Combinación del antagonista de la angiopoyetina-2 y del antagonista de VEGF-A, y/o KDR, y/o Flt1 para el tratamiento del cáncer.

Una combinación de un antagonista de anticuerpo de la actividad biológica de la Angiopoyetina-2,

que inhibe launión Ang-2/Tie-2, y un antagonista de la actividad biológica de:

I. VEGF-A, y/o

II. KDR, y/o

III. Flt1.

en donde el antagonista del anticuerpo de la Angiopoyetina-2 es un anticuerpo que comprende:(a) una región VH que tiene al menos 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 6;y

(b) una región VL que tiene al menos 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 8 y

Combinación del antagonista de la angiopoyetina-2 y del antagonista de VEGF-A, y/o KDR, y/o Flt1 para el tratamiento del cáncer

Esta invención se relaciona con las composiciones que poseen actividad anti-angiogénica y son por lo tanto útiles en métodos de tratamiento de enfermedades asociados con la angiogénesis en el cuerpo animal o humano. Más específicamente la invención concierne a una combinación de un antagonista de la actividad biológica de la Angiopoyetina-2 y un antagonista de la actividad biológica de VEGF-A, y/o KDR, y/o Flt1, y los usos de tales antagonistas. Tales combinaciones son también útiles para el tratamiento de enfermedades asociadas con la actividad de la Angiopoyetina-2 y VEGF-A, y/o KDR, y/o Flt1.

La angiogénesis, la formación de nuevos vasos sanguíneos a partir de la vasculatura existente, es un proceso biológico complejo requerido para la formación y funciones fisiológicas virtualmente de todos los órganos. Un elemento esencial de la embriogénesis es el crecimiento fisiológico normal, los procesos patológicos y de reparación tales como la expansión tumoral. Normalmente, la angiogénesis está estrechamente regulada por el equilibrio local de factores angiogénicos y angiostáticos en un proceso de múltiples etapas que implica el crecimiento, la ramificación de los vasos y la formación de túbulos por células endoteliales (que implica procesos tales como la activación de las células endoteliales (EC) , la desestabilización de los vasos, la síntesis y liberación de enzimas degradantes, la migración de las EC, la proliferación de las EC, la organización y diferenciación de las EC y la maduración de los vasos) .

En el adulto, la angiogénesis fisiológica se limita en gran parte a la cicatrización de heridas y varios componentes de la función reproductiva y el desarrollo embrionario de la hembra. En la angiogénesis relacionada con enfermedades que incluye toda la angiogénesis anormal, indeseable o patológica, el equilibrio local entre factores angiogénicos y angiostáticos se desregula lo que conduce a la formación inadecuada y/o estructuralmente anormal de los vasos sanguíneos. La angiogénesis patológica se ha asociado con estados de enfermedad que incluyen la retinopatía diabética, psoriasis, cáncer, artritis reumatoide, ateroma, sarcoma de Kaposi y hemangioma (Fan y otros, 1995, Trends Pharmacology. Science. 16: 5766; Folkman, 1995, Nature Medicine 1: 27-31) . En cáncer, el crecimiento de tumores primarios y secundarios más allá de 12 mm3 requiere la angiogénesis (Folkman, J. New England Journal of Medicine 1995; 33, 1757-1763) .

Muchos sistemas de transducción de señal se han implicado en la regulación de la angiogénesis y se conoce un número de factores como moduladores de la respuesta EC in vitro y el crecimiento de los vasos sanguíneos in vivo. Los receptores de tirosina cinasas (RTK) son importantes transmisores de señales bioquímicas a través de la membrana plasmática de las células. Estas moléculas de transmembrana, de forma característica, consisten de un dominio de unión al ligando extracelular conectado a través de un segmento en la membrana plasmática a un dominio tirosina cinasa intracelular. La unión del ligando al receptor resulta en la estimulación de la actividad tirosina cinasa asociada al receptor, lo cual conlleva a la fosforilación de los residuos de tirosina tanto en el receptor como en otras moléculas intracelulares. Estos cambios en la fosforilación de la tirosina inician una cascada de señalización que conduce a una variedad de respuestas celulares. Hasta la fecha, se han identificado al menos diecinueve subfamilias distintas de RTK, definidas por homología de secuencia de aminoácidos.

