AMPLIFICACION DE MRNA.

Un método para la amplificación del mRNA de una muestra, que comprende los siguientes pasos:

i. generación de cDNA a partir de RNA poliadenilado utilizando por lo menos un cebador que hibride con este RNA poliadenilado y que contenga un extremo 5 poli(C) o 5 poli(G), estando la concentración de este cebador en un intervalo de 10 a 60 µM; ii.(aa) eliminación del exceso de cebador o cebadores no hibridados o del exceso de dNTP, si existe cualquiera de ellos; ii.(ab) adición en el extremo 3 del cDNA generado de una cola de poli(G) cuando en el paso i. se empleó un cebador o cebadores con un extremo 5 poli(C), o de una cola de poli(C) cuando en el paso i. se empleó un cebador o cebadores con un extremo 5 poli(G); o bien ii.(b) adición en el extremo 3 del cDNA generado de una cola de poli(G) cuando en el paso i. se empleó un cebador o cebadores con un extremo 5 poli(C), o una cola de poli(C) cuando en el paso i. se empleó un cebador o cebadores con un extremo 5 poli(G) utilizando una RNA ligasa, independientemente de la presencia o ausencia de cebador, cebadores o dNTP en exceso; y (iii) amplificación del cDNA con cola mediante un cebador que hibride con la cola o colas generadas en el paso ii (ab) o ii(b).

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: MICROMET AG.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: STAFFELSEESTRASSE 2,81477 MUNCHEN.

Inventor/es: ZOHLNHIFER, DIETLIND, KLEIN, CHRISTOPH.

Fecha de Publicación: 1 de Enero de 2007.

Fecha Solicitud PCT: 23 de Marzo de 2001.

Fecha Concesión Europea: 7 de Junio de 2006.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

Clasificación PCT:

C12N15/10 C12 […] › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.
G01N33/50 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Oficina Europea de Patentes, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

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