Anticuerpo contra PDGFR-alfa para uso en el tratamiento de tumores.

Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo aislado para PDGFRα

humano, que comprende SSSYY (SEC ID Nº:2) en CDRH1; SFFYTGSTYYNPSLRS (SEC ID Nº :4) en CDRH2; QSTYYYGSGNYYGWFDR (SEC ID Nº: 6)en CDRH3; RASQSVSSYLA (SEC ID Nº: 10) en CDRL1; DASNRAT (SEC ID Nº: 12) en CDRL2; yQQRSNWPPA (SEC ID Nº: 14) en CDRL3.

Anticuerpo contra PDGFR-alfa para uso en el tratamiento de tumores Esta solicitud reclama el beneficio de la solicitud provisional de EE.UU. número 60/691.920.

Campo de la invención La invención proporciona procedimientos para tratar el cáncer de huesos, en particular el cáncer de huesos metastásico, administrando un antagonista del PDGFRα. La invención también proporciona anticuerpos que se unen al PDGFRα humano y neutralizan la activación del receptor. La invención proporciona además un procedimiento para neutralizar la activación del PDGFRα, y a un procedimiento de tratar a un mamífero con una enfermedad neoplásica usando los anticuerpos solos o en combinación con otros agentes.

Antecedentes de la invención El cáncer de próstata es el cáncer más frecuente entre los varones, con aproximadamente 220.000 casos y 29.000 muertes anuales en EE.UU. Una proporción significativa de varones con diagnóstico de cáncer de próstata tienen enfermedad metastásica. Además, las metástasis en última instancia se desarrollan en muchos pacientes de cáncer de próstata a pesar del tratamiento con cirugía o radioterapia. El hueso es el sito más frecuente de la metástasis del cáncer de próstata y también es un lugar en el que los cánceres de mama y los cánceres de pulmón suelen metastatizar. La mayoría de las metástasis del cáncer de próstata son dependientes de andrógenos, de modo que existe una respuesta rápida a la castración quirúrgica o médica, pero en casi todos los pacientes, el tumor se convierte en última instancia en independiente de andrógenos, lo que conduce a una significativa morbididad y mortalidad. Una vez que se producen metástasis óseas, los tratamientos disponibles actualmente tienen efectos limitados. El tratamiento más eficaz aprobado descrito para el cáncer de próstata metastásico (administración de docetaxel) prolonga la mediana de la supervivencia aproximadamente tres meses. (Petr y lak y col., 2004, N. Engl. J. Med. 351:1513; Tannock y col., 2004, N. Engl. J. Med. 351:1502) . De acuerdo con lo anterior, se necesitan urgentemente nuevos tratamientos para el cáncer de huesos metastásico.

El receptor del factor de crecimiento de tipo insulina (IGF-IR) es un receptor tirosina cinasa transmembrana ubicuo que es esencial para que el crecimiento y el desarrollo fetal y posnatal sean normales. El IGF-IR se localiza en la superficie celular de la mayoría de los tipos de células y sirve como molécula de señalización para los factores de crecimiento IGF-I e IGF-II (en conjunto denominados en el presente documento IGF) . El IGF-IR puede estimular la proliferación celular, la diferenciación celular, cambios en el tamaño de la célula, y proteger a las células de la apoptosis. También se ha considerado casi obligatorio para la transformación celular (recapitulación en Adams y col., Cell. Mol. Life Sci. 57:1050-93 (2000) ; Baserga, Oncogene 19:5574-81 (2000) ) . Se han notificado niveles altos de expresión de IGF-IR en muestras de tejido de metástasis óseas de cáncer de próstata. El hueso contiene el almacén más grande de IGF en el organismo.

El IGF-IR es un heterotetrámero preformado que contiene dos cadenas alfa y dos beta unidas covalentemente por puentes disulfuro. Las subunidades del receptor se sintetizan como parte de una cadena polipeptídica sencilla de 180 kd, que después se procesa proteolíticamente en las subunidades alfa (130 kd) y beta (95 kd) . Toda la cadena alfa es extracelular y contiene el lugar de unión al ligando. La cadena beta procesa el dominio transmembrana, el dominio tirosina cinasa y una extensión en C-terminal que es necesaria para la diferenciación y la transformación celulares, pero es innecesaria para la señalización de mitógenos y la protección frente a la apoptosis.

El IGF-IR es muy similar al receptor de la insulina (IR) , en particular dentro de la secuencia de la cadena beta (homología del 70 %) . Debido a esta homología, en estudios recientes se ha demostrado que estos receptores pueden formar híbridos que contienen un dímero IR y un dímero IGF-IR (Pandini y col., Clin. Conc. Res. 5:1935-19 (1999) ) . La formación de híbridos se produce en células tanto normales como transformadas y el contenido en híbrido depende de la concentración de los dos receptores homodiméricos (IR e IGF-IR) dentro de la célula. Aunque los receptores híbridos están compuestos por pares de IR e IGF-IR, los híbridos se unen de forma selectiva a los IGF, con una afinidad similar a la de IGF-IR, y solo se unen débilmente a la insulina ( (Siddle y Soos, The IGF System. Humana Press. pp. 199-225. 1999) . Por tanto, estos híbridos se pueden unir a los IGF y translucen las señales en células normales y transformadas.

Un segundo receptor de IGF, el IGF-IIR, o receptor de manosa-6-fosfato (M6P) , también se une al ligando IGF-II con una afinidad elevada, pero carece de actividad tirosina cinasa (Oates y col., Breast Cancer Res. Treat. 47:269-81 (1998) ) . Debido a que da lugar a la degradación de IGF-II, se considera un sumidero para IGF-II, siendo un antagonista de los efectos estimulantes del crecimiento de este ligando. La pérdida de IGF-IIR en las células tumorales puede aumentar el potencial crecimiento mediante la liberación de su efecto antagonista sobre la unión de IGF-II con el IGF-R (Byrd y col., J. Biol. Chem. 274:24408-16 (1999) ) .

Los receptores alfa y beta del factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGFRα y PDGFRβ) son las tirosina cinasas receptoras de tipo III-El PDGFRα es crucial para el desarrollo y satisface importantes funciones en la edad adulta. Por ejemplo, los ratones homocigotos para una mutación completa mueren durante la embriogénesis. En estadios posteriores del desarrollo, el PDGFRα se expresa en muchas estructuras mesenquimatosas, mientras que

las células epiteliales adyacentes producen factores de crecimiento derivados de las plaquetas (PDGF) . Las muestras de tejido de glándulas prostáticas normales o hiperplásicas dan negativo en los análisis de PDGFRα, mientras que los tumores de próstata primarios y las masas esqueléticas de sujetos equivalentes expresan PDGFRα. Además, de las líneas de células de próstata obtenidas de diferentes lugares de metástasis, el PDGFRα se encuentra en las células PC3 derivadas de metástasis ósea, pero no en líneas celulares obtenidas de metástasis en ganglios linfáticos (LNCaP) y cerebro (DU-145) .

La familia del factor de crecimiento derivado de las plaquetas de factores de crecimiento está constituida por cinco dímeros diferentes unidos por puentes disulfuro, PDGF-AA, -BB, -AB, -CC y -DD, que actúan mediante PDGFRα y PDGFRβ. Estos factores de crecimiento son moléculas diméricas compuestas por cadenas polipeptídicas unidas por puentes disulfuro que se unen a dos proteínas receptoras de forma simultánea e inducen la dimerización, autofosforilación y señalización intracelular del receptor. PDGFRα y PDGFRβ son estructuralmente similares y pueden formar heterodímeros así como homodímeros. Dado que el PDGFRβ no se une a la cadena con alta afinidad, el PDGF-AA solo activa dímeros de receptores αα, mientras que PDGF-AB y PDGF-CC activan los heterodímeros receptores αα y αβ.

Breve resumen de la invención La presente invención se refiere al tratamiento de tumores óseos primarios y metastásicos, incluidos tumores que proceden de la próstata, la mama o los pulmones, y expresan el receptor del factor I de crecimiento de tipo insulina (IGF-IR) y/o el receptor del factor de crecimiento alfa derivado de las plaquetas (PDGFRα) .

Los tumores que se van a tratar pueden ser dependientes de hormonas/andrógenos o independientes de hormonas/andrógenos y pueden originarse en, por ejemplo, la próstata, las mamas o los pulmones.

La invención proporciona procedimientos de tratar a un sujeto que tenga un tumor óseo y procedimientos de inhibir el crecimiento de un tumor óseo. Los procedimientos comprenden administrar una cantidad eficaz de un antagonista de PDGFRα. Los antagonistas del receptor incluyen anticuerpos y fragmentos de anticuerpos, así como inhibidores de moléculas pequeñas intracelulares.

La invención también proporciona anticuerpos anti-PDGFRα que se unen a su receptor diana e inhiben la unión del ligando. La invención también proporciona anticuerpos y otros antagonistas que neutralizan la activación de PDGFRα. Además, determinados anticuerpos estimulan la regulación por disminución de su receptor diana, por ejemplo mediante internalización y/o degradación. De acuerdo con esto, los anticuerpos y los antagonistas de molécula pequeña funcionan inhibiendo... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo aislado para PDGFRα humano, que comprende SSSYY (SEC ID Nº: 2) en CDRH1; SFFYTGSTYYNPSLRS (SEC ID Nº :4) en CDRH2; QSTYYYGSGNYYGWFDR (SEC ID Nº: 6) en CDRH3; RASQSVSSYLA (SEC ID Nº: 10) en CDRL1; DASNRAT (SEC ID Nº: 12) en CDRL2; y

QQRSNWPPA (SEC ID Nº: 14) en CDRL3

2. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSSSYYWGWLRQSPGKGLEWIGSFFY TGSTYYNPSLRSRLTISVDTSKNQFSLMLSSVTAADTAVYYCARQSTYYYGSGNY

YGWFDRWDQGTLVTVSS (SEC ID Nº: 8) o una región variable de cadena ligera que tiene EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPAFGQGTKVEIK (SEC ID Nº: 16) .

3. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSSSYYWGWLRQSPGKGLEWIGSFFY TGSTYYNPSLRSRLTISVDTSKNQFSLMLSSVTAADTAVYYCARQSTYYYGSGNY YGWFDRWDQGTLVTVSS (SEC ID Nº: 8) y una región variable de cadena ligera que tiene EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPAFGQGTKVEIK (SEC ID Nº: 16) .

4. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene MGWSCIILFLVATATGVHSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSSSYYWG WLRQSPGKGLEWIGSFFYTGSTYYNPSLRSRLTISVDTSKNQFSLMLSSVTAADT AVYYCARQSTYYYGSGNYYGWFDRWDQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS

GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGN

Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que inhibe la unión de PDGFRα a un ligando de PDGFRα o que neutraliza PDGFRα.

6. Un ácido polinucleico aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo o 35 fragmento de anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

7. Un vector de expresión que comprende el ácido polinucleico de la reivindicación 6 unido operativamente a elementos de control de la expresión de modo que se puede expresar el anticuerpo o fragmento codificado.

8. Una célula recombinante que comprende el vector de expresión de la reivindicación 7, célula recombinante

que puede producir un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las 40 reivindicaciones 1 a 5.

9. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo producido cultivando la célula recombinante de acuerdo con la reivindicación 8 de modo que se produce el anticuerpo o fragmento y se recupera el anticuerpo o fragmento del cultivo.

10, Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 45 a 5 o la reivindicación 9 para usar como medicamento.

11. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para usar en la inhibición del crecimiento de un tumor primario, un tumor metastásico, un tumor resistente o un tumor vascularizado en un mamífero.

12. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo para usar de acuerdo con la reivindicación 11, seleccionándose el tumor de un tumor ovárico, un tumor de mama, un tumor pulmonar, un tumor hepatocelular, un tumor estromal gastrointestinal, un melanoma, un carcinoma de células renales, un tumor de próstata, un tumor óseo, un sarcoma de tejidos blandos, un leiomiosarcoma y un glioblastoma.