CELULA HUESPED QUE COMPRENDE UN VIRUS RECOMBINANTE QUE EXPRESA UN ANTIGENO Y UN VIRUS RECOMBINANTE QUE EXPRESA UNA MOLECULA INMUNOESTIMULADORA.

Una célula huésped infectada con

a) un primer virus recombinante que ha incorporado en un genoma vírico o porción del mismo uno o más genes o porciones de los mismos que codifican un antígeno de un estado de enfermedad,

y

b) un segundo virus recombinante que ha incorporado en un genoma vírico o porción del mismo uno o más genes o porciones de los mismos que codifican un B7.1, B7.2 o B7.1 y B7.2

Célula huésped que comprende un virus recombinante que expresa un antígeno y un virus recombinante que expresa una molécula inmunoestimuladora.

La presente invención se refiere a una composición de vacunas de vectores víricos recombinantes para la prevención o el tratamiento de enfermedades patogénicas y cáncer. Más particularmente, se refiere a una composición de vectores víricos recombinantes que comprenden genes que codifican un(os) antígeno(s) y vectores víricos recombinantes que comprenden un(os) genes que codifica(n) alguna(s) molécula(s) inmunoestimuladora(s). Estos genes se pueden insertar en un vector recombinante o vectores víricos separados. Otros aspecto de la presente invención es el potenciamiento de la respuesta inmune frente a las células enfermas (tales como células tumorales) en un mamífero mediante la infección de estas células con un vector recombinante que contiene un(os) gen(es) inmunoestimulador(es) tanto in situ, como in vitro y la reintroducción de las células infectadas en el huésped.

Hasta la fecha, los intentos para estimular respuestas inmunes activas en pacientes con cáncer se pueden clasificar como no específicas (es decir, el uso de BCG) o específicas, es decir, el uso de células tumorales, extractos de células tumorales, mezclas de antígenos de fluidos sobrenadantes de cultivos celulares u oncolisados de células tumorales. La inmensa mayoría de estos esfuerzos se han desarrollado en pacientes con melanoma metastásico. El desarrollo de una vacuna recombinante implica el uso de productos génicos específicos y definidos o epitopos de una molécula inmunógena o una estimuladora. Se pueden usar también vacunas recombinantes para terapia génica en las que la última solución requiere usar células de un paciente dado y la inserción de un gen de una molécula inmunoestimuladora tal como B7.1, B7.2, IL-2 o GM-CSF en dichas células, tanto in situ como para devolver las células cultivadas al paciente.

Las vacunas recombinantes pueden tomar muchas formas. Se pueden sintetizar proteínas recombinantes mediante vectores tales como baculovirus (un vector de insecto) o en células eucarióticas. Los péptidos sintéticos pueden servir también como inmunógenos. Las vacunas de péptidos constituidas por entre de 9 a diversas docenas de aminoácidos pueden tomar dos formas. Se pueden mezclar con adyuvantes o se pueden usar para pulsar células de la sangre periférica como células que presentan antígenos (APC) para la reinfusión al paciente. Se pueden construir también vacunas recombinantes insertando el gen que codifica un antígeno asociado a un tumor dado en un vector. Algunos de los vectores comunes usados son el virus vaccinia, los virus de la viruela aviar tales como la difteroviruela aviar o la viruela del canario, BCG, adenovirus y Salmonella. Estos vectores, cada uno con sus ventajas y desventajas se emplean normalmente debido a la inmunogenicidad de sus proteínas constitutivas, volviendo de esta manera la proteína o el epitopo del gen insertado más inmunogénicos. Las vacunas recombinantes pueden también tomar la forma de un anticuerpo anti-idiotipo que se dirige contra un anticuerpo monoclonal preparado contra un antígeno asociado con un tumor dado. Más recientemente, se han preparado vacunas de polinucleótidos que están constituidas por ADN desnudo de un gen asociado con un tumor en un plásmido que contiene un promotor. Mientras que todas las anteriores se han analizado en modelos animales, muy pocos estudios han comparado las eficacias relativas de una solución frente a la otra. Los ensayos clínicos han comenzado ahora usando algunas de estos enfoques en pacientes con cáncer de mama y otros carcinomas y otros que comenzarán más probablemente en el futuro próximo.

