Composiciones estabilizadas de proteínas que tienen un resto tiol libre.

Una composición farmacéutica que comprende una proteína que tiene un tiol libre y un carbohidrato,

en la que elcarbohidrato está presente en una cantidad suficiente para mantener la estabilidad de la proteína, y en la que el pHde la composición es entre 4,5 y 6,5, en la que la proteína que tiene un tiol libre es la glucocerebrosidasa (GCB), yen la que el carbohidrato es la sacarosa.

Composiciones estabilizadas de proteínas que tienen un resto tiol libre.

Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de EEUU nº de serie 60/771.555, presentada el 7 de febrero de 2006.

Campo de la invención

La invención se refiere a composiciones de proteínas que tienen tioles libres, las glucocerebrosidasas, y a métodos para fabricar y utilizar dichas composiciones. Las composiciones tienen una estabilidad optimizada.

Antecedentes de la invención

Un producto de fármaco (por ejemplo, que contiene una proteína) puede conservarse en forma líquida o liofilizada. Un producto de fármaco liofilizado a menudo se reconstituye añadiendo un diluyente de administración adecuado justo antes de que el paciente lo utilice.

Una proteína activa podría perderse como resultado de inestabilidades físicas, incluyendo la desnaturalización y la agregación, así como de inestabilidades químicas que incluyen, por ejemplo, la hidrólisis, la desamidación y la oxidación. La estabilidad de un fármaco de proteína en una forma particular, por ejemplo, en una forma líquida o en una forma liofilizada, puede ser una consideración importante para la selección de la forma de un producto.

La solicitud de patente internacional WO 00/76480 describe composiciones farmacéuticas que comprenden cristales de un componente de red cristalina farmacéuticamente aceptable, y un ingrediente farmacéutico activo incluido dentro del componente de red cristalina. Uno de estos ingredientes farmacéuticos activos es la betaglucocerebrosidasa. La publicación sugiere que este componente activo puede formularse junto con manitol, citrato de sodio, y polisorbato.

Wei Wang, “Lyophilisation and Development of Solid Protein Pharmaceuticals”, International Journal of Pharmaceutics, vol. 203, pp. 1-60, proporciona un análisis del proceso de liofilización y su aplicación para formular productos farmacéuticos de proteínas sólidos. La publicación sugiere que se han utilizado azúcares o polioles, tales como sacarosa, trehalosa, manitol o sorbitol, para estabilizar proteínas liofilizadas para una conservación a largo plazo.

Lee et al., “The Stabilization of Proteins by Sucrose”, The Journal of Biological Chemistr y , vol. 256, nº 14, 1981, describe el efecto de la sacarosa sobre la integridad estructural de tres proteínas, !-quimotripsina, quimotripsinógeno, y ribonucleasa.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una proteína que tiene un tiol libre y un carbohidrato, en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para mantener la estabilidad de la proteína, y en la que el pH de la composición es entre aproximadamente 4, 5 y aproximadamente 6, 5, en la que la proteína que tiene un tioil libre es la glucocerebrosidasa (GCB) , y en la que el carbohidrato es la sacarosa. La invención también proporciona un recipiente hermético a los gases que contiene dicha composición farmacéutica, un componente de proteína, y un espacio superior, en el que el espacio superior es al menos 90% un gas inerte. La invención proporciona además un método para envasar dicha composición farmacéutica, que comprende poner en contacto la GCB con un gas inerte para reducir la cantidad de una especie reactiva, e introducir la GCB y el gas inerte en un recipiente hermético a gases.

También se proporciona la composición farmacéutica según se describe, para su uso en un método de tratamiento.

Otros aspectos de la invención se describen en las reivindicaciones dependientes.

Las composiciones y los métodos descritos en la presente proporcionan una mayor estabilidad y caducidad aumentando la estabilidad de una proteína contenida en ellos.

Las composiciones descritas en la presente, por ejemplo, composiciones líquidas que contienen una proteína, tienen una estabilidad prolongada. Por ejemplo, bajo condiciones preseleccionadas, por ejemplo tras su conservación en un recipiente hermético a gases, a una temperatura de 2-8 ºC durante un periodo de hasta 3, 6, 9, 12 o 24 meses (o en algunas realizaciones durante más tiempo) , una composición de proteínas mantendrá al menos 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 o 100% de la estabilidad que tenía antes de su conservación. La estabilidad, tal como se emplea en la presente, incluye parámetros tales como la estructura de la proteína (por ejemplo, minimizando o evitando los cambios en la estructura de la proteína, por ejemplo, la agregación de la proteína o la degradación de la proteína (por ejemplo, fragmentación) ) y/o la actividad biológica de la proteína, por ejemplo, la capacidad para convertir el sustrato en producto.

