Métodos y agentes que mejoran la dirección a las células tumorales que expresan CD138.

Un inmunoconjugado dirigido a las células tumorales que expresan CD138 de un sujeto disminuyendo la adhesión de las células del estroma a las células tumorales que expresan CD138,

en el que el inmunoconjugado comprende una molécula efectora y un anticuerpo dirigido modificado, en el que la molécula efectora y el anticuerpo dirigido modificado están unidos entre sí mediante un enlazador escindible,

en el que la molécula efectora es un inhibidor de la polimerización de tubulina,

en el que el anticuerpo dirigido modificado comprende una región variable de la cadena pesada que comprende los restos de aminoácidos 31 a 35 (CDR1), 51 a 68 (CDR2) y 99 a 111 (CDR3) de la SEC ID Nº 1, y una región variable de la cadena ligera que comprende los restos de aminoácido 24 a 34 (CDR1), 50 a 56 (CDR2) y 89 a 97 (CDR3) de la SEC ID Nº 2,

y en el que el inmunoconjugado es para su uso con un agente citotóxico adicional, en el que el inmunoconjugado y el agente citotóxico adicional son para administrarse consecutivamente y en el que la administración del agente citotóxico adicional se realiza después de la administración del inmunoconjugado.

detaiiada de varias reaiizaciones preferidas de ia invención

La presente descripción se refiere a ¡nmunoconjugados que comprenden agentes dirigidos a CD138 y el suministro de la molécula(s) efectora(s) de los ¡nmunoconjugados a los sitios diana y la liberación específica del sitio de la molécula(s) efectora(s) en o cerca de las células, tejidos u órganos diana. Las moléculas efectoras se pueden activar por escisión/disociación de la parte del agente de dirección del inmunoconjugado en el sitio diana. La presente invención se refiere particularmente al uso de estos ¡nmunoconjugados para combatir el crecimiento tumoral in vivo y

al uso de la capacidad de estos ¡nmunoconjugados para superar o disminuir los mecanismos protectores que se encuentran en el mlcroamblente de la médula ósea.

Los ¡nmunoconjugados de acuerdo con la presente Invención se pueden administrar a un sujeto que necesita del tratamiento terapéutico o a las células aisladas de tal sujeto que necesita el tratamiento terapéutico. La molécula o moléculas efectoras se pueden liberar del ¡nmunoconjugado poresclslón/dlsoclaclón en, o cerca de la célula, tejido u órgano diana.

En un ejemplo de la descripción, el ¡nmunoconjugado comprende el anticuerpo nBT062, que se dirige a las células que expresan CD138, y al menos un fármaco altamente cltotóxlco o toxina como molécula efectora, se administra a un paciente con cáncer. Es este ejemplo, se administra por vía Intravenosa a una cantidad terapéuticamente eficaz del ¡nmunoconjugado a un paciente de forma que se concentra en las células del cáncer. La molécula o moléculas efectoras se liberan entonces del anticuerpo por medios naturales. Después o durante la escisión, la molécula efectora se puede estabilizar por alqullaclón y puede difundirse rodeando las células auxiliares tales como las células del estroma que no expresan CD138.

En un ejemplo de la Invención, el ¡nmunoconjugado comprende el anticuerpo nBT062, que se dirige a las células que expresan CD138, y al menos un fármaco altamente cltotóxlco o toxina como molécula efectora, y un agente cltotóxlco adicional, se administra a un paciente con cáncer. En este ejemplo, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz del ¡nmunoconjugado y el agente cltotóxlco consecutivamente. Primero se administra el ¡nmunoconjugado por vía Intravenosa a un paciente de forma que se concentra en las células cancerosas del mlcroamblente de la médula ósea. El ¡nmunoconjugado supera sustancialmente la resistencia a los fármacos mediada por la adhesión celular (CAM-DR) y destruye una parte sustancial de las células tumorales que expresan CD138 en el mlcroamblente de la médula ósea. En particular, la molécula(s) efectora(s) se libera del anticuerpo or medios naturales y destruye las células tumorales. El ¡nmunoconjugado al menos en parte evita la adhesión de las células tumorales a las células del estroma, algunas de las cuales se pueden destruir por la difusión de la molécula efectora. Tras un Intervalo de tiempo de 12 horas, se administra el agente citotóxico. El agente citotóxico, cuya actividad al menos se reduce normalmente por la CAM-DR puede actuar sobre las células tumorales que no están asociadas con las células del estroma y destruir las células tumorales que expresan CD138, que escaparon a la acción del ¡nmunoconjugado.

CD138 o Slndecan-1 (también descrito como SYND1; SYNDECAN; SDC; SCD1; ANTIGENO CD138, número de registro SwissProt: P18827 humano) es una glucoproteína de membrana que se describió originalmente por estar presente en las células de origen epitelial, y posteriormente se encontró en células hematopoyéticas (Sanderson, 1989). El CD138 tiene un largo dominio extracelular que se une a moléculas solubles (por ejemplo, los factores de crecimiento EGF, FGF, HGF) y a moléculas ¡nsolubles (por ejemplo, a los componentes de la matriz extracelular, colágeno yfibronectina) por medio de cadenas de sulfato de heparano (Langford, 1998; Yang, 2007) y actúa como un receptor para la matriz extracelular. El CD138 también media en la adhesión célula a célula por medio de las moléculas de unión a heparina expresadas por las células adherentes. Se ha demostrado que el CD138 tiene un papel como co-receptor para los factores de crecimiento de las células de mieloma (Bisping, 2006). Los estudios en diferenciación de células plasmáticas demostraron que el CD138 también se debe considerar como un antígeno de diferenciación (Bataille, 2006).

En la hematopoyesis maligna, el CD138 se expresa altamente en la mayoría de las células del MM, carcinoma ovárico, carcinoma de riñón, carcinoma de vesícula, carcinoma de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, células de carcinoma de colon y células de linfomas de Fiodgkin y no Flodgkin, leucemia linfocítica crónica (CLL) (Fiorvathova, 1995), leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloblástica aguda (AML) (Seftalioglu, 2003 (a); Seftalioglu, 2003 (b)), sarcomas de tejidos sólidos, carcinomas de colon así como otras enfermedades malignas hematológicas y tumores sólidos que expresan CD138 (Carbone et al., 1999; Sebestyen et al., 1999; Flan et al., 2004; Charnaux et al., 2004; O'Connell et al.,2004; Orosz y Kopper, 2001).

Otros cánceres en los que se ha demostrado que son positivos a la expresión de CD138 son muchos adenocarcinomas ováricos, carcinomas de células transicionales de vejiga, carcinoma de células claras de riñón, carcinoma de pulmón de células escamosas; carcinomas de mama y cánceres uterinos (véase, por ejemplo, Davies et al., 2004; Barbareschi et al., 2003; Mennerich et al., 2004; Anttonen et al., 2001; Wijdenes, 2002).

En el compartimento hematopoyético normal humano, la expresión de CD138 se restringe a las células plasmáticas ((Wijdenes, 1996; Chilosi, 1999) y el CD138 no se expresa en linfocitos, monocitos y granulocitos de sangre periférica, y glóbulos rojos. En particular, las células madre CD34* y progenitoras no expresan CD138 y los mAb anti- CD138 no afecta el número de unidades formadoras de colonias en los cultivos de células madre hematopoyéticas (Wijdenes, 1996). En los compartimentos no hematopoyéticos, el CD138 se expresa principalmente en el epitelio simple y estratificado del pulmón, hígado, piel, riñón e intestino. Solo se vio una débil tinción en las células endoteliales (Bernfield, 1992; Vooijs, 1996). Se ha informado de que existe CD138 en formas polimórficas en las células de linfoma humano (Gattei, 1999).

Se ha informado que los anticuerpos monoclonales BC/B-B4, B-B2, DL-101, 1 D4, MI15, 1.BB.210, 2Q1484, 5F7,

104-9, 281-2 en particular B-B4 son específicos para el CD138 y se demostró que reconocían el mismo o epítopos estrechamente relacionados (Gattei, 1999). Estudios previos comunicaron que B-B4 no reconocía CD138 soluble, sino solamente el CD138 de la membrana en forma unida (Wijdenes, 2002).

El B-B4 es un mAb lgG1 murino, que se une a un epítopo lineal entre los restos 90-95 de la proteína central del sindecan-1 humano (CD138) (Wijdenes, 1996; Dore, 1998). En consonancia con el patrón de expresión de CD138, se demostró que el B-B4 reaccionaba fuertemente con la linea celular plasmática RPMI8226, pero no reaccionaba con células endoteliales. También en consonancia con el patrón de expresión de CD138, el B-B4 reacciona también con líneas de células epiteliales A431 (derivado de queratinocitos) y HepG2 (derivado de hepatocitos). Una inmunotoxina B-B4-saponina también era altamente tóxica para la línea celular plasmática RPMI8226, de hecho considerablemente más tóxica que la saponina libre. Sin embargo, en las dos líneas celulares epiteliales, la B-B4- saponina solo mostraba toxicidad para la línea celular A431, aunque en un ensayo clonogénico la BB4-saponina no mostraba un efecto inhibidor en el crecimiento de células A431 (Vooijs, 1996). Otros investigadores comunicaron falta de especificidad de los antígenos asociados a MM contra los tumores (Couturier, 1999).

Un antlcuerpo/inmunoconjugado "consiste esencialmente en" ciertos componentes, significa en el contexto de la presente Invención que el anticuerpo/inmunoconjugado consiste en los componentes especificados y cualquiera de los materiales adicionales o componentes que no afectan materialmente las características básicas del anticuerpo.

La presente Invención utiliza la expresión "célula tumoral" para incluir las células del cáncer así como las células precancerosas que pueden formar parte o no de un tumor sólido.

Un "agente dirigido" de acuerdo con la presente descripción es capaz de asociarse con una molécula expresada por una célula diana e Incluye péptldos y no péptidos. En particular, los agentes dirigidos de acuerdo con... [Seguir leyendo]

1. Un ¡nmunoconjugado dirigido a las células tumorales que expresan CD138 de un sujeto disminuyendo la adhesión de las células del estroma a las células tumorales que expresan CD138, en el que el ¡nmunoconjugado comprende una molécula efectora y un anticuerpo dirigido modificado, en el que la molécula efectora y el anticuerpo dirigido modificado están unidos entre sí mediante un enlazador escindióle,

en el que la molécula efectora es un Inhibidor de la polimerización de tubullna,

en el que el anticuerpo dirigido modificado comprende una reglón variable de la cadena pesada que comprende los restos de aminoácidos 31 a 35 (CDR1 ), 51 a 68 (CDR2) y 99 a 111 (CDR3) de la SEC ID N° 1, y una región variable de la cadena ligera que comprende los restos de aminoácido 24 a 34 (CDR1), 50 a 56 (CDR2) y 89 a 97 (CDR3) de la SEC ID N°2,

y en el que el ¡nmunoconjugado es para su uso con un agente cltotóxico adicional, en el que el ¡nmunoconjugado y el agente cltotóxico adicional son para administrarse consecutivamente y en el que la administración del agente cltotóxico adicional se realiza después de la administración del ¡nmunoconjugado.

2. El ¡nmunoconjugado de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el enlazador escindióle contiene un enlace disulfuro, y preferentemente en el que el enlazador es SPP o SPDB.

3. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicha disminución de la adhesión da como resultado el alivio de la resistencia a fármacos mediada por la adhesión.

4. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la resistencia a fármacos mediada por la adhesión contra el agente cltotóxico adicional está disminuida y en el que dicho agente citotóxico adicional se administra en una cantidad que Inhibe, retrasa y/o previene el crecimiento de las células tumorales.

5. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que dicho agente citotóxico es melfalán, vlncrlstlna, doxorrublclna, dexametasona, clclofosfamlda, etopósldo, cltarablna, clsplatino, talidomida, prednisona, bortezomlb, lenalldomlda, sorafenib, romldepslna o combinaciones de los mismos, o en el que el agente citotóxico está basado en anticuerpo.

6. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en el que dicha molécula efectora está estérlcamente Impedida.

7. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en el que la molécula efectora es al menos un maltanslnolde, o un análogo del mismo.

8. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que la molécula efectora es al menos un maltanslnolde tal como DM1, DM3, o DM4, yes preferentemente DM4.

9. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo dirigido modificado del ¡nmunoconjugado comprende:

una secuencia de aminoácidos de una cadena pesada de ¡nmunoglobulina que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90%, al menos el 95% o al menos el 98% con la SEC ID N° 1.

10. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el anticuerpo dirigido modificado del ¡nmunoconjugado comprende una cadena pesada de ¡nmunoglobulina que tiene una SEC ID N° 1, y una secuencia de cadena ligera que tiene una SEC ID N° 2.

11. El ¡nmunoconjugado para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 4 y 5, en el que dicho sujeto es un paciente de cáncer que padece uno de los siguientes cánceres: mieloma múltiple, carcinoma ovárico, carcinoma de riñón, carcinoma de vesícula, carcinoma de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, carcinoma de colon, llnfoma de Hodgkin y no Hodgkin, leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mleloblástlca aguda (AML) o un sarcoma tisular sólido, y preferentemente en el que dicho paciente padece mieloma múltiple.

12. El uso de un ¡nmunoconjugado dirigido a las células tumorales que expresan CD138 para la fabricación de un medicamento para tratar células tumorales de un sujeto que expresan CD138 disminuyendo la adhesión de las células del estroma a las células tumorales que expresan CD138, en el que el ¡nmunoconjugado comprende una molécula efectora y un anticuerpo dirigido modificado, en el que la molécula efectora y el anticuerpo dirigido modificado están unidos entre sí por medio de un enlazador escindióle,

en el que la molécula efectora es un inhibidor de la polimerización de tubulina,

en el que el anticuerpo dirigido modificado comprende una región variable de la cadena pesada que comprende los restos de aminoácidos 31 a 35 (CDR1), 51 a 68 (CDR2) y 99 a 111 (CDR3) de la SEC ID N° 1, y una región variable de la cadena ligera que comprende los restos de aminoácido 24 a 34 (CDR1), 50 a 56 (CDR2) y 89 a 97 (CDR3) de la SEC ID N°2,

y en el que el inmunoconjugado es para su uso con un agente citotóxico adicional, en el que el ¡nmunoconjugado y el agente citotóxico adicional son para administrarse consecutivamente y en el que la administración del agente citotóxico adicional se realiza después de la administración del ¡nmunoconjugado.

5 13. El uso de un ¡nmunoconjugado dirigido a las células tumorales que expresan CD138 y un agente citotóxico

adicional para la fabricación de una preparación combinada para su uso secuencial en el tratamiento de células tumorales de un sujeto que expresan CD138, en el que el ¡nmunoconjugado comprende una molécula efectora y un anticuerpo dirigido modificado, en el que la molécula efectora y el anticuerpo dirigido modificado están unidos entre sí mediante un enlazadorescindible,

10 en el que la molécula efectora es un inhibidor de la polimerización de tubulina,

en el que el anticuerpo dirigido modificado comprende una región variable de la cadena pesada que comprende los restos de aminoácidos 31 a 35 (CDR1), 51 a 68 (CDR2) y 99 a 111 (CDR3) de la SEC ID N° 1, y una región variable de la cadena ligera que comprende los restos de aminoácido 24 a 34 (CDR1), 50 a 56 (CDR2) y 89 a 97 (CDR3) de la SEC ID N°2,

15 en el que el ¡nmunoconjugado es para administrarse para disminuir la adhesión de las células del estroma a las células tumorales que expresan CD138, y en el que la administración del agente citotóxico adicional es para administrarse después de la administración del ¡nmunoconjugado.