Anticuerpos contra IL-12 humana.

Un anticuerpo monoclonal anti-IL-12 humana, que comprende una subunidad p35 y una subunidad p40 que forman un heterodímero p75,

en el que dicho anticuerpo monoclonal reconoce la subunidad p40 de IL-12 humana y neutraliza al menos 90% de la bioactividad de IL-12 humana medida por:

(a) la inhibición de la proliferación de linfoblastos humanos activados por fitohemaglutinina (PHA) estimulada por IL12, en el que la concentración de dicho anticuerpo monoclonal es 0, 5 μg/ml y la concentración de dicha IL-12 humana es 0, 25 ng/ml o

(b) la inhibición de la producción de IFN-γ por linfoblastos humanos activados por PHA estimulada por IL-12, en el que la concentración de dicho anticuerpo es 0, 5 μg/ml y la concentración de dicha IL-12 humana es 0, 25 ng/ml y en el que dicho anticuerpo monoclonal se puede obtener de un ratón deficiente en un gen de la subunidad p35 o p40 de IL-1-12.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E07005606.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: GRENZACHERSTRASSE, 124 4070 BASEL SUIZA.

Inventor/es: PRESKY, DAVID HOWARD, GATELY,MAURCIE,KENT.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/395 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61P1/04 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 1/00 Medicamentos para el tratamiento de trastornos del tracto alimentario o del aparato digestivo. › para úlceras, gastritis o reflujo esofágico p.ej. antiácidos, inhibidores de la secreción ácida, protectores de la mucosa.
  • A61P19/02 A61P […] › A61P 19/00 Medicamentos para el tratamiento de problemas del esqueleto. › para problemas de las articulaciones, p.ej. artritis, artrosis.
  • A61P25/00 A61P […] › Medicamentos para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso.
  • A61P29/00 A61P […] › Agentes analgésicos, antipiréticos o antiinflamatorios que no actúan sobre el sistema nervioso central, p. ej. agentes antirreumáticos; Antiinflamatorios no esteroideos (AINEs).
  • A61P3/10 A61P […] › A61P 3/00 Medicamentos para el tratamiento de trastornos del metabolismo (de la sangre o de fluido extracelular A61P 7/00). › para la hiperglucemia, p.ej. antidiabéticos.
  • A61P37/02 A61P […] › A61P 37/00 Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos o alérgicos. › Inmunomoduladores.
  • A61P37/06 A61P 37/00 […] › Inmunosupresores, p. ej. medicamentos para el tratamiento del rechazo en injertos.
  • C07K16/24 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
  • C12N5/10 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
  • C12N5/20 C12N 5/00 […] › siendo uno de los integrantes de la fusión un linfocito B.
  • C12P21/08 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › Anticuerpos monoclonales.

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Fragmento de la descripción:

Anticuerpos contra IL-12 humana.

La invención se refiere a un anticuerpo monoclonal anti-IL-12 humana, que comprende una subunidad p35 y una subunidad p40 que forman un heterodímero p75, en donde dicho anticuerpo monoclonal reconoce la subunidad p40 de IL-12 humana y neutraliza al menos 90% de la bioactividad de IL-12 humana medida por

(a) la inhibición de la proliferación de linfoblastos humanos activados por fitohemaglutinina (PHA) estimulada por IL12, en donde la concentración de dicho anticuerpo monoclonal es 0, 5 μg/ml y la concentración de dicha IL-12 humana es 0, 25 ng/ml y

(b) la inhibición de la producción de IFN-γ por linfoblastos humanos activados por PHA estimulada por IL-12, en donde la concentración de dicho anticuerpo es 0, 5 μg/ml y la concentración de dicha IL-12 humana es 0, 25 ng/ml y

en donde dicho anticuerpo monoclonal se puede obtener de un ratón deficiente en un gen de la subunidad p35 o p40 de IL-12.

En una realización, dicho anticuerpo monoclonal presenta reactividad cruzada con IL-12 de mono Rhesus. En otra realización, dicho anticuerpo monoclonal está humanizado. En otra realización, dicho anticuerpo monoclonal es un anticuerpo con una única cadena.

La invención se refiere además a una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo monoclonal de la invención. En una realización, dicha composición es adecuada para la administración parenteral.

La invención se refiere además al uso de dicho anticuerpo monoclonal en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmune. En una realización, el trastorno autoinmune es esclerosis múltiple, artritis reumatoide, diabetes mellitus autoinmune o enfermedad inflamatoria del intestino. En una realización, la enfermedad intestinal inflamatoria es la enfermedad de Crohn o colitis ulcerativa. La invención también se refiere al uso de dicho anticuerpo monoclonal en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad injerto contra huésped o choque séptico.

La interleuquina-12 (IL-12) , primeramente conocida como factor de maduración de linfocitos citotóxicos o factor estimulante de células asesinas naturales, es una citoquina heterodímera de 75 kDa (p75) compuesta por subunidades de 40 kDa (p40) y 35 kDa (p35) unidas por disulfuro. Las subunidades p40 y p35 son polipéptidos que contienen 306 residuos de aminoácido y 197 residuos de aminoácido, respectivamente (Gubler U. y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 88, 4143-4147 (1991) ) .

El heterodímero p75 es la forma biológicamente activa de IL-12 (Gubler, U. y otros, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 4143; Wolf, S.F. y otros, 1991, J. Immunol., 146: 3074) . El heterodímero p75 de IL-12 tanto activa como refuerza respuestas inmunitarias mediadas por células contra antígenos extraños estimulando la producción de células cooperadoras Th 1, estimulando células T activadas y células asesinas naturales (NK) , potenciando la actividad lítica de células NK/LAK y estimulando la producción de IFN-γ por células T y NK en reposo y activadas.

45 Se ha observado que la subunidad p40 de IL-12 es producida en exceso de la subunidad p35 y se encuentra en las formas tanto monómera como dímera (Podlaski, F.J. y otros, 1992, Arch. Biochem. Biophys. 294: 230; D’Andrea, A. y otros, 1992, J. Exp. Med., 176: 1387) . El homodímero p40 de IL-12 es un potente antagonista de IL-12 (Ling, P. y otros, 1995, J. Immunol., 154: 116; Gillessen, S. y otros, 1995, Eur. J. Immunol., 25: 200) . En contraste con la subunidad p40, la subunidad p35 de IL-12 no tiene actividad biológica conocida y la proteína p35 sólo se ha encontrado en asociación con la subunidad p40 como parte del heterodímero p75 de IL-12. Por lo tanto, existen dos tipos importantes de epítopos presentados por IL-12 humana: (1) epítopos presentados por la subunidad p40 y (2) epítopos presentados por la conformación tridimensional del heterodímero p75 de IL-12. Por consiguiente, los presentes inventores diseñan anticuerpos que reconocen epítopos presentes sobre la proteína heterodímera p75 de IL-12 pero no reconocen epítopos presentes sobre la proteína de la subunidad p40 de IL-12 llamados anticuerpos 55 “específicos para el heterodímero”.

Se ha encontrado que los anticuerpos para IL-12 conocidos no son óptimamente eficaces para neutralizar substancialmente la bioactividad de IL-12. Los anticuerpos para IL-12 que reaccionan inmunológicamente con la subunidad p40 no bloquean óptimamente la bioactividad de IL-12 humana. Por ejemplo, el uso de anticuerpos que reaccionan con epítopos presentados por la subunidad p40 es particularmente problemático debido a que se ha observado que la producción de heterodímero p75 de IL-12 da como resultado un exceso de subunidades p40 inactivas con relación al heterodímero p75 bioactivo (Podlaski, F.J., 1992, Arch. Biochem. Biophys. 294: 230; D’Andrea, A. y otros, 1992, J. Exp. Med., 176: 1387) . Como resultado, los anticuerpos para p40 no son tan eficaces como los anticuerpos específicos para el heterodímero para reducir los efectos perjudiciales de la IL-12 debido a que 65 la subunidad p40 sola no es bioactiva, y los anticuerpos para p40 tienden a unirse a las subunidades p40 inactivas en vez de a aquellas subunidades p40 que son parte de un heterodímero p75 bioactivo.

Ni siquiera los anticuerpos conocidos que reaccionan sólo con el heterodímero p75 neutralizan eficazmente la bioactividad de IL-12. Por ejemplo, un anticuerpo específico para el heterodímero p75 de IL-12 previamente identificado, llamado 20C2 (Chizzonite y otros, Cytokine, 6: A82a (1994) y D’Andrea y otros, J. Exp. Med., Vol. 176, 1387-1398 (1992) ) , no puede bloquear substancialmente la proliferación de linfoblastos activados por PHA ni la producción de IFN-γ estimuladas por IL-12 humana.

Las siguientes referencias también divulgan anticuerpos o antisueros anti-IL-12. Müller y otros (J Clin Invest. 1994 November; 94 (5) : 1799-1805) divulgan un anticuerpo monoclonal anti-IL-12 humana de rata que inhibía la proliferación de células T en aproximadamente 50%. Sriskandan y otros. (J Immunol. 1996 Apr 1;156 (7) :2430-2435) divulga un anticuerpo anti-IL-12 de cabra neutralizante. Balashov y otros. (Proc Natl Acad Sci USA. 1997 Januar y 21; 94 (2) : 599-603) divulga un anticuerpo anti-IL-12 humana de cabra neutralizante. Fratazzi y otros (Clin Immunol Immunopathol. 1998 Jan;86 (l) :34-44) divulga un anticuerpo monoclonal anti-IL-12 humana que no tenía ningún efecto sobre la proliferación de células T ni actividad citotóxica CD8+ inducida por IL-7 y sCD23. Ohshima y Delespesse (J Immunol. 1997 Jan 15;158 (2) :629-636) divulgan un anticuerpo anti-IL-12 humana de cabra. Wu y otros (J Immunol. 1994 Feb 1;152 (3) : 1141-1153) divulgan la purificación de rIL-12 utilizando una columna anti-IL-12. Tripp y otros (J Immunol. 1994 Feb 15; 152 (4) : 1883-1887) divulgan fracciones de IgG de suero de cabra anti-IL-12 de ratón.

Anticuerpos específicos para el heterodímero que neutralicen más eficazmente la bioactividad de IL-12 son necesarios para reducir efectos perjudiciales de IL-12. Se sabe que los niveles incrementados de IL-12 en suero o tejido están implicados en el desarrollo y el avance de trastornos autoinmunes. Así, los anticuerpos para IL-12 son antagonistas útiles para controlar enfermedades con patologías que están mediadas a través de mecanismos inmunes, particularmente enfermedades asociadas con actividad de células cooperadoras tipo Th1 aberrantes. Ejemplos de tales trastornos autoinmunes incluyen esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) , incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, artritis reumatoide y diabetes mellitus autoinmune. Otros estados patológicos que se ha observado que se benefician de la administración de anticuerpos para IL-12 incluyen enfermedad del trasplante/injerto contra el huésped y choque séptico.

De acuerdo con esta invención, se ha encontrado que anticuerpos para IL-12 obtenidos de un mamífero deficiente en el gen que codifica la subunidad p35 y/o el gen que codifica la subunidad p40 neutralizan substancialmente la bioactividad de IL-12.

De acuerdo con esta invención, por primera vez, se producen anticuerpos que neutralizan substancialmente la bioactividad de IL-12 humana usando los métodos descritos aquí. A diferencia de otros anticuerpos específicos IL

12, los anticuerpos descritos aquí neutralizan al menos 90% de la bioactividad de IL-12 humana. Además, los anticuerpos descritos aquí... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un anticuerpo monoclonal anti-IL-12 humana, que comprende una subunidad p35 y una subunidad p40 que forman un heterodímero p75, en el que dicho anticuerpo monoclonal reconoce la subunidad p40 de IL-12 humana y 5 neutraliza al menos 90% de la bioactividad de IL-12 humana medida por:

(a) la inhibición de la proliferación de linfoblastos humanos activados por fitohemaglutinina (PHA) estimulada por IL12, en el que la concentración de dicho anticuerpo monoclonal es 0, 5 μg/ml y la concentración de dicha IL-12 humana es 0, 25 ng/ml o (b) la inhibición de la producción de IFN-γ por linfoblastos humanos activados por PHA estimulada por IL-12, en el que la concentración de dicho anticuerpo es 0, 5 μg/ml y la concentración de dicha IL-12 humana es 0, 25 ng/ml y en el que dicho anticuerpo monoclonal se puede obtener de un ratón deficiente en un gen de la subunidad p35 o p40 de IL-12.

2. El anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo monoclonal reacciona cruzadamente con IL-12 de mono Rhesus.

3. El anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo monoclonal está 20 humanizado.

4. El anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo monoclonal es un anticuerpo con una única cadena.

5. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4.

6. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en la que dicha composición es adecuada para la administración parenteral. 30

7. Uso de un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastornos autoinmune.

8. El uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que dicho trastorno autoinmune es esclerosis múltiple, artritis 35 reumatoide, diabetes mellitus autoinmune o enfermedad inflamatoria del intestino.

9. El uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que dicha enfermedad inflamatoria del intestino es enfermedad de Crohn o colitis ulcerativa.

10. Uso de un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad del injerto contra el huésped o el choque séptico.

11. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en un método de tratamiento de un trastorno autoinmune. 45

12. El anticuerpo monoclonal para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que dicho trastorno autoimmune es esclerosis múltiple, artritis reumatoide, diabetes mellitus autoinmune o enfermedad inflamatoria del intestino.

13. El anticuerpo monoclonal para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que dicha enfermedad 50 inflamatoria del intestino es enfermedad de Crohn o colitis ulcerativa.

14. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en un método para el tratamiento de la enfermedad del injerto contra el huésped o el choque séptico.


 

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