La estabilidad de la proteína puede medirse, por ejemplo, midiendo la agregación de la proteína, la degradación de la proteína, o los niveles de una actividad biológica de la proteína. La agregación de la proteína puede determinarse, por ejemplo, mediante cromatografía de exclusión molecular, PAGE no desnaturalizante, u otros métodos para determinar el tamaño, etc. Por ejemplo, la composición puede tener menos de 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50% de aumento en la cantidad de agregación de la proteína (por ejemplo, según se mide mediante una cromatografía de exclusión molecular) , comparado con la cantidad de agregación de la proteína que había en la composición antes de la conservación (por ejemplo, conservación a una temperatura de 2-8 ºC durante un periodo de hasta 3, 6, 9, 12 o 24 meses (o mayor) ) . La degradación de la proteína puede determinarse, por ejemplo, mediante HPLC en fase inversa, PAGE no desnaturalizante, cromatografía de intercambio iónico, cartografiado peptídico, o métodos similares. Como ejemplo, la composición puede tener menos de 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50% de aumento en la cantidad de degradación de la proteína (por ejemplo, según se mide mediante una HPLC en fase inversa) , comparado con la cantidad de degradación de la proteína que había en la composición antes de la conservación (por ejemplo, conservación a una temperatura de 2-8 ºC durante un periodo de hasta 3, 6, 9, 12 o 24 meses (o mayor) ) . La actividad biológica de una proteína puede medirse, por ejemplo, mediante ensayos in vitro

o in vivo, por ejemplo, ELISA (por ejemplo, para medir la unión o la actividad enzimática) y otros ensayos enzimáticos (por ejemplo, ensayos espectrofotométricos, fluorimétricos, calorimétricos, quimioluminiscentes, radiométricos, o cromatográficos) , ensayos de quinasas, etc. Como ejemplo, la composición puede tener menos de 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50% de disminución en una actividad biológica de la proteína (por ejemplo, actividad enzimática, por ejemplo, según se mide mediante un ensayo in vitro) , comparado con la cantidad de actividad biológica que había en la composición antes de la conservación (por ejemplo, conservación a una temperatura de 2-8 ºC durante un periodo de hasta 3, 6, 9, 12 o 24 meses (o mayor) ) .

En un aspecto, la proteína no modifica, por ejemplo, rompe, ningún otro componente de la composición. Por ejemplo, en una realización preferida, en una composición que contiene glucocerebrosidasa (GCB) , la composición no contiene polisorbato como tensioactivo, porque la GCB puede reconocer al polisorbato como sustrato y puede romper el polisorbato para liberar ácidos grasos libres.

Las realizaciones de la invención tienen una estabilidad comparable a la de una composición liofilizada de la misma proteína. Una composición líquida descrita en la presente puede tener al menos 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 o 100% del nivel de estabilidad de la proteína (por ejemplo, actividad retenida) de una composición liofilizada después de 3, 6, 9, 12 o 24 meses de conservación (por ejemplo, si una composición liofilizada tiene retenida 90% de su actividad a los 18 meses, la composición de la invención ha retenido al menos 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 o 100% de ese nivel) .

En un aspecto, la descripción incluye una composición que incluye una proteína que tiene un tiol libre y un carbohidrato, en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para mantener la estabilidad de la proteína, en la que la proteína que tiene un tiol libre es la glucocerebrosidasa (GCB) , y en la que el carbohidrato es la sacarosa. En algunas... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende una proteína que tiene un tiol libre y un carbohidrato, en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para mantener la estabilidad de la proteína, y en la que el pH de la composición es entre 4, 5 y 6, 5, en la que la proteína que tiene un tiol libre es la glucocerebrosidasa (GCB) , y en la que el carbohidrato es la sacarosa.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende además un antioxidante, en la que el antioxidante y el carbohidrato están presentes en cantidades suficientes para mantener la estabilidad de la proteína.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende además un tensioactivo.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la estabilidad es al menos 5-80% mayor, bajo condiciones preseleccionadas, que la estabilidad de una composición que se diferencia porque carece del carbohidrato.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para aumentar la estabilidad de la proteína.

6. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para inhibir la reacción de un tiol libre sobre una primera molécula de la proteína, con un tiol libre sobre una segunda molécula de la proteína para formar un agregado.

7. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para inhibir la formación de un agregado formado mediante la reacción de un tiol libre sobre una primera molécula de la proteína, con un tiol libre sobre una segunda molécula de la proteína en al menos 5-80%, bajo condiciones preseleccionadas, comparado con la misma composición que carece del carbohidrato.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para que, tras una conservación en un recipiente hermético a gases a una temperatura de 2-8 ºC durante un periodo de 6 meses, la composición retenga al menos 85% de la estabilidad que la composición tenía antes de la conservación.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en la que la conservación se realiza en la oscuridad.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para que tenga una estabilidad comparable a la de una composición liofilizada que comprende sacarosa, polisorbato-20 al 0, 01%, pH 6, 0, citrato 50 mM.

11. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende carbohidrato aproximadamente al 1-40%.

12. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición es un líquido.

13. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición contiene O2 a menos de aproximadamente 10%.

14. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición se prepara mediante un método que comprende la eliminación física del O2 de la composición.

15. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición es una composición líquida de GCB, en la que la composición se produce exponiendo la composición a un gas inerte, y en la que el gas inerte está presente a una concentración mayor que en la atmósfera ambiental.

16. La composición farmacéutica de la reivindicación 15, que comprende además un antioxidante.

17. La composición farmacéutica de la reivindicación 16, en la que el antioxidante es cisteína, cisteína-HCl, o metionina.

18. La composición farmacéutica de la reivindicación 17, en la que el antioxidante es cisteína, cisteína-HCl, o metionina, y está presente del 0, 001% al 10% (en peso/volumen) , y el carbohidrato está presente del 1% al 40% (en peso/volumen) .

19. La composición farmacéutica de la reivindicación 15, que comprende además un tensioactivo.

20. La composición farmacéutica de la reivindicación 19, en la que el tensioactivo es el poloxámero 188.

21. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición es una composición líquida de GCB, en la que el pH de la composición es entre 4, 5 y 6, 5, y en la que el carbohidrato está presente en una cantidad suficiente para mantener las características de integridad bioquímica y bioactividad de la GCB a ese pH.

22. La composición farmacéutica de la reivindicación 21, en la que el pH está en el intervalo de 5, 0 a 6, 0.

23. La composición farmacéutica de la reivindicación 21, en la que el carbohidrato está presente del 1% al 40% (en peso/volumen) .

24. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición es una composición líquida de GCB que comprende GCB, un antioxidante, y un carbohidrato, y en la que la composición se produce exponiendo la composición a un gas inerte.

25. La composición farmacéutica de la reivindicación 24, que comprende GCB aproximadamente 0, 1-40 mg/ml, cisteína aproximadamente al 0, 001-10%, sacarosa al 1-40%, a un pH de 5, 5-6, 0, y en la que el nivel de O2 disuelto es menor que aproximadamente 10%.

26. La composición farmacéutica de la reivindicación 24, que comprende además un tensioactivo.

27. La composición farmacéutica de la reivindicación 26, en la que el tensioactivo es el poloxámero 188.

28. Un recipiente hermético a gases que comprende la composición farmacéutica de la reivindicación 1, un componente de proteína, y un espacio superior, en el que el espacio superior es al menos 90% (en volumen/volumen) un gas inerte.

29. El recipiente hermético a gases de la reivindicación 28, en el que el recipiente es una jeringa prerrellena, un vial,

o una ampolla. 30. El recipiente hermético a gases de la reivindicación 29, en el que la jeringa prerrellena es una jeringa sin aguja. 31. Un método para envasar la composición farmacéutica de la reivindicación 1, comprendiendo dicho método

poner en contacto la GCB con un gas inerte para reducir la cantidad de una especie reactiva, e introducir la GCB y el gas inerte en un recipiente hermético a gases.

32. El método de la reivindicación 31, en el que el gas inerte es N2 o Ar, y la especie reactiva es O2. 33. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, para su uso en un método para tratar un paciente, comprendiendo dicho método administrar la composición a un paciente.

34. La composición farmacéutica de la reivindicación 33, en la que la administración es mediante administración

subcutánea o por infusión IV. 35. La composición farmacéutica de la reivindicación 15, para su uso en un método para tratar a un paciente que tiene una deficiencia en glucocerebrosidasa.

36. La composición de la reivindicación 35, en la que la deficiencia en glucocerebrosidasa es la enfermedad de

Gaucher. 37. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición farmacéutica no contiene polisorbato.

38. El recipiente hermético a gases de la reivindicación 28, en el que el componente de proteína está en disolución.