COMPOSICION FARMACEUTICA QUE CONTIENE RNA COMO COFACTOR DE LA HEMOSTASIS.

Composición farmacéutica, caracterizada porque contiene una cantidad suficiente de RNA natural o sintético para la activación de la coagulación de la sangre,

o de uno o más fragmentos activadores de la coagulación de la sangre de RNA natural o sintético, ácidos nucleicos peptídicos, ribozimas o aptámeros de RNA y un activador para un factor plasmático de la coagulación sanguínea

Composición farmacéutica que contiene RNA como cofactor de la hemostasis.

Objeto de la invención son composiciones farmacéuticas y aplicaciones de estas composiciones, que junto a factores de coagulación de la sangre contienen adicionalmente ácido ribonucleico (RNA) natural o sintético o fragmentos biológicamente activos de RNA o sustancias degradantes de RNA como ribonucleasas.

Es sabido que los procesos de la hemostasis (coagulación de la sangre y fibrinólisis), que transcurren limitados local y temporalmente después de producirse una lesión de los vasos, están controlados por interacciones específicas entre las células activadas de la pared de los vasos, las plaquetas y factores proteínicos. Por interacciones iónicas en la mayoría de los casos de los factores de coagulación fijadores de calcio y dependientes de la vitamina K se produce una localización de las proteínas activas en la hemostasis en biomembranas cargadas sobre todo negativamente en el sitio de la lesión. In vitro, estas interacciones, y con ello la activación del sistema de la coagulación sanguínea así como la magnitud de la formación de un coágulo de fibrina pueden ser inhibidas por sustancias complejantes tales como ácido etilenodiamina-tetraacético (EDTA) o citrato. El empleo de tales anticoagulantes está prohibido in vivo; en este caso puede inhibirse la fijación de calcio a los factores de coagulación mediante terapia con antagonistas orales de la vitamina K, con lo que se reduce la magnitud de la hemostasis.

Además de la formación de fosfolípidos cargados negativamente por puesta al descubierto de las membranas celulares de las plaquetas y otras células vasculares, se llega también después de una lesión de la pared de los vasos a la exposición de componentes intracelulares, particularmente de las proteínas citosólicas. Está confirmado que el sistema de la coagulación sanguínea comprende dos vías de activación diferentes en forma de cascada de factores de coagulación presentes en el plasma. Dependiendo del mecanismo desencadenante se utiliza preferiblemente la vía endógena o la exógena para el comienzo de la coagulación. En el caso de una lesión tisular, se expone como iniciador de la vía de coagulación exógena la tromboplastina (factor tisular, TF) con fosfolípidos de las células afectadas. La función particular del factor de coagulación VII en estos procesos es conocida por la memoria descriptiva de patente alemana 199 03 693. La tromboplastina permanente en las membranas puede fijar tanto el Factor de coagulación VII (FVII) como el Factor VII activado (FVIIa) circulante. Este complejo TF-FVIIa conduce, en presencia de iones calcio y lípidos a la fijación del FX, que por proteólisis limitada se convierte en su forma activada (FXa). FXa conduce nuevamente, por activación de la protrombina en trombina, a la formación de fibrina y con ello finalmente al cierre de la herida.

Conforme a los conocimientos actuales, la activación adicional del FVII unido a la tromboplastina se efectúa sobre todo autocatalíticamente, pero se ve favorecida sobre todo después de la iniciación de la cascada de coagulación por FXa y trombina, lo que conduce a una intensificación clara de la cascada de reacción.

De estos descubrimientos pudo deducirse el conocimiento de que, en determinadas situaciones clínicas, está indicada la aplicación de FVIIa o concentrados que contienen FVIIa. En el caso de pacientes, que padecen por ejemplo hemofilia A y como consecuencia de la administración de FVIII han desarrollado anticuerpos contra FVIII, se aprovecha la denominada actividad de bypass del inhibidor FVIII (FEIBA) del FVIIa. En este caso se ha observado que FVIIa es satisfactoriamente compatible y no conduce a tendencia alguna de trombosis, pero para ello es apropiado asegurar la coagulación en una proporción limitada pero suficiente. FVIIa recombinante se utiliza ya terapéutica y profilácticamente. El FVII obtenido a partir de plasma sanguíneo puede activarse asimismo y utilizarse luego. Para esta activación pueden utilizarse, conforme a los conocimientos actuales, proteasas tales como trombina que, sin embargo, activan fuertemente por sí mismas como tales la coagulación y pueden conducir a un riesgo de trombosis. Por esta razón, es necesaria la eliminación o desactivación subsiguiente de la trombina y conduce a pérdidas de rendimiento. El empleo de FXa o FIIa (trombina) está contraindicado en muchos casos, debido al riesgo de trombosis asociado al mismo, y se indica únicamente en casos de emergencia, por ejemplo en casos de pérdida extremada de sangre y hemorragias incoercibles.

