AMINOPEPTIDASAS COMO MARCADORES DE DAÑO RENAL.
Aminopeptidasas como marcadores de daño renal.
La presente invención se refiere a un método y a un kit para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal que comprende analizar una muestra obtenida de un paciente y determinar la actividad de al menos una aminopeptidasa seleccionada de entre aspartil aminopeptidasa,
glutamil aminopeptidasa, alanil aminopeptidasa y leucil-cistinil aminopeptidasa.
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201031699.
Solicitante: UNIVERSIDAD DE GRANADA.
Nacionalidad solicitante: España.
Inventor/es: OSUNA ORTEGA,Antonio, VARGAS PALOMARES,José Félix, RAMIREZ SANCHEZ,Manuel, WANGENSTEEN FUENTES,Rosemary.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/37 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › peptidasa o proteinasa.
- G01N33/52 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Utilización de compuestos o de composiciones para investigaciones colorimétricas, espectrofotométricas o fluorométricas, p. ej. utilización de cintas de papel indicador.
Fragmento de la descripción:
Aminopeptidasas como marcadores de daño renal.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se encuadra en general dentro del campo de la biomedicina y en particular se refiere a un método para el diagnóstico y/o pronóstico del daño renal agudo.
ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
La Acute Kidney Injur y Network (AKIN) describe el daño renal agudo como las "anormalidades funcionales o estructurales o en los marcadores de daño renal, incluyendo anormalidades en sangre, orina, pruebas tisulares o estudios de imagen presentes en los últimos tres meses" (Vaidya VS, Ferguson MA, Bonventre JV. Biomarkers of acute kidney injur y . Annu Rev Pharmacol Toxicol 2008; 48: 463-493) .
Normalmente el daño renal agudo se asocia con la retención de creatinina, urea y otros productos metabólicos de desecho que son normalmente excretados por el riñón. Aunque en los casos más severos se observa oliguria o, incluso, anuria, el volumen de orina puede ser también normal o alto (Mehta RL, Kellum JA, Shah SV, Molitoris BA, Ronco C, et al. Acute Kidney Injur y Network: report of an iniciative to improve outcome in acute kidney injur y .Crit Care 2007; 11: R31) .
El daño renal agudo tiene diversas etiologías, pudiendo ser ocasionado por una disminución en la perfusión renal o intrarrenal, por una agresión tóxica u obstrucción del túbulo renal, por inflamación tubulointersticial y edema, o por una reducción en la capacidad de filtración del glomérulo (Chertow GM, Lee J, Kuperman GJ, Burdick E, Horsky J, et al. Guided medication dosing for inpatients with renal insufficiency. JAMA 2001; 286: 2839-2844) . Se trata de una patología compleja cuya tasa de mortalidad (50-70 %) ha permanecido bastante invariable en los últimos 50 años (Uchino S, Kellum JA, Bellomo R, Doig GS, Morimatsu H, et al. Acute renal failure in critically ill patients: a multinational, multicenter study. JAMA 2005; 294: 813-818.) .
Diversos mecanismos fisiopatológicos contribuyen al desarrollo y progresión del daño renal agudo: aumento de la vasoconstricción renal, disfunción tubular y muerte celular por apoptosis o necrosis, descamación celular, anormalidades en el transporte de iones que conducen a un desequilibrio en el balance tubuloglomerular, y producción local de mediadores de inflamación que ocasionan inflamación intersticial y congestión vascular (Bonventre JV, Weinberg JM. Recent advances in the pathophysiology of ischemic acute renal failure. J Am Soc Nephrol 2003; 14: 2199-2210; Schrier RW, Wang W, Poole B, Mitra A. Acute renal failure: definitions, diagnosis, pathogenesis, and therapy. J Clin Invest 2004; 114: 5-14.) .
Los marcadores más utilizados en la práctica clínica para la detección del daño renal son la urea y la creatinina séricas, que presentan bastantes limitaciones en cuanto a sensibilidad y especificidad. Además, el daño renal debe afectar a más del 50 % de la función renal para que se produzca una elevación de la urea y de la creatinina séricas (Devarajan, P. Emerging biomarkers of acute kidney injur y . Acute kidney Injur y 2007; 156: 203-212; Bonventre JV, Vaidya VS, Schmouder R, Feig P, Dieterle F. Next-generation biomarkers for detecting kidney toxicity. Nat Biotechnol 2010; 28: 436-440.)
La detección precoz del daño renal continúa siendo un reto en la actualidad, tanto en la práctica clínica como en ensayos de toxicidad farmacológica, y se necesitan biomarcadores que permitan su diagnóstico temprano, así como su evolución, siendo los biomarcadores urinarios los más prometedores en este sentido.