Se cree que el VEGF es un importante estimulador de la angiogénesis normal y la relacionada con la enfermedad (Jakeman, y otros 1993 Endocrinology: 133, 848-859; Kolch, y otros 1995 Breast Cancer Research and Treatment: 36, 139-155) y la permeabilidad vascular (Connolly, y otros 1989 J. Biol. Chem: 264, 20017-20024) . El antagonismo de la acción del VEGF mediante el secuestro del VEGF con anticuerpo puede resultar en la inhibición del crecimiento tumoral (Kim, y otros 1993 Nature: 362, 841-844) . La disrupción heterocigota del gen VEGF resultó en deficiencias fatales en la vascularización (Carmeliet, y otros 1996 Nature 380:435-439; Ferrara, y otros 1996 Nature 380:439-442) .

El VEGF es el factor de crecimiento vascular más potente y ubicuo conocido. Antes de la identificación del papel del VEGF como un mitógeno secretado para las células endoteliales, se identificó como un factor de permeabilidad vascular, lo que destacó la capacidad del VEGF para controlar muchos aspectos distintos de comportamiento de las células endoteliales, que incluyen la proliferación, la migración, la especialización y la supervivencia (Ruhrberg, 2003 BioEssays 25:1052-1060) . El VEGF, conocido además como el VEGF-A, fue el primer miembro de la familia del VEGF de glicoproteínas diméricas estructuralmente relacionadas que pertenecen a la superfamilia del factor de crecimiento derivado de plaqueta que se identificó. Además del miembro fundador, la familia del VEGF incluye VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, factor de crecimiento placentario (PIGF) y el VEGF derivado de glándula endocrina (EG-VEGF) . Las formas activas de VEGF se sintetizan ya sea como homodímeros o heterodímeros con otros miembros de la familia VEGF. El VEGF-A existe en seis isoformas generadas mediante el corte y empalme alternativo; VEGF121, VEGF145, VEGF165, VEGF183, VEGF189 y VEGF206.

Esas isoformas difieren principalmente en su biodisponibilidad, la isoforma predominante es el VEGF165 (Podar, y otros 2005 Blood 105 (4) :1383-1395) . La regulación del corte y empalme durante la embriogénesis para producir proporciones específicas de la etapa y del tejido de las diversas isoformas crea rico potencial para comportamientos distintos y dependientes del contexto de las células endoteliales en respuesta al VEGF.

Se sabe que los miembros de la familia del VEGF se unen con diferentes afinidades a tres receptores tirosina cinasa relacionados; el VEGFR1 (el receptor de tirosina cinasa de tipo fms, Flt o Flt1) , el VEGFR2 (el receptor que contiene la inserción de dominio de cinasa, el KDR (además denominado como Flk-1) ) , y el VEGFR3 (otro receptor tirosina cinasa de tipo fms, Flt4) . Dos de estos RTK relacionados, Flt1 y KDR, han mostrado unirse al VEGF con alta afinidad (De Vries y otros, 1992, Science 255: 989–991; Terman y otros, 1992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992, 187: 1579-1586) . La unión del VEGF a estos receptores expresados en células heterólogas ha estado asociada con cambios en el estado de fosforilación de la tirosina en las proteínas celulares y en los flujos de calcio.

Los estudios en ratones knock-out han demostrado que la alteración en cualquiera de Flt1 o KDR, causa la muerte a la mitad de la gestación debido a defectos vasculares agudos. Sin embargo, los fenotipos son distintos; la deficiencia de KDR conduce a una falta de EC y de un sistema hematopoyético en desarrollo (Shalaby, y otros. 1995 Nature 376:62-66) , la deficiencia de Flt1 no afecta los progenitores hematopoyéticos y las EC, pero estas no pueden ensamblarse en vasos funcionales (Fong, y otros. 1995 Nature 376:66-70) . Flt4 se expresa ampliamente en el embrión antes de restringirse a los vasos linfáticos en los adultos. Los ratones knock-out de Flt4 mostraron un papel esencial para Flt4 en el desarrollo temprano del sistema cardiovascular, en la remodelación y maduración de las redes vasculares primarias en vasos sanguíneos más grandes (Dumont, y otros. 1998 Science 282:946-949) .

