ANTICUERPOS FRENTE A MAdCAM.

La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad de la Solicitud Provisional de Estados Unidos 60/535.490 presentada el 9 de enero de 2004. Antecedentes de la invención La molécula de adhesión celular mucosa adresina (MAdCAM) es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulina de receptores de adhesión celular. La selectividad de dirección de linfocitos a tejido linfoide especializado y sitios de mucosa del tracto gastrointestinal se determina por la expresión endotelial de MAdCAM (Berlin, C. et al., Cell, 80:413-422(1994); Berlin, C., et al., Cell, 74:185-195 (1993); y Erle, D.J., et al., J. Immunol., 153: 517-528 (1994)). MAdCAM se expresa únicamente en la superficie celular de vénulas endoteliales altas de tejido linfoide intestinal organizado, tales como placas de Peyer y ganglios linfáticos mesentéricos (Streeter et al., Nature, 331: 41-6 (1988); Nakache et al., Nature, 337: 179-81 (1989); Briskin et al., Am. J. Pathol. 151-97-110 (1997)), pero también en otros órganos linfoides, tales como páncreas, vesícula biliar y vénulas del bazo y senos marginales de la pulpa blanca del bazo (Briskin et al (1997), mencionado anteriormente; Kraal et al., Am. J. Path., 147: 763-771 (1995)). Aunque MAdCAM desempeña un papel fisiológico en la vigilancia inmunológica del intestino, parece facilitar una extravasación excesiva de linfocitos en enfermedad inflamatoria del intestino en condiciones de inflamación del tracto gastrointestinal crónica. TNF y otras citocinas proinflamatorias aumentan la expresión de MAdCAM endotelial y, en muestras de biopsia tomadas de pacientes con enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, hay un aumento de aproximadamente 2-3 veces focal en expresión de MAdCAM en los sitios de inflamación (Briskin et al. (1997), Souza et al., Gut, 45: 856-63 (1999); Arihiro et al., Pathol Int., 52: 367-74 (2002)). Se han observado patrones similares de expresión elevada en modelos experimentales de colitis (Hesterberg et al., Gastroenterology, 111:1373-1380 (1997); Picarella et al., J. Immunol., 158: 2099-2106 (1997); Connor et al., J Leukoc Biol., 65:349-55 (1999); Kato et al., J Pharmacol Exp Ther., 295:183-9 (2000); Hokari et al., Clin Exp Immunol., 26:259-65 (2001); Shigematsu et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol., 281:G1309-15 (2001)). En otros modelos preclínicos para afecciones inflamatorias, tales como diabetes insulino dependiente (Yang et al. Diabetes, 46: 1542-7 (1997); Hänninen et al., J Immunol., 160: 6018-25 (1998)), enfermedad de injerto contra hospedador (Fujisaki et al., Scand J Gastroenterol., 38: 437-42 (2003), Murai et al., Nat Immunol., 4: 154-60 (2003)), enfermedad hepática crónica (Hillan et al., Liver, 19: 509-18 (1999); Grant et al., Hepatology, 33: 1065-72 (2001)), encefalopatía inflamatoria (Stalder et al., Am J Pathol., 153: 767-83 (1998); Kanawar et al., Immunol Cell Biol., 78: 641-5 (2000)), y gastritis (Barrett et al., J Leukoc Biol., 67: 169-73 (2000); Hatanaka et al., Clin Exp Immunol., 130: 183-9 (2002)), también existe una reactivación de la expresión de MAdCAM fetal y participación de linfocitos 4ß7 + activados en patogénesis de enfermedad. En estos modelos inflamatorios así como modelo de colitis de ratón mediada por hapteno (por ejemplo, TNBS, DSS, etc.) o transferencia adoptiva (CD4 + CD45Rb alta ), el anticuerpo monoclonal (mAb) de rata anti MAdCAM de ratón, MECA- 367, que bloquea la unión de linfocitos 4ß7 + a MAdCAM, reduce el reclutamiento de linfocitos, la extravasación tisular, inflamación y gravedad de la enfermedad. También se han presentado anticuerpos monoclonales de ratón (mAb) contra MAdCAM humana (véase, por ejemplo el documento WO 96/24673 y documento WO 99/58573). Dado el papel de MAdCAM en enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) y otras enfermedades inflamatorias asociadas con el tracto gastrointestinal u otros tejidos, es deseable un medio para inhibir la unión de 4ß7 y reclutamiento de leucocitos mediado por MAdCAM. Sería deseable además tener tales medios terapéuticos con propiedades ventajosas incluyendo pero sin limitación la ausencia de interacciones no deseadas con otras medicaciones en pacientes y propiedades fisicoquímicas favorables tales como valores de pK/pD en seres humanos, solubilidad, estabilidad, periodo de caducidad y semivida in vivo. Una proteína terapéutica, tal como un anticuerpo, estaría ventajosamente sin modificaciones postraduccionales no deseadas o formación de agregados. En consecuencia, existe una necesidad crítica de anticuerpos anti-MAdCAM terapéuticos. Compendio de la invención La presente invención proporciona: Realización (R) 1. Un anticuerpo monoclonal o una parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a MAdCAM con una Kd de 2,35x10 11 M o menos según se mide por resonancia de plasmón superficial e inhibe la unión de MAdCAM humana a 4ß7, en el que la cadena pesada del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende la secuencias de aminoácidos CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y en el que la cadena ligera del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende las secuencia de aminoácidos CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera, del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de Número de Acceso de ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). R2. Un anticuerpo monoclonal o una parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a MAdCAM con una Kd de 2,35x10 11 M o menos según se mide por resonancia de plasmón superficial e inhibe la unión de MAdCAM humana a 4ß7, en el que la cadena pesada del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende las secuencias de aminoácidos CDR1, CDR2 y CDR3 en SEC ID Nº: 34 y la cadena ligera 2 E10150359 25-11-2011   del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende las secuencias de aminoácidos CDR1, CDR2 y CDR3 en SEC ID Nº: 36. R3. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con R1 ó 2, en el que el anticuerpo o parte comprende una cadena pesada que utiliza un gen VH 1-18 humano. R4. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con R1 ó 2, en el que el anticuerpo o parte comprende una cadena ligera que utiliza un gen VK A2 humano. R5. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con R1 en el que dicho anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende una o más de las secuencias de aminoácidos FR1, FR2, FR3 y FR4 del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de Número de acceso ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). R6. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con R2, en el que dicho anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende una o más de las secuencias de aminoácidos FR1, FR2, FR3 y FR4 en SEC ID Nº: 34 o SEC ID Nº: 36. R7. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo, en el que la cadena pesada y la cadena ligera comprenden las secuencias de aminoácidos del comienzo de la CDR1 hasta el final de la CDR3 de la cadena pesada y la cadena ligera, respectivamente, del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de Número de Acceso ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). R8. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con R7, en el que los dominios variables de cadena pesada y cadena ligera del anticuerpo comprenden las secuencias de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada y cadena ligera, respectivamente, del anticuerpo monoclonal producido por hibridoma de Número de Acceso ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). R9. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con R7, que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera del anticuerpo monoclonal producido por hibridoma 03090909 (designación interna 7.16.6). R10. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con R9, en el que el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal humano producido por el hibridoma de Número de Acceso de ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). R11. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con R7, que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera del anticuerpo monoclonal producido por hibridoma 03090909 (designación interna 7.16.6) en el que la lisina C terminal de la cadena pesada se escinde. R12. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo en el que la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos desde el comienzo de la CDR1 hasta el final de la CDR3 en SEC ID Nº: 34 y la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos desde el comienzo de la CDR1 hasta el final de la CDR3 en SEC ID Nº: 4. R13. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con R12, en el que la cadena pesada del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende la secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada en... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal o una parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a MAdCAM con una Kd de 2,35x10 11 M o menos según se mide por resonancia de plasmón superficial e inhibe la unión de MAdCAM humana a 4ß7, en el que la cadena pesada del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende la secuencias de aminoácidos CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y en el que la cadena ligera del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende las secuencia de aminoácidos CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera, del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de Número de Acceso de ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). 2. Un anticuerpo monoclonal o una parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a MAdCAM con una Kd de 2,35x10 11 M o menos según se mide por resonancia de plasmón superficial e inhibe la unión de MAdCAM humana a 4ß7, en el que la cadena pesada del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende las secuencias de aminoácidos CDR1, CDR2 y CDR3 en SEC ID Nº: 34 y la cadena ligera del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende las secuencias de aminoácidos CDR1, CDR2 y CDR3 en SEC ID Nº: 36. 3. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que el anticuerpo o parte comprende una cadena pesada que utiliza un gen VH 1-18 humano. 4. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que el anticuerpo o parte comprende una cadena ligera que utiliza un gen VK A2 humano. 5. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 1 en el que dicho anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende una o más de las secuencias de aminoácidos FR1, FR2, FR3 y FR4 del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de Número de acceso ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). 6. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 2, en el que dicho anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende una o más de las secuencias de aminoácidos FR1, FR2, FR3 y FR4 en SEC ID Nº: 34 o SEC ID Nº: 36. 7. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cadena pesada y la cadena ligera comprenden las secuencias de aminoácidos del comienzo de la CDR1 hasta el final de la CDR3 de la cadena pesada y la cadena ligera, respectivamente, del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma de Número de Acceso ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). 8. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno, en el que los dominios variables de cadena pesada y cadena ligera del anticuerpo comprenden las secuencias de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada y cadena ligera, respectivamente, del anticuerpo monoclonal producido por hibridoma de Número de Acceso ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). 9. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera del anticuerpo monoclonal producido por hibridoma 03090909 (designación interna 7.16.6). 10. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal humano producido por el hibridoma de Número de Acceso de ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). 11. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera del anticuerpo monoclonal producido por hibridoma 03090909 (designación interna 7.16.6) en el que la lisina C terminal de la cadena pesada se escinde. 12. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 2 en el que la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos desde el comienzo de la CDR1 hasta el final de la CDR3 en SEC ID Nº: 34 y la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos desde el comienzo de la CDR1 hasta el final de la CDR3 en SEC ID Nº: 4. 13. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno, en el que la cadena pesada del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende la secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena pesada en SEC ID Nº: 34 y la cadena ligera del anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo comprende la secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera en SEC ID Nº: 36. 14. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 13, que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEC ID Nº 34 y 36 sin las secuencias señal. 15. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 13, que comprende las secuencias de aminoácidos   expuestas en SEC ID Nº 34 y 36 sin las secuencias señal y en el que la lisina C terminal de la cadena pesada se escinde. 16. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes que es una molécula de inmunoglobulina G (IgG), una IgM, una IgE, una IgA o una IgD o un anticuerpo biespecífico. 17. Una parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 que es un fragmento de Fab, un fragmento de F(ab)2, un fragmento Fv o un anticuerpo de cadena sencilla. 18. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 19. La composición farmacéutica de acuerdo con R18 que comprende adicionalmente uno o más agentes antiinflamatorios o inmunomoduladores adicionales. 20. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 19, en la que el o los agentes antiinflamatorios o inmunomoduladores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en corticosteroides, aminosalicilatos, azatioprina, metotrexato, ciclosporina, FK306, IL-10, GM-CSF, rapamicina, agentes anti-TNF y antagonistas de molécula de adhesión. 21. Una vacuna que comprende el anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 22. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 21, siendo la vacuna mucosa. 23. Un kit de diagnóstico que comprende el anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17. 24. Una línea celular de hibridoma que produce un anticuerpo monoclonal humano que se une específicamente a Molécula de Adhesión Celular Mucosa Adresina (MAdCAM), en la que el hibridoma es hibridoma de Número de Acceso ECACC 03090909 (designación interna 7.16.6). 25. Una línea celular aislada que produce el anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17. 26. La línea celular de acuerdo con la reivindicación 25 que produce el anticuerpo de la reivindicación 9 ó 14. 27. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16. 28. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 27. 29. Una célula hospedadora que comprende el vector de acuerdo con la reivindicación 28 o la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 27. 30. Una célula hospedadora que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica la cadena pesada o una parte de unión a antígeno de la misma y una molécula de ácido nucleico que codifica la cadena ligera o una parte de unión a antígeno de la misma del anticuerpo monoclonal o una parte de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17. 31. Un método para producir un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a MAdCAM, que comprende cultivar la célula hospedadora de acuerdo con las reivindicaciones 29 o 30 o la línea celular de acuerdo con las reivindicaciones 24 ó 25 en condiciones adecuadas y recuperar el anticuerpo o parte de unión a antígeno. 32. Un animal transgénico no humano o planta transgénica que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica la cadena pesada o una parte de unión a antígeno de la misma y una molécula de ácido nucleico que codifica la cadena ligera o una parte de unión a antígeno de la misma de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en el que los polipéptidos de cadena pesada y cadena ligera o partes codificados por las moléculas de ácido nucleico se expresan. 33. Un método para aislar un anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a MAdCAM, que comprende la etapa de aislar el anticuerpo o parte del animal transgénico no humano o planta transgénica de acuerdo con la reivindicación 32. 34. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en el que el anticuerpo o parte inhibe la unión de MAdCAM a 4ß7, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un sujeto que lo necesite. 181   35. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de la reivindicación 34, en el que la enfermedad inflamatoria es una enfermedad inflamatoria del tracto gastrointestinal. 36. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de la reivindicación 35; en el que la enfermedad inflamatoria del tracto gastrointestinal se selecciona del grupo que consiste en enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad diverticular, gastritis, enfermedad hepática, esclerosis biliar primaria y colangitis esclerosante. 37. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de la reivindicación 35, en el que la enfermedad inflamatoria del tracto gastrointestinal es enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa. 38. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de la reivindicación 34, en el que la enfermedad inflamatoria es diabetes insulinodependiente o enfermedad de injerto contra hospedador. 39. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en el que el anticuerpo o parte se marca de forma detectable, para su uso en detección de inflamación en un sujeto. 40. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para su uso en la determinación de si existe un aumento en el nivel de leucocitos que expresan 4ß7 en circulación y de este modo detectar el efecto de la administración de un anticuerpo inhibidor anti-MAdCAM o parte de unión a antígeno del mismo a un sujeto. 41. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 40, en el que los leucocitos son linfocitos. 42. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 40, en el que el aumento en el nivel de leucocitos que expresan 4ß7 en circulación se determina por análisis de FACS. 43. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para su uso como un medicamento. 44. Un método para diagnosticar un trastorno caracterizado por MAdCAM humana soluble en circulación que comprende las etapas de: (1) poner en contacto una muestra biológica con el anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 y (2) detectar la unión del anticuerpo o parte a MAdCAM. 45. Un vector de acuerdo con reivindicación 28, en el que el vector comprende una secuencia de control de la expresión unida operativamente a la molécula de ácido nucleico. 182   183   184     186   187   188   189     191