Anticuerpo monoclonal humano específico para cada tumor.

Anticuerpo humano-murino quimérico, xenogénico, humanizado o humano,

o fragmento de unión del mismo, que tiene la capacidad de reconocer el antígeno NY-ESO-1 asociado a tumor, que comprende en su región de cadena pesada variable las regiones determinantes de complementariedad CDR1 de ID SEC. n.º: 5, CDR2 de ID SEC n.º: 6, y CDR3 de ID SEC n.º: 7, y en su región de cadena ligera variable las regiones determinantes de complementariedad CDR1 de ID SEC n.º: 8, CDR2 de ID SEC n.º: 9 y CDR3 de ID SEC n.º: 10.

Anticuerpo monoclonal humano específico para cada tumor Campo de la invención

[1] La presente invención se refiere en general a moléculas de unión novedosas, específicas de cada tumor, particularmente anticuerpos humanos así como fragmentos, derivados y sus variantes que reconocen, respectivamente, antígenos tumorales y antígenos asociados a tumores. Adicionalmente, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dichas moléculas de unión, anticuerpos y sus miméticos en el tratamiento de diversos tumores, en particular melanoma, cáncer de mama y metástasis.

Antecedentes de la invención

[2] Las respuestas inmunes humorales a tumores se producen con una frecuencia relativamente alta en (1, 2). Este fenómeno se aprovechó para identificar una variedad de antígenos asociados a tumores (taa) por medio de la criba de bibliotecas de expresión autóloga con suero de pacientes con cáncer (1). En la actualidad, varios de estos taa sirven como antígenos de células T para la inducción de respuestas de CTL anti-tumorales en pacientes (3, 4). Actualmente se está reconsiderando esta preferencia por la respuesta inmune celular, en la mayoría de los casos citotóxica, como estrategia terapéutica, y se diseñan vacunas novedosas para inducir también respuestas de anticuerpos. En parte, en este cambio de concepto puede haber influido el reciente éxito de diversos anticuerpos monoclonales para terapia tumoral, tales como trastuzumab (Herceptin) y bevacizumab (Avastin) (5). Mientras que estos anticuerpos monoclonales se habían producido contra dianas con una supuesta relevancia oncológica, anticuerpos que aparecen en pacientes con cáncer, ya sea espontáneamente o tras vacunación, forman una clase diferente de moléculas cuya significación terapéutica había resultado difícil de evaluar. Esto es debido en su mayor parte a la falta de planteamientos experimentales directos para su aislamiento y caracterización subsiguiente in vitro y en modelos animales de cáncer humano.

[3] Así, existe una necesidad de superar las limitaciones antes descritas y de proporcionar un anticuerpo terapéutico y diagnóstico contra antígenos implicados en cáncer.

Resumen de la invención

[4] La presente invención hace uso de la respuesta inmune, específica de cada tumor, de pacientes con cáncer para el aislamiento de anticuerpos monoclonales humanos específicos de cada antígeno tumoral y de cada antígeno asociado a un tumor (taa). En particular, experimentos realizados de acuerdo con la presente invención resultaron satisfactorios en el aislamiento de un anticuerpo monoclonal específico del taa NY-ESO-1 de un paciente con melanoma que presentaba un título sérico para NY-ESO-1 y una respuesta clínica parcial. Para aislar el anticuerpo humano específico de un antígeno tumoral y de un taa, respectivamente, se usaron micromatrices de tejido (TMA) que utilizan inmunohistoquímica (IHC).

[5] Así, la presente invención va dirigida a anticuerpos humanos, a fragmentos de unión con antígenos y a moléculas de unión con antígenos, similares, que tienen la capacidad de reconocer el antígeno NY-ESO-1 asociado a tumores. Además, la presente invención se refiere a composiciones que comprenden dichos anticuerpos y a métodos inmunoterapéuticos e inmunodiagnósticos que usan los mismos.

[6] En una realización particularmente preferida de la presente invención, el anticuerpo humano o fragmento de unión con antígenos del mismo demuestra las características de unión inmunológicas de un anticuerpo caracterizado por las regiones variables Vh y Vl según se expone en la Figura 4 (ID SEC N°: 2 y 4). Alternativamente, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado, xenogénico, o un anticuerpo quimérico humano-murino, resultando particularmente útil este último para métodos de diagnóstico y estudios en animales. También se incluyen composiciones terapéuticas que incluyen el anticuerpo o fragmentos activos del mismo, o agonistas y moléculas cognadas, o alternativamente, antagonistas de los mismos, y métodos para usar dichas composiciones en la prevención, diagnóstico o tratamiento de un tumor usando estas composiciones, en donde se administra una cantidad eficaz de la composición a un paciente que necesita dicho tratamiento.

[7] El fragmento de unión con antígenos del anticuerpo puede ser un fragmento Fv monocatenario, un fragmento F(ab'), un fragmento F(ab), y un fragmento F(ab')2, o cualquier otro fragmento de unión con antígenos. En una realización específica, más adelante, el anticuerpo o fragmento del mismo es un anticuerpo isotipo IgG humano.

[8] Naturalmente, la presente exposición se extiende al linfocito B humano, inmortalizado, con memoria y a la célula B, respectivamente, que produce el anticuerpo que tiene las características distintivas y únicas que se definen posteriormente.

[9] La presente invención también se refiere a polinucleótidos que codifican por lo menos una región variable de una cadena de inmunoglobulina del anticuerpo de la invención. Preferentemente, dicha región variable comprende las seis regiones determinantes de complementariedad (CDRs) del Vh y Vi_de la región variable según se expone en la Figura 4 (ID SEC N°: 5 a 1).

[1] Por consiguiente, la presente invención abarca también vectores que comprenden dichos polinucleótidos y células huéspedes transformadas con los mismos así como su uso para la producción de un anticuerpo y moléculas de unión equivalentes que son específicas de antígenos que son indicativos y/o causantes de un tumor, en particular de melanoma o cáncer de mama.

[11] El anticuerpo, la(s) cadena(s) de inmunoglobulina, los fragmentos de unión de los mismos se pueden usar en composiciones farmacéuticas y diagnósticas para la inmunoterapia y la diagnosis de tumores, respectivamente. No obstante, se prefiere el uso de las composiciones anteriores en la preparación de un medicamento.

[12] Por lo tanto, un objetivo particular de la presente invención es proporcionar métodos para tratar o prevenir una enfermedad cancerosa tal como un carcinoma de mama primario y metástasis. Los métodos comprenden administrar una concentración eficaz de un anticuerpo o derivado del anticuerpo al sujeto donde el anticuerpo va dirigido a tejido y células tumorales.

[13] A partir de la descripción y los ejemplos que vienen a continuación se pondrán de manifiesto otras realizaciones de la presente invención.

Breve descripción de los dibujos

[14]

Fig. 1: El pocilio de cultivo de células B de memoria 12 D7 contiene anticuerpos específicos del NY-ESO-1. Medio

condicionado por cultivos de células B de memoria se analizó en relación con la presencia de anticuerpos humanos específicos del NY-ESO-1 A) en ELISA presentando NY-ESO-1 recombinante de longitud completa. B) En inmunohistoquímica sobre carcinoma de mama (me) positivo para NY-ESO-1 y sobre tejido de control (ct) negativo para NY-ESO-1. Se muestra la tinción obtenida con medio condicionado de dos pocilios de cultivo de células B de memoria positivas para ELISA (9D1, 12D7). C) El anticuerpo específico de NY-ESO-1 contenido en el pocilio 12D7 es de la subclase lgG1 tal como se demuestra por la tinción de tejido positivo para NY-ESO-1 con medio condicionado de células B del pocilio de cultivo 12D7 seguido por anticuerpos secundarios contra las subclases lgG1-4 de IgG.