Un marcador urinario ideal debe ser altamente órgano-específico, debe permitir el reconocimiento de la etiología del daño renal (hipoxia, toxinas, sepsis, etc.) , debe correlacionar con los hallazgos histológicos en biopsias renales, debe detectar el daño precoz e identificar cambios patológicos en los diferentes segmentos tubulares, debe correlacionar con el grado de daño tubular y tener alta sensibilidad para la detección precoz tanto de cambios mínimos como de la aparición de un daño más severo (el marcador debería ser detectable a lo largo del transcurso del daño renal con valores umbral definidos para monitorizar la progresión y regresión del daño renal; hasta la fecha, no hay ningún método adecuado para diferenciar entre disfunción renal benigna, ligera, moderada o severa) , su análisis no debe ser invasivo y, por último, los análisis de laboratorio deberían ser sencillos y rápidos de llevar a cabo, seguros, reproductibles, baratos y que permitan la determinación en serie de un gran número de muestras (Lisowska-Myjak B. Serum and urinar y biomarker of acute kidney injur y . Blood purif 2010; 29: 357-365.) .
La caracterización de estos marcadores urinarios debe servir para dilucidar si son herramientas útiles en el diagnóstico precoz, si identifican el mecanismo del daño renal, y/o si indican el sitio y la severidad del daño, ayudando a monitorizar la respuesta al tratamiento.
Los marcadores de daño renal agudo pueden clasificarse como (Lisowska-Myjak B. Serum and urinar y biomarker of acute kidney injur y . Blood purif 2010; 29: 357-365.) :
1) Enzimas liberadas de las células tubulares dañadas, disfuncionales o con necrosis/apoptosis: fosfatasa alcalina, gamma-glutamiltranspeptidasa, alanina aminopeptidasa, isoenzimas de la glutatión transferasa, Nacetil-º-D-glucosaminidasa (NAG) .
2) Proteínas de bajo peso molecular (<40 kDa) (a1-microglobulina, º2-microglobulina, proteína transportadora de retinol (RBP) , cistatina C) , cuya presencia en orina refleja una disminución en la reabsorción por parte de las células del túbulo proximal, 3) Proteínas específicamente producidas en el riñón durante el transcurso del daño renal: proteína 61 rica en cisteína, lipocalina asociada a la gelatinasa del neutrófilo (NGAL) , molécula de daño renal (KIM-1) , citoquinas y quimoquinas (Gro-a, IL-18) , y 4) Proteínas estructurales y funcionales de los túbulos renales: F-actina, intercambiador sodio/hidrógeno (NHE-3) .
Se han determinado distintos marcadores de daño renal agudo, Nguyen Mai T et al. "Biomarkers for the early detection of acute kidney injur y ". Pediatric Nephrology. Dic. 2008. Vol. 23. Nº. 12, páginas 2151-2157. describe como marcadores de daño renal agudo la NGAL, Il-18, kim-1 y la Cistatina C.
En Ferguson et al. "Biomarkers of nephrotoxic acute kidney injur y ". TOXICOLOGY. 04.01.2008. Vol. 245, Nº. 3, páginas 182 - 193. Se cita a la Alanil aminopeptidasa como una de las proteínas con actividad enzimática como marcador de daño renal agudo.
Trof Ronald J. et al. "Biomarkers of acute renal injur y and renal failure". Shock. Sep. 2006. Vol. 26. Nº. 3, páginas 245 - 253. Se refiere a marcadores serológicos y urinarios para la detección de la disfunción y el daño renal agudo, dentro de los marcadores urinarios cita a la Ala- (Leu-Gly) aminopeptidasa.
Nomura M. et al. "Possible involvement of aminopeptidase A in hypertension and renal damage in Dahl salt-sensitive rats". American Journal of Hypertension. 01.04.2005. Vol. 18. Nº. 4, páginas 538 - 543. describe que la glutamil aminopeptidasas se encuentra disminuida en el tejido renal en ratas DS y en DR y esta disminución podría estar implicada en la evolución de la hipertensión y del daño renal.
Scherberich J. E. et al. "Immunological and ultrastructural analysis of loss of tubular membrane-bound enzymes in patients with renal damage". Clinica chimica acta. 15 Dic. 1989. Vol.185, Nº 3, páginas 271 - 282. describe a la aminopeptidasas M, también llamada (Ala- (Gly-leu) -aminopeptidasa o Alanil-aminopeptidasa, como marcador de disrupción de membrana en el túbulo proximal.
En Solis-Herruzo J.A. et al "Urinar y excretion of enzymes in cirrhotics with renal failure". Journal of Hepatology. 1986. Vol. 3, Nº. 1, páginas 123-130, los autores confirman que la medida de enzimas urinarias, entre las que se encuentra la leucina aminopeptidasa, tiene valor diagnóstico de daño renal en pacientes cirróticos.
Serrera Contreras J. L. et al. "Enzimología del daño renal agudo". Rev Clin Esp. 1972 Vol. 30; Nº. 127 (4) , páginas 855-862. describe que la leucina aminopeptidasas tiene valor diagnóstico en el fracaso renal agudo.
Todo lo expuesto anteriormente justifica la necesidad de identificar y validar nuevos biomarcadores de daño renal más precisos, cuya determinación además sea rápida, sencilla y sin necesidad de biopsiar al...
Reivindicaciones:
1. Uso de la glutamil aminopeptidasa, para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal.
2. Método para la obtención de datos útiles en el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal que comprende determinar en una muestra aislada la actividad de la glutamil aminopeptidasa.
4. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal que comprende el método según las reivindicaciones 2- 3 y comparar dicha actividad con un valor control, donde la alteración de dicha actividad es indicativa de daño renal. 5. Método según la reivindicación 4, donde el daño renal es un daño renal agudo. 7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4-6, donde la actividad de la aminopeptidasa se determina mediante análisis fluorométrico. 8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4-7, donde el sustrato utilizado es glutamil- º-nafilamida. 9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4-8, donde el aumento de la actividad de la glutamil 15 aminopeptidasa, con respecto al valor control es indicativa de daño renal. 10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4-9, donde el aumento de la actividad de la glutamil aminopeptidasa con respecto al valor control es indicativa de daño renal precoz. 11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4-10, donde el paciente sufre una enfermedad seleccionada de entre hipertiroidismo, hipertensión, diabetes, trasplante, efectos secundarios de medicamentos que provoquen daño 20 renal. 12. Kit para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal según el método de las reivindicaciones 2-11, que comprende los reactivos necesarios para determinar la actividad de la glutamil aminopeptidasa. 13. Kit según la reivindicación 12, que comprende glutamil- º-nafilamida. 14. Uso de un kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-13, para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal. 5 3. Método según la reivindicación 2, donde la actividad de la aminopeptidasa se determina mediante análisis fluorométrico.
10 6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4-5, donde la muestra es orina.
Patentes similares o relacionadas:
Biblioteca de péptidos y su uso, del 8 de Julio de 2020, de DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED: Una biblioteca de péptidos que comprende una pluralidad de péptidos diferentes en la que los péptidos comprenden cada uno una secuencia de aminoácidos […]
Método para producir un nuevo Factor C recombinante, método para mitigar la inhibición de la reacción en ensayos de endotoxina, y método para medir endotoxina, del 5 de Febrero de 2020, de SEIKAGAKU CORPORATION: Un método para mitigar una inhibición de reacción en ensayo de endotoxina en presencia de un ion salino, comprendiendo el método: mezclar […]
Deshidrogenasa y toxina de Clostridium difficile como un biomarcador, del 18 de Diciembre de 2019, de TECHLAB, INC.: Un método para medir una cantidad de C. difficile en una muestra fecal, el método que comprende: medir cuantitativamente un nivel de lactoferrina, […]
Procedimientos de medición de la actividad del factor D y la potencia de los inhibidores del factor D, del 11 de Diciembre de 2019, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Un procedimiento de medición de la actividad del factor D en una muestra, que comprende realizar un ensayo de medición basado en proximidad, en el que el […]
Inducción apoptótica selectiva en células cancerosas incluyendo la activación de procaspasa-3, del 2 de Octubre de 2019, de THE BOARD OF TRUSTEES OF THE UNIVERSITY OF ILLINOIS: Un compuesto de fórmula ZZ:**Fórmula** en donde n= 1 o 2; R, independientemente de otra R, es hidrógeno, halógeno, alilo o grupo alquilo que tiene de 1 […]
Ensayos de actividad de endopeptidasa redirigida basados en inmunología, del 2 de Octubre de 2019, de ALLERGAN, INC.: Método para detectar actividad endopeptidasa redirigida, comprendiendo el método las etapas de: a) tratar una célula de una línea celular establecida […]
Ensayos de actividad de serotipo A de toxina botulínica de base inmunológica, del 24 de Julio de 2019, de ALLERGAN, INC.: Método de detección de actividad de NTBo/A en un mamífero, que comprende las etapas de: a. tratar una célula de una línea celular establecida que expresa SNAP-25 con una muestra […]
Hemocultivo del mismo día con microscopia digital, del 3 de Julio de 2019, de Accelerate Diagnostics, Inc: Un método, que comprende las etapas de: a) introducir un medio de cultivo, un agente lítico y una enzima de escisión de desechos celulares en una muestra de sangre, […]