida entre 055D2-3 (SEC ID Nï: 1) , 079B6-2 (SEC ID Nï: 2) , 023G6-4 (SEC ID Nï: 5) y 005B12-3 (SEC ID Nï: 6) .

Descripciïn de los dibujos En parte, otros aspectos, caracterïsticas, beneficios y ventajas de las realizaciones de la presente invenciïn serïn evidentes en relaciïn con las siguientes descripciïn, reivindicaciones anexas y dibujos que se acompaïan donde:

La Figura 1 muestra... [Seguir leyendo]

1. Una enzima mutante condroitinasa ABCI elegida entre SEC ID Nï: 1, SEC ID Nï: 2, SEC ID Nï: 5 y SEC ID Nï: 6.

2. La enzima condroitinasa ABCI mutante segïn la reivindicaciïn 1ï, en donde dicha enzima es la SEC ID No. 1.

3. La enzima condroitinasa ABCI mutante segïn la reivindicaciïn 1ï, en donde dicha enzima es la SEC ID Nï: 2.

4. La enzima condroitinasa ABCI mutante segïn la reivindicaciïn 1ï, en donde dicha enzima es la SEC ID Nï: 5.

5. La enzima condroitinasa ABCI mutante segïn la reivindicaciïn 1ï, en donde dicha enzima es la SEC ID Nï: 6.

6. La enzima segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1ï a 5ï para tratar una lesiïn del sistema nervioso central

o para promover la extensiïn neuronal.

7. La enzima segïn la reivindicaciïn 6ï, en donde la enzima condroitinasa ABCI mutante es para la administraciïn despuïs de una lesiïn del sistema nervioso central por contusiïn.

8. La enzima segïn la reivindicaciïn 6ï, en donde la enzima condroitinasa ABCI mutante es para la administraciïn despuïs de una lesiïn del sistema nervioso central no causada por contusiïn.

9. La enzima segïn la reivindicaciïn 6ï, en donde la enzima condroitinasa ABCI mutante es para la administraciïn despuïs de una lesiïn de la mïdula espinal.

10. La enzima segïn la reivindicaciïn 6ï, en donde la enzima condroitinasa ABCI mutante es para la administraciïn local, preferiblemente en donde la administraciïn local se elige entre la administraciïn intratecal y la administraciïn tïpica.

11. La enzima segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1ï a 5ï, para facilitar la difusiïn de un agente en el sistema nervioso central o para potenciar la absorciïn de un agente en el sistema nervioso central.

12. La enzima segïn la reivindicaciïn 11ï, en donde el agente se elige entre el grupo que consiste en materiales biolïgicos complejos, molïculas pequeïas y cïlulas trasplantadas.

13. Una composiciïn farmacïutica que comprende la enzima segïn la reivindicaciïn 11ï, en combinaciïn con uno o mïs vehïculos aceptables farmacïuticamente, preferiblemente en donde el vehïculo farmacïutico se elige entre el grupo que consiste en diluyentes, aglutinantes, lubricantes, agentes colorantes, agentes disgregantes, agentes tampïn, agentes isotonizantes, polioles, agentes conservantes y anestïsicos.

14. La enzima segïn la reivindicaciïn 1ï para inhibir la extravasaciïn de cïlulas desde los vasos sanguïneos o para tratar la inflamaciïn en un paciente.

15. La enzima segïn la reivindicaciïn 14ï para inhibir la extravasaciïn de cïlulas desde los vasos sanguïneos, en donde las cïlulas se eligen entre el grupo que consiste en glïbulos blancos, leucocitos, neutrïfilos, eosinïfilos, basïfilos, linfocitos, cïlulas B, cïlulas T, monocitos y macrïfagos.

16. Un mïtodo para modificar las cïlulas sanguïneas ex vivo que comprende someter las cïlulas extraïdas de la corriente sanguïnea de un paciente a una enzima segïn la reivindicaciïn 1ï.