FVIIa se encuentra solo en concentraciones muy pequeñas en el plasma de las personas sanas. Acerca de la formación y procedencia del FVIIa circulante en la sangre se sabe muy poco hasta ahora. Por esta razón, se supuso que trazas de tromboplastina expresada o liberada por una destrucción celular podrían jugar un papel en este contexto. A pesar de las investigaciones intensivas de todos los fenómenos relacionados con la coagulación de la sangre, no han podido encontrarse hasta ahora datos de ningún tipo a favor de que componentes de las células lesionadas pudieran jugar un papel decisivo en el desencadenamiento de los procesos hemostáticos.

Sorprendentemente, se ha encontrado ahora que entre los componentes liberados por los tejidos y células lesionados, el RNA extracelular representa un cofactor inicial importante para el desencadenamiento de la cascada de coagulación (a) extrínseca y (b) intrínseca. Esta observación da lugar a investigar más a fondo la función del RNA o de fragmentos biológicamente activos del RNA o de RNAsas en los procesos hemostáticos y desarrollar preparaciones farmacéuticas a las cuales se añaden para la activación de la hemostasis RNA natural o sintético o fragmentos de RNA biológicamente activos, o a las cuales se añaden las ribonucleasas respectivas para la inhibición de las funciones extracelulares del RNA. El RNA extracelular representa en este caso la superficie natural extraña para la activación del sistema de la fase de contacto plasmática, cuya iniciación ha sido descrita hasta ahora in vitro por caolín u otras sustancias polianiónicas.

Objeto de la invención es por tanto una composición farmacéutica, que contiene una cantidad suficiente para la activación de la coagulación sanguínea de RNA natural o sintético o de uno o varios de los fragmentos de RNA activadores de la coagulación, ácidos nucleicos peptídicos, ribozimas o aptámeros de RNA. Una preparación de este tipo comprende adicionalmente un activador para un factor de la coagulación plasmático. Como activador es particularmente apropiada (a) la proteasa activadora del Factor VII (FSAP) o su proenzima, y (b) componentes de la fase de contacto como Factor XII, quininógeno y precalicreína. Adicionalmente es objeto de la invención la utilización de una composición farmacéutica para la producción de un medicamento que contiene ribonucleasas, que suprimen o inhiben la acción procoagulante del RNA.

Las composiciones farmacéuticas correspondientes a la invención están basadas en la idea de que el RNA representa el cofactor más eficaz para la proenzima de la FSAP y conduce a la activación de esta enzima. Esta interacción se consigue no sólo para RNA natural de homogeneizados de células o sobrenadantes de trombocitos activados, sino también con fracciones obtenidas a partir de RNA citosólico (sobre todo RNA ribosómico) o RNA sintético. En este caso no existe ostensiblemente ningún efecto de cofactor específico de las células, dado que incluso el RNA bacteriano y viral es eficaz y que las moléculas de RNA en los diferentes tipos de células son muy análogas, por lo que manifiestamente la alta carga negativa en exceso determina las funciones del RNA como cofactor de la FSAP.

Estas ideas se ven respaldadas por la observación de que FSAP puede fijarse específicamente al RNA y disociarse nuevamente por una solución hipertónica de sal común. Por tanto, es notable que, en condiciones fisiológicas, pueda comprobarse una fijación específica de FSAP solamente por RNA, pero no por DNA.

La invención está basada así pues en la idea de que, por la interacción de RNA con FSAP, que es el factor más activo de los factores proenzimáticos VII de la coagulación, se induce la activación extrínseca de la coagulación sanguínea. Esta vía de la coagulación activada específicamente por lesiones tisulares se pone en marcha por tanto por el nuevo cofactor RNA (natural o sintético).

Al mismo tiempo, el RNA representa el cofactor natural...

1. Composición farmacéutica, caracterizada porque contiene una cantidad suficiente de RNA natural o sintético para la activación de la coagulación de la sangre, o de uno o más fragmentos activadores de la coagulación de la sangre de RNA natural o sintético, ácidos nucleicos peptídicos, ribozimas o aptámeros de RNA y un activador para un factor plasmático de la coagulación sanguínea.

2. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, caracterizada porque contiene como activador la proteasa activadora del Factor VII (= FSAP) o su proenzima.

3. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, caracterizada porque contiene como activador componentes de la fase de contacto, particularmente Factor XII, quininógeno y/o precalicreína.

4. Utilización de una composición farmacéutica para la producción de un medicamento para la activación de la coagulación sanguínea, caracterizada porque contiene una cantidad suficiente de RNA natural o sintético para la activación de la coagulación sanguínea, o de uno o más fragmentos activadores de la coagulación sanguínea de RNA natural o sintético, ácidos nucleicos peptídicos, ribozimas o aptámeros de RNA.

5. Utilización de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para la producción de un medicamento para la activación de la coagulación sanguínea.

6. Utilización de una composición farmacéutica según la reivindicación 4 ó 5 para el desencadenamiento de la cascada de coagulación extrínseca.

7. Utilización de una composición farmacéutica según la reivindicación 4 ó 5 para el desencadenamiento de la cascada de coagulación intrínseca.

8. Utilización de una composición farmacéutica para la producción de un medicamento para la inhibición de la coagulación y/o la supresión o prevención del efecto procoagulante del RNA, caracterizada porque la misma contiene una cantidad suficiente para la inhibición de la coagulación de una o más ribonucleasas, que suprimen o inhiben la acción procoagulante del RNA.