Existen diversos antígenos que se han identificado en la actualidad para uso potencial en vacunas recombinantes para terapia del cáncer. La primera de éstas es el oncogen c-erbB72 que se encuentra que se sobreexpresa en aproximadamente el 20-30% de los tumores de mama (Pietras RJ y col. Oncogene 9: 1829-1838, 1994). Se ha demostrado (Bernards R y col. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 6854-6858, 1987) que el oncogen c-erbB/2 mutado puntualmente en ratas, cuando se inserta en el virus vaccinia, es inmunogénico y puede conducir a efectos antitumorales. El c-erbB/2 humano, sin embargo, no está mutado. Se ha demostrado recientemente (Disis ML y col., Cancer Res. 54: 1071-1076, 1994), que este gen codifica diversos epitopos que parecen generar respuestas de las células T humanas in vitro. El oncogen p53 mutado puntualmente, encontrado también en muchos tumores de mama humanos, ha demostrado ser una diana potencial de las células T citotóxicas (Yanuck M y col. Cancer Res. 53: 3257-3261, 1993). Se están iniciando en la actualidad estudios clínicos en los que se están pulsando péptidos que reflejan mutaciones puntuales específicas con linfocitos de sangre periférica humana (PBL) y readministrarse a pacientes. La mucina de cáncer de mama, MUC-1 o DF3, representa un antígeno de diferenciación de la mama (Abe M y Kufe D, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 282-286, 1993). Aunque MUC-1 se expresa en una gama de tejidos epiteliales normales, parece estar glicosilada únicamente en el tejido del cáncer de mama. Se ha informado de que la repetición en tándem de la proteína del núcleo de la mucina MUC-1 es inmunogénica en seres humanos (Barnd DL y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 7159-7163, 1989) porque los nódulos linfáticos de pacientes con cáncer de mama que contienen células T se pueden activar por los péptidos MUC-1 de una manera no restringida a MHC. Se ha demostrado también (Rughetti A y col., Cancer Res. 53: 2457-2459, 1993) que los pacientes con cáncer de ovario pueden tener respuestas de anticuerpos en esta región. Se ha informado de modelos animales en los que se ha insertado el gen MUC-1 en el virus vaccinia (Hareuveni M y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 9498-9502, 1990; Hareuveni y col., Vaccine 9: 618-626, 1991). Se está poniendo en marcha actualmente un ensayo clínico en el que se está pulsando el péptido MUC-1 con PBL humanos en pacientes con cáncer de mama. Otra mucina que representa una diana potencial de la terapia cancerosa es TAG-72 que se encuentra en aproximadamente el 70-80% de los cánceres de mama humanos (Thor A y col., Cancer Res. 46: 3118-3124, 1986).

La mayor parte de los intentos de inmunización activa contra los antígenos cancerosos han implicado células tumorales completas o fragmentos de células tumorales, aunque sería más deseable inmunizar específicamente contra antígenos tumorales únicos que distinguir las células malignas de las normales. Se comprende poco la naturaleza molecular de los antígenos asociados a tumores reconocidos por las células T. A diferencia de los anticuerpos que reconocen los epitopos o las proteínas intactas, las células T reconocen fragmentos cortos de péptidos (8-18 aminoácidos) que se presentan en la superficie celular mediante las moléculas de histocompatibilidad mayor de tipo I ó II (MHC) y es probable que los antígenos asociados a tumores sean presentados y reconocidos por las células T de esta manera.

Se han identificado numerosos genes que codifican antígenos del tumor de melanoma reconocidos por TIL en el contexto de la molécula HLA-A2 de tipo I (Kawakami Y. y col. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 3515-3519, 1994; Kawakami Y. y col. J. Exp. Med 180: 347-352, 1994; Kawakami Y. y col. Cancer Res. 54: 3124-3126, 1994).

El antígeno carcinoembriónico humano (CEA) representa también una molécula diana potencial para la inmunoterapia de una gama de carcinomas humanos entre los que se incluyen los carcinomas colorrectal, gástrico, pancreático, de mama, y de células no pequeñas (Robbins PF y col., Int. J. Cancer 53: 892-897, 1993; Esteban JM y col., Cancer 74: 1575-1583, 1994). Los estudios experimentales han demostrado que los anticuerpos anti-idiotipo dirigidos contra los anticuerpos monoclonales anti-CEA pueden estimular respuestas inmunes en ratones (Bhattacharya-Chatterjee M y col., Int. Rev. Immuno. 7: 289-302, 1991). Están actualmente en marcha estudios clínicos que usan este anticuerpo anti-idiotipo. Se ha desarrollado también una vacuna recombinante en la que el gen CEA se ha insertado en el virus vaccinia (Kantor J. y col., J. Natl. Cancer Inst. 84: 1084-1091, 1992). Se acaba de completar un estudio clínico en Fase I que implica esta vacuna.

La identificación de un péptido inmunodominante que representa un antígeno tumoral único ha abierto nuevas posibilidades para la inmunización contra el cáncer. Existen evidencias sustanciales en modelos animales de que la...

1. Una célula huésped infectada con

a) un primer virus recombinante que ha incorporado en un genoma vírico o porción del mismo uno o más genes o porciones de los mismos que codifican un antígeno de un estado de enfermedad, y

b) un segundo virus recombinante que ha incorporado en un genoma vírico o porción del mismo uno o más genes o porciones de los mismos que codifican un B7.1, B7.2 o B7.1 y B7.2.

2. La célula huésped de la reivindicación 1 infectada con

a) un primer virus recombinante que ha incorporado en un genoma vírico o porción del mismo, uno o más genes o porciones de los mismos que codifican un anticuerpo cuyo emplazamiento de unión al antígeno asemeja un antígeno de un estado de enfermedad y

b) un segundo virus recombinante que ha incorporado en un genoma vírico o porción del mismo uno o más genes o porciones de los mismos que codifican un B7.1, B7.2, o B7.1 y B7.2.