Fig. 2: El clon número 4 del anticuerpo humano recombinante 12D7 obtenido mediante RT-PCR de células

individuales sobre células B de memoria cultivadas reconoce específicamente el NY-ESO-1 en ELISA y en secciones de tejido. El fluido sobrenadante (SN) recolectado a partir de células 293T HEK transfectadas con vectores de expresión de inmunoglobulina de cadena pesada y ligera que expresan el clon 12D7 número cuatro se sometió a ensayo en relación con la especificidad con respecto al NY-ESO-1 en A) ELISA presentando NY-ESO-1 de longitud completa. Se indican valores ELISA para SN sin diluir (1:12D7.4 SN), una dilución 1/1 (2:12D7.4 SN) y una dilución 1/1 (3:12D7.4 SN). A efecto comparativos, también se muestra la señal de ELISA obtenida con plasma del paciente del cual se obtuvieron los cultivos de células B de memoria utilizados como una dilución 1/1 (4). Como controles, se muestra la ausencia de unión a placas ELISA recubiertas con NY-ESO-1 de SN obtenido con la transfección de un anticuerpo recomblnante irrelevante producido de la misma forma que 12D7.4 (5) así como la ausencia de unión del clon n.° 4 de 12D7 a placas ELISA recubiertas con un antígeno ¡rrelevante. B) La Inmunohistoquímica sobre carcinoma de mama (me) positivo para NY-ESO-1 y sobre tejido de control (ct) negativo para NY-ESO-1 muestra la unión específica... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo humano-murino quimérico, xenogénico, humanizado o humano, o fragmento de unión del mismo, que tiene la capacidad de reconocer el antígeno NY-ESO-1 asociado a tumor, que comprende en su región de cadena pesada variable las regiones determinantes de complementariedad CDR1 de ID SEC. n.°: 5, CDR2 de ID SEC n.°: 6, y CDR3 de ID SEC n.°: 7, y en su región de cadena ligera variable las regiones determinantes de complementariedad CDR1 de ID SEC n.°: 8, CDR2 de ID SEC n.°: 9 y CDR3 de ID SEC n.°: 1.

2. Anticuerpo o fragmento de unión de la reivindicación 1, que se une a un epítopo definido por una secuencia de aminoácidos expuesta en la ID SEC. n°: 11.

3. Anticuerpo o fragmento de unión de la reivindicación 1 ó 2, seleccionado del grupo compuesto por un fragmento Fv monocatenario (scFv), un fragmento F(ab), un fragmento F(ab) y un fragmento F(ab)2.

4. Anticuerpo o fragmento de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende la secuencia de aminoácidos de la región VH (ID SEC n.°: 2) y/o VL (ID SEC n.°: 4).

5. Vector que comprende un polinucleótido que codifica por lo menos la región variable de una cadena de imnunoglobulina del anticuerpo o fragmento de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, y que codifica la región variable de la otra cadena de inmunoglobulina de dicho anticuerpo.

6. Célula huésped que comprende un vector de la reivindicación 5.

7. Método para preparar un anticuerpo o un fragmento de unión, comprendiendo dicho método:

(a) cultivar la célula de la reivindicación 6; y

(b) aislar dicho anticuerpo o fragmento de unión del mismo con respecto al cultivo.

8. Anticuerpo o fragmento de unión del mismo obtenible con el método de la reivindicación 7.

9. Composición que comprende el anticuerpo o fragmento de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 8, el vector de la reivindicación 5 ó la célula de la reivindicación 6.

1. Composición diagnóstica que comprende el anticuerpo o fragmento de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 8, el vector de la reivindicación 5 ó la célula de la reivindicación 6; y opcionalmente reactivos usados convencionalmente en métodos inmunodiagnósticos o de diagnóstico basado en ácidos nucleicos.

11. Anticuerpo o fragmento de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 8 ó anticuerpo idiotlpico de uno cualquiera de los mismos, el vector de la reivindicación 5 ó la célula de la reivindicación 6 para su uso en el tratamiento o prevención del desarrollo de un tumor; para la mejora de síntomas asociados a un tumor; para el diagnóstico o cribado de un sujeto en relación con la presencia de un tumor o para determinar el riesgo de un sujeto a desarrollar un tumor.

12. Anticuerpo o fragmento de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 8 ó anticuerpo anti-idiotípico correspondiente para su uso en el diagnóstico y/o tratamiento de un tumor, que comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho anticuerpo o fragmento de unión.

13. Kit para el diagnóstico de un tumor, comprendiendo dicho kit el anticuerpo o fragmento de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 8, el vector de la reivindicación 5 ó la célula de la reivindicación 6, opcionalmente con reactivos y/o instrucciones de uso.

14. Molécula de unión a antígeno tumoral que comprende un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en la detección in vivo o el apuntamiento de un agente terapéutico y/o diagnóstico a un tumor.