Además de la familia del VEGF, se cree que las angiopoyetinas están implicadas en el desarrollo vascular y la angiogénesis posnatal. Las angiopoyetinas incluyen un agonista de de origen natural, angiopoyetina-1 (Angiopoyetina-1) , así como un antagonista de de origen natural, angiopoyetina-2 (Angiopoyetina-2) . Se piensa que la función de la Angiopoyetina-1 es ser conservada en el adulto, donde se expresa amplia y constitutivamente (Hanahan, Science, 277:48-50 (1997) ; Zagzag, y otros, Exp Neurology, 159:391-400 (1999) ) . Por el contrario, la expresión de la Angiopoyetina-2 se limita principalmente a los sitios de remodelación vascular donde se piensa que bloquea la estabilización constitutiva o función de maduración de la Angiopoyetina-1, lo que permite a los vasos volver a, y permanecer en, un estado plástico que pueden ser más sensibles a las señales de crecimiento (Hanahan, 1997; Holash y otros, Oncogene 18:5356-62 (1999) ; Maisonpierre, 1997) . Los estudios de la expresión de la Angiopoyetina-2 en la angiogénesis relacionada con la enfermedad encontraron que... [Seguir leyendo]

1. Una combinación de un antagonista de anticuerpo de la actividad biológica de la Angiopoyetina-2, que inhibe la unión Ang-2/Tie-2, y un antagonista de la actividad biológica de:

I. VEGF-A, y/o II. KDR, y/o III. Flt1.

en donde el antagonista del anticuerpo de la Angiopoyetina-2 es un anticuerpo que comprende:

(a) una región VH que tiene al menos 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 6; y

(b) una región VL que tiene al menos 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 8 y

2. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el antagonista del anticuerpo de la Angiopoyetina-22 es un anticuerpo que comprende:

(a) una región VH que tiene al menos 99% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 6; y

(b) una región VL que tiene al menos 99% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 8 y

3. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 1 o 2 en donde el antagonista del anticuerpo de la Angiopoyetina-2 contiene sustituciones conservadoras de aminoácidos.

4. Una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en donde el antagonista de anticuerpo de la Angiopoyetina-2 sólo contiene sustituciones conservadoras de aminoácidos fuera de las regiones CDR.

5. Una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en donde el antagonista de la Angiopoyetina-2 es un anticuerpo monoclonal completamente humano.

6. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en donde el anticuerpo se une al mismo epítopo que un anticuerpo que comprende

(a) una región VH que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 6; y

(b) una región VL que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 8.

7. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 6 en donde el anticuerpo comprende:

(a) una región VH que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 6; y

(b) una región VL que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO. 8.

8. Una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en donde el antagonista de la actividad biológica de KDR o Flt1 es un anticuerpo.

9. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 8 en donde el antagonista de la actividad biológica de KDR es DC101.

10. Una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en donde el antagonista de la actividad biológica de VEGF-A es un anticuerpo.

11. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el antagonista de la actividad biológica de VEGF-A es Avastin.

12. Una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en donde el antagonista de la actividad biológica de KDR o Flt1 es un inhibidor de tirosina cinasa.

13. Una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en donde el antagonista de la actividad biológica de KDR o Flt1 se selecciona de Zactima™, AZD2171, SU11248, SU14813, Vatalanib, BAY43-9006, XL647, XL-999, AG-013736, AMG706, BIBF1120, TSU68, GW786034, AEE788, CP-547632, KRN 951, CHIR258, CEP-7055, OSI-930, ABT-869, E7080, ZK-304709, BAY57-9352, L-21649, BMS582664, XL-880, XL-184 o XL-820.

14. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 13 en donde el antagonista de la actividad biológica de KDR o Flt1 se selecciona de Zactima™, AZD2171, SU11248 o BA.

4. 9006.

15. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 14 en donde el antagonista de la actividad biológica de KDR o Flt1 es Zactima™.

16. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 14 en donde el antagonista de la actividad biológica de KDR o Flt1 es AZD2171.

17. Una composición farmacéutica que comprende una combinación de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16.

18. Una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para usar en antagonizar la actividad biológica de la Angiopoyetina-2 y uno cualquiera de;

I. VEGF-A, y/o

II. KDR, y/o

III. Flt1.

19. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para usar en el tratamiento de la angiogénesis relacionada con la enfermedad en un mamífero.

20. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para usar en el tratamiento cáncer en un mamífero.