3. La célula huésped de la reivindicación 1 ó 2, en la que el primer virus recombinante, el segundo virus recombinante o el primer y el segundo virus recombinantes se seleccionan entre el grupo constituido por retrovirus, difteroviruela aviar, viruela del canario, viruela porcina, adenovirus, virus vaccinia, y poliovirus.

4. La célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el segundo virus recombinante comprende además uno o más genes o porciones de los mismos que codifican una molécula inmunoestimuladora, la molécula inmunoestimuladora se selecciona entre el grupo constituido por IL-2, ICAM-1, LFA-3, CD72, GM-CSF, TNFa, INF?, IL-12, IL-6 y las combinaciones de los mismos.

5. Una célula huésped infectada con un virus recombinante que ha incorporado en un genoma vírico o porción del mismo uno o más genes o porciones de los mismos que codifican un antígeno de un estado de enfermedad y un gen o porción del mismo que codifica B7.1, B7.2, o B7.1 y B7.2.

6. Una célula huésped infectada con un virus recombinante que ha incorporado en un genoma vírico o porción del mismo uno o más genes o porciones de los mismos que codifican un anticuerpo cuyo emplazamiento de unión al antígeno asemeja un antígeno de un estado de enfermedad y uno o más genes o porciones de los mismos que codifican B7.1, B7.2, o B7.1 y B7.2.

7. La célula huésped de las reivindicaciones 5 ó 6, en la que el virus recombinante comprende además uno o más genes o porciones de los mismos que codifican una molécula inmunoestimuladora seleccionada entre el grupo constituido por IL-2, ICAM-1, LFA-3, CD72, GM-CSF, TNF-a, IFN-?, IL-12, IL-6 y sus combinaciones.

8. La célula huésped de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que la célula huésped es una célula presentadora de antígeno, una célula tumoral, una célula infectada con un microorganismo patogénico, o una célula genéticamente deficiente.

9. La célula huésped de la reivindicación 8, en la que la célula presentadora de antígeno es una célula dendrítica o macrófago.

10. La célula huésped de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la que el estado de enfermedad es un cáncer o microorganismo patogénico.

11. La célula huésped de la reivindicación 10, en la que el cáncer es un cáncer primario o metastásico.

12. La célula huésped de la reivindicación 11, en la que el cáncer se selecciona entre el grupo constituido por Linfoma no de Hodgkin, leucemia, linfoma de Hodgkin, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, melanoma, adenocarcinoma, timoma, y sarcoma.

13. La célula huésped de la reivindicación 11, en la que el antígeno es un antígeno asociado a tumor.

14. La célula huésped de la reivindicación 13, en la que el antígeno asociado a tumor se selecciona entre el grupo constituido por antígenos oncofetales, MART-1, Mage-1, Mage-3, gp100, tirosinasa, CEA, PSA, CA-125, erb-2, Muc-1, Muc-2, oncogenes ras mutados puntualmente, oncogenes p53 mutados puntualmente, y TAG-72.

15. La célula huésped de la reivindicación 10, en la que el microorganismo patogénico es virus, bacteria, protozoo, o levadura.

16. La célula huésped de la reivindicación 15, en la que el virus patogénico es VIH, virus de la hepatitis, virus del papiloma humano, virus de la encefalitis equina, virus del herpes simple o virus de la gripe.

17. La célula huésped de la reivindicación 16, en la que el antígeno del estado de enfermedad se selecciona entre el grupo constituido por antígeno de VIH, antígeno del virus de la hepatitis, antígeno del virus del papiloma humano, antígeno de la encefalitis equina, antígeno del virus del herpes simple, y antígeno del virus de la gripe.

18. Una composición farmacéutica que comprende la célula huésped de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

19. La composición farmacéutica de la reivindicación 18, que comprende además una molécula inmunoestimuladora exógena, fármaco quimioterapéutico, antibiótico, fármaco antivírico, o fármaco antifúngico.

20. Uso de la célula huésped de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad patogénica o cáncer, en la que la composición farmacéutica comprende además opcionalmente una molécula inmunoestimuladora exógena, fármaco quimioterapéutico, antibiótico, fármaco antivírico, o fármaco antifúngico.

21. El uso de la reivindicación 20, para potenciar una respuesta inmune contra un estado de enfermedad en un mamífero.

22. El uso de la reivindicación 20 ó 21, para el tratamiento de linfoma no de Hodgkin, leucemia, linfoma de Hodgkin, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, melanoma, adenocarcinoma, timoma y sarcoma.

23. Una célula huésped de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, junto opcionalmente con una molécula inmunoestimuladora exógena, fármaco quimioterapéutico, antibiótico, fármaco antivírico, o fármaco antifúngico, para el uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad patogénica o cáncer.

24. La célula huésped de la reivindicación 23, para el uso en el potenciamiento de una respuesta inmune contra un estado de enfermedad en un mamífero

25. La célula huésped de la reivindicación 23 ó 24, para el uso en el tratamiento de linfoma no de Hodgkin, leucemia, linfoma de Hodgkin, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, melanoma, adenocarcinoma, timoma y sarcoma.