Anticuerpos de alta afinidad contra el receptor de IL-6 humano.

Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor de interleucina6 humano (hlL-6R) con una Kd de 500 pM o inferior,

según se mide por resonancia de plasmón superficial, en el que:

(i) las CDR de la cadena pesada comprenden las SEC ID Nº: 5, 7 y 9 como CDR1, CDR2 y CDR3 de cadenapesada respectivamente, y

(ii) las CDR de la cadena ligera comprenden las SEC ID Nº: 13, 15 y 17 como CDR1, CDR2 y CDR3 de cadenaligera respectivamente.

Anticuerpos de alta afinidad contra el receptor de IL-6 humano

Declaración de la técnica relacionada La interleucina 6 (IL-6) es una citocina pleotrópica producida por células inmunes y no inmunes que desempeña un papel crucial en la regulación de la respuesta inmune, reacciones de fase aguda y hematopoyesis. Se une a IL-6R soluble y unido a membrana celular (cadena e) formando un complejo binario, y este complejo es capaz de interaccionar con gp130 unida a membrana celular (cadena 1) , induce la formación de un complejo de señalización que comprende dos cada uno de IL-6, IL-6R y gp130.

En los documentos US 5.670.373, 5.795.965, 5.817.790, 6.410.691 y EP 409 607B1 se describen anticuerpos contra hlL-6R. En los documentos US 5.888.510 y 6.723.319 se describen métodos terapéuticos

Breve resumen de la invención En un primer aspecto, la invención desvela anticuerpos humanos, preferentemente anticuerpos humanos recombinantes, que se unen específicamente al receptor de interleucina 6 humano (hlL-6R) . Estos anticuerpos se caracterizan por la unión a hlL-6R con gran afinidad y una cinética de disociación lenta, y por la capacidad para neutralizar la actividad de IL-6. Los anticuerpos pueden ser de longitud completa (por ejemplo, un anticuerpo IgG1 o lgG4) o pueden comprender solamente una porción de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento Fab, F (ab') 2 o scFv) , y pueden modificarse para afectar a la funcionalidad, por ejemplo, para eliminar funciones efectoras residuales (Reddy et al. (2000) J. Immunol. 164: 1925-1933) . En una realización preferida, la invención proporciona un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une al receptor de IL-6 humano (SEC ID Nº: 1) con una KD de aproximadamente 500 pM o menos, según se mide por resonancia de plasmón superficial. En una realización más específica, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno tiene una KD de menos de 300 pM, o menos de 200 pM, o incluso menos de 100 pM. En diversas realizaciones, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo bloquea la actividad de hlL-6 con una CI50 de 250 pM o menos, según se mide por bioensayo de luciferasa. En realizaciones más específicas, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo presenta una CI50 de 150 pM o menos.

En aspectos relacionados, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de la invención se une a hlL-6R con una afinidad al menos 2 veces superior a con la que se une a IL-6R de mono. En realizaciones más preferidas, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno se une a proteína hlL-6R (SEC ID Nº: 1) con una afinidad que es hasta aproximadamente 3 veces superior respecto a su unión a IL-6R de mono (dominio extracelular de Macaca fascicularis mostrado en la SEC ID Nº: 251) .

Por lo tanto, la invención proporciona un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor de interleucina 6 humano (hlL-6R) con una KD de 500 pM o menos, según se mide por resonancia de plasmón superficial, en el que:

(i) las CDR de la cadena pesada comprenden las SEC ID Nº: 5, 7 y 9 como CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada respectivamente, y

(ii) las CDR de la cadena ligera comprenden las SEC ID Nº: 13, 15 y 17 como CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera respectivamente

En realizaciones específicas, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo comprende la pareja de HCVR/LCVR de la SEC ID Nº: 3/11.

En un segundo aspecto, la invención proporciona moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo de la invención. En una realización, la molécula de ácido nucleico de la invención codifica un anticuerpo o fragmento del mismo que comprende una HCVR como se ha descrito anteriormente. En realizaciones específicas, la molécula de ácido nucleico que codifica la HCVR es la SEC ID Nº: 2. En un aspecto relacionado, la invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada que codifica una LCVR como se ha descrito anteriormente. En realizaciones específicas, la molécula de ácido nucleico que codifica la LCVR es la SEC ID Nº: 10.

La invención desvela anticuerpos anti-hlL-6R o fragmentos de unión a antígeno de los mismos que tienen un patrón de glicosilación modificado. En algunas aplicaciones, puede ser útil una modificación para eliminar sitios de glicosilación no deseables, o un anticuerpo que carezca de un resto de fucosa en una cadena de oligosacárido, por ejemplo, para aumentar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) (véase Shield et al. (2002) JBC

277: 26733) . En otras aplicaciones, puede realizarse una modificación de una galactosilación para modificar la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) .

En aspectos adicionales, la invención proporciona vectores de expresión recombinantes que llevan las moléculas de ácido nucleico de la invención, y células hospedadoras en las que se han introducido dichos vectores, así como métodos de generación de los anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de la invención obtenidos por cultivo de las células hospedadoras de la invención. La célula hospedadora puede ser una célula procariota o eucariota, preferentemente la célula hospedadora es una célula de E. coli o una célula de mamífero, tal como una célula CHO.

En un aspecto adicional, la invención presenta una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo humano o fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente a hlL-6R y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En aspectos adicionales, la invención proporciona un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo, como se ha definido anteriormente, para su uso en la atenuación o inhibición de una enfermedad o trastorno mediado por IL-6 en un ser humano, en el que la enfermedad o trastorno mediado por IL-6 es artritis, una enfermedad inflamatoria del intestino o lupus eritematoso sistémico. El trastorno se selecciona por tanto de, artritis, incluyendo artritis reumatoide crónica; una enfermedad inflamatoria del intestino, incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa; o lupus eritematoso sistémico En aspectos adicionales, la invención proporciona el uso de un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo, como se ha definido anteriormente, en la fabricación de un medicamento para su uso para atenuar o inhibir una enfermedad o trastorno mediado por IL-6 en un ser humano, en el que la enfermedad o trastorno mediado por IL-6 es artritis, una enfermedad inflamatoria del intestino o lupus eritematoso sistémico.

Otros objetos y ventajas serán evidentes a partir de una revisión de la descripción detallada subsiguiente.

Descripción detallada Antes de describir los presentes métodos, debe entenderse que esta invención no se limita a los métodos y condiciones experimentales particulares descritas, ya que dichos métodos y condiciones pueden variar. También debe entenderse que la terminología usada en la presente memoria es únicamente con el fin de describir realizaciones particulares, y no pretende ser limitante, ya que el alcance de la presente invención estará limitado únicamente por las reivindicaciones adjuntas.

A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente memoria tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la materia a la que pertenece la invención. Aunque puede usarse cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en la presente memoria en la práctica o ensayo de la presente invención, los métodos y materiales preferidos se describen a continuación.

La expresión "IL6R humano" (hlL-6R) , como se usa en la presente memoria, pretende referirse a un receptor de citocina humano que se une específicamente a interleucina 6 (IL-6) . El dominio extracelular de hlL-6R se muestra en la SEC ID Nº: 1.

El término "anticuerpo", como se usa en la presente memoria, pretende referirse a moléculas de inmunoglobulina que comprenden cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro. Cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (abreviada en la presente memoria como HCVR o VH) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada comprende tres dominios: CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (abreviada en la presente memoria como LCVR o VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera está compuesta por un dominio (CL1) . Las regiones VH y VL pueden subdividirse adicionalmente en regiones... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor de interleucina 6 humano (hlL-6R) con una Kd de 500 pM o inferior, según se mide por resonancia de plasmón superficial, en el que:

(i) las CDR de la cadena pesada comprenden las SEC ID Nº: 5, 7 y 9 como CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada respectivamente, y

(ii) las CDR de la cadena ligera comprenden las SEC ID Nº: 13, 15 y 17 como CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera respectivamente

2. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende la pareja de HCVR/LCVR de la SEC ID Nº: 3/11.

3. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que se une específicamente al hlL-6R con una KD de 300 pM o inferior, según se mide por resonancia de plasmón superficial.

4. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de acuerdo con la reivindicación 1, 2 o 3, que se une al hlL-6R con una afinidad al menos 1, 5 veces superior respecto a la unión al IL-6R de mono.

5. El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el fragmento de unión a antígeno se selecciona de Fab, F (ab') 2 y scFv.

6. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

7. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 6.

8. Una célula hospedadora aislada que comprende un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 7.

9. La célula hospedadora de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la célula hospedadora es una célula procariota o eucariota seleccionada de una de E. coli o una célula CHO.

10. Un método para producir un anticuerpo anti-IL-6R o fragmento de unión a antígeno del mismo, que comprende cultivar la célula hospedadora de acuerdo con la reivindicación 8 o 9 en condiciones que permitan la producción del anticuerpo o fragmento del mismo y la recuperación del anticuerpo o fragmento así producido.

11. El uso de un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en la fabricación de un medicamento para su uso para atenuar o inhibir una enfermedad o trastorno mediado por IL-6 en un ser humano, en el que la enfermedad o trastorno mediado por IL-6 es artritis, una enfermedad inflamatoria del intestino o lupus eritematoso sistémico.

12. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en la atenuación o inhibición de una enfermedad o trastorno mediado por IL-6 en un ser humano, en el que la enfermedad o trastorno mediado por IL-6 es artritis, una enfermedad inflamatoria del intestino o lupus eritematoso sistémico.

13. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 11 o un anticuerpo o fragmento de acuerdo con la reivindicación 12, en el que dicha artritis es artritis reumatoide crónica, o dicha enfermedad inflamatoria del intestino es